2010版药典无菌检查法培训

1、无菌检查无菌检查 -2010-2010版药典版药典2009.06.102009.06.10 根据无菌检查增修定内容起草的指导思想和根据无菌检查增修定内容起草的指导思想和起草的基本原则并参照美国药典第起草的基本原则并参照美国药典第3030版、版、3131版和版和欧洲药典第欧洲药典第6 6版无菌检查法收载的内容对版无菌检查法收载的内容对中国药中国药典典一部、二部附录的无菌检查法进行了修订，一部、二部附录的无菌检查法进行了修订，三三部附录的无菌检查法向一、二部靠拢部附录的无菌检查法向一、二部靠拢， 20102010年版年版药典主要增修订内容如下：药典主要增修订内容如下：一、进一步确定了无菌检查法的定

2、义：一、进一步确定了无菌检查法的定义：无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。二、无菌检查保障二、无菌检查保障1 1、无菌环境规定要防止微生物污染，但、无菌环境规定要防止微生物污染，但防止污染的措施防止污染的措施不得影响供试品中微生物的生长。不得影响供试品中微生物的生长。2 2、日常检验还需对试验环境进行监控。、日常检验还需对试验环境进行监控。3 3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌 技术的培训技术

3、的培训。1 1、培养基的制备培养基的制备及培养条件及培养条件CP2005CP2005CP2010CP2010培养基的制备培养基的制备培养基的制备培养基的制备及培养条件及培养条件选择性培养基选择性培养基: :加入适量的加入适量的中和剂或表面活性剂，中和剂或表面活性剂，如对氨基苯甲酸如对氨基苯甲酸( (用于磺胺类供试品用于磺胺类供试品) )、聚山梨酯聚山梨酯80(80(用于非水溶性供试品用于非水溶性供试品) )或或-内酰胺酶内酰胺酶( (用于用于-内酰胺类供试品内酰胺类供试品) )等，中和剂或表面活性剂的等，中和剂或表面活性剂的用量应用量应通通过验证过验证。选择性培养基选择性培养基: :加入适量的

4、中和剂、加入适量的中和剂、灭活剂或表灭活剂或表面活性剂，其面活性剂，其用量用量同验证试验同验证试验。2 2、培养基灵敏度试验用菌种培养基灵敏度试验用菌种CP2005CP2005CP2010CP2010铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌（pseudomonasaeruginosapseudomonasaeruginosa）金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（staphycococcusstaphycococcus）枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilisBacillus subtilis生孢梭菌生孢梭菌(Clostridium sporogenes)(Clostridium sporog

5、enes)白色念球菌（白色念球菌（Candida albicansCandida albicans）黑曲霉（黑曲霉（Aspergillus nigerAspergillus niger）大肠埃希菌（大肠埃希菌（Escherichia coliEscherichia coli）金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（staphycococcusstaphycococcus）枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilisBacillus subtilis生孢梭菌生孢梭菌(Clostridium sporogenes)(Clostridium sporogenes)白色念球菌（白色念球菌（C

6、andida albicansCandida albicans） 黑曲霉（黑曲霉（Aspergillus nigerAspergillus niger）20052005版药典增版药典增补版即有补版即有3 3、培养基的适用性检查、培养基的适用性检查 -菌液的制备、保存菌液的制备、保存CP2005CP2010接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养丁琼脂斜面培养基中，培养5 57 7天，加入天，加入3 35ml 5ml 0.90.9%无菌氯化钠无菌氯化钠溶液溶液，将孢子洗脱。然后，将孢子洗脱。然后，吸出孢吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花子悬液（用管口

7、带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用至无菌试管内，用0.9%0.9%无菌氯化无菌氯化钠溶液钠溶液制成每制成每1ml1ml含孢子数含孢子数5050100cfu100cfu的孢子悬液。的孢子悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养斜面培养基中，培养5 57 7天，加入天，加入3 35ml 5ml 含含0.050.05（v/vv/v）聚山梨酯）聚山梨酯8080的的0.9%0.9%无菌氯化钠溶液无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，将孢子洗脱。然后，用用适宜方法吸出孢子悬液适宜方法吸出孢子悬

8、液至无菌试管内，用至无菌试管内，用含含0.050.05（v/vv/v）聚山梨酯）聚山梨酯8080的的0.90.9%无菌无菌氯化钠溶液氯化钠溶液制成每制成每1ml1ml含孢子数含孢子数5050100100cfucfu的孢子悬液。的孢子悬液。无无菌悬液在室温下放置应在菌悬液在室温下放置应在2 2小时内使用，小时内使用，若保存在若保存在2 288可以在可以在2424小时内使用。小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在黑曲霉孢子悬液可保存在2 288，在验证，在验证过的贮存期内使用。过的贮存期内使用。本版药典重大本版药典重大变动之一变动之一4 4、稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液及其制备方法CP20

9、05CP2005CP2010CP2010如需要，可在上述稀释液或冲如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等面活性剂或中和剂等 。3 3。根据供试品的特性，可选用其他经验证过根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等灭菌后加入表面活性剂或中和剂等 。5 5、方法验证试验方法验证试验CP2005CP2005CP2010CP2010当建立当建立药品药品的无菌检查法时，应进行的无菌

10、检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适方法的验证，以证明所采用的方法适合于该合于该药品药品的无菌检查。若的无菌检查。若药品药品的组的组分或原检验条件发生改变时，检查方分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。法应重新验证。当建立当建立产品产品的无菌检查法时，应进行的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适方法的验证，以证明所采用的方法适合于该合于该产品产品的无菌检查。若的无菌检查。若产品产品的组的组分或原检验条件发生改变时，检查方分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。法应重新验证。菌种及菌液制备菌种及菌液制备 同培养基灵敏度检查。同培养基灵敏度检查。菌种及菌液

11、制备菌种及菌液制备 除大肠埃希菌（除大肠埃希菌（Escherichia coliEscherichia coli）CMCC(B) 4 4102CMCC(B) 4 4102外，金黄色葡萄外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检同培养基灵敏度检查。查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌葡萄球菌。5 5、方法验证试验方法验证试验-薄膜过滤法薄膜过滤法CP2005CP2005CP2010CP2010将规定量的供试品将规定量的供试品按薄膜过滤法按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中过

12、滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于加入小于100cfu100cfu的试验菌，过滤。取的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。的容器，加入等量试验菌，作为对照。按规定温度培养按规定温度培养3 35 5天。各试验菌同天。各试验菌同法操作。法操作。 取每种培养基规定接种的供试品取每种培养基规定接种的供试品总量总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于后一

13、次的冲洗液中加入小于100cfu100cfu的的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按规定温度培养试验菌，作为对照。按规定温度培养3 35 5天。各试验菌同法操作。天。各试验菌同法操作。 5 5、方法验证试验方法验证试验-直接接种法直接接种法CP2005CP2005CP2010CP2010取符合直接接种法培养基用量要取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流

14、体培养基求的硫乙醇酸盐流体培养基8 8管，分别管，分别接入小于接入小于100cfu100cfu的金黄色葡萄球菌、的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各梭菌各2 2管；取符合直接接种法培养基管；取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基用量要求的改良马丁培养基4 4管，分别管，分别接入小于接入小于100cfu100cfu的白色念珠菌、黑曲的白色念珠菌、黑曲霉各霉各2 2管。其中管。其中1 1管接入管接入规定量规定量的供试的供试品，另品，另1 1管作为对照，管作为对照，按按规定的温度培规定的温度培养养3 35 5天。天。 取符合直接接种法培养基

15、用量要取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基求的硫乙醇酸盐流体培养基8 8管，分别管，分别接入小于接入小于100cfu100cfu的金黄色葡萄球菌、的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各菌各2 2管；取符合直接接种法培养基用管；取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基量要求的改良马丁培养基4 4管，分别接管，分别接入小于入小于100cfu100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的白色念珠菌、黑曲霉各各2 2管。其中管。其中1 1管接入管接入每管培养基规定每管培养基规定的供试品，另的供试品，另1 1管作为对照，管作为对照，置置规定的规定

16、的温度培养温度培养3 35 5天。天。5 5、方法验证试验方法验证试验-结果判断结果判断CP2005CP2005CP2010CP2010与对照管比较，如含供试品各容与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则供试品器中的试验菌均生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查法和检查条件进行供试品的无菌检查法和检查条件进行供试品的无菌检查。检查。 如含供试品的任一容器中如含供试品的任一容器中微生物微生物生长微弱、缓慢或不生长，则供试品生长微弱、缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验

17、条件下有抑菌作的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量用，可采用增加冲洗量，或，或增加培养增加培养基的用量基的用量，或，或使用中和剂或灭活剂使用中和剂或灭活剂如如内酰胺酶、对氨基苯甲酸，或内酰胺酶、对氨基苯甲酸，或更更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证。菌作用，并重新进行方法验证。 与对照管比较，如含供试品各容与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则器中的试验菌均生长良好，则说明说明供供试品的该检验量在该检验条件下无抑试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，

18、照此检查方法和检查条件进行供试品照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。的无菌检查。 如含供试品的任一容器如含供试品的任一容器中中的试验菌的试验菌生长微弱、缓慢或不生长生长微弱、缓慢或不生长，则，则说明说明供试品的该检验量在该检验供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量量、增加培养基的用量、使用中和剂增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证法验证试验试验。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查-检验量检验量CP2005CP2

19、005CP2010CP2010是指一次试验所用的供试品总量是指一次试验所用的供试品总量（g g或或mlml）。除另有规定外，每份培养）。除另有规定外，每份培养基接种供试品的量按表基接种供试品的量按表2 2、表、表3 3规定。规定。采用直接接种法时，采用直接接种法时，若每支（瓶）供若每支（瓶）供试品的装量按规定足够接种两份培养试品的装量按规定足够接种两份培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基。采用薄膜过养基和改良马丁培养基。采用薄膜过滤法时，滤法时，检验量应不少于直接接种法检验量应不少于直接接种法的供试品总接种量，的供试品总接种量，只要供试品特性

20、只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。过滤。 是指一次试验所用的供试品总量是指一次试验所用的供试品总量（g g或或mlml）。除另有规定外，每份培）。除另有规定外，每份培养基接种供试品的量按表养基接种供试品的量按表2 2、表、表3 3规定规定。若每支（瓶）供试品的装量按规定。若每支（瓶）供试品的装量按规定足够接种两份培养基，则应分别接种足够接种两份培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基。采用薄膜过滤法时，只要供试养基。采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部品特性允许，应将所有容器

21、内的全部内容物过滤。内容物过滤。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查-阳性对照阳性对照CP2005CP2005CP2010CP2010应根据供试品特性选择阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同性对

22、照试验的菌液制备同培养基灵敏培养基灵敏度检查（大肠埃希菌的菌液制备同培度检查（大肠埃希菌的菌液制备同培养基的灵敏度检查中的金黄色葡萄球养基的灵敏度检查中的金黄色葡萄球菌）菌），加菌量小于，加菌量小于100cfu100cfu，供试品用量，供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养样品量。阳性对照管培养484872 72 小时小时应生长良好。应生长良好。应根据供试品特性选择阳性对照菌应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革

23、兰阴性菌为主的供试品以大肠；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同对照试验的菌液制备同方法验证试验方法验证试验，加菌量小于，加菌量小于100cfu100cfu，供试品用量同，供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养品量。阳性对照管培养484872 72 小时小时应生长良好。应生长良好。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查-阴性对照阴性对照

24、CP2005CP2005CP2010CP2010供试品无菌检查时，应取相应溶供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液同法操作，作为阴性对照剂和稀释液同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。阴性对照不得有菌生长。 无菌试验过程中，若需使用表面活无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物明其有效性，且对微生物生长及存活生长及存活无影响。无影响。 供试品无菌检查时，应取相应溶供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液剂和稀释液、冲洗液、冲洗液同法操作，作为同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。阴性对照。阴性对照不得有菌

25、生长。 无菌试验过程中，若需使用表面无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物证明其有效性，且对微生物无毒性无毒性。5 5、供试品无菌检查供试品无菌检查-阴性对照阴性对照CP2005CP2005CP2010CP2010无菌检查法包括薄膜过滤法和直无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品性状允许，应接接种法。只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。采用薄膜过滤法。进行供试品无菌检进行供试品无菌检查时，查时，所采用的检查方法和检验条件所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。应与验证的方法相同。 操作时，用适宜的消

26、毒液对供试操作时，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒，品容器表面进行彻底消毒，如果容器如果容器内内有一定的真空度，可用适宜的无菌有一定的真空度，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头）器材（如带有除菌过滤器的针头）向向供试品容器供试品容器内导入无菌空气，再按无内导入无菌空气，再按无菌操作起开容器取出内容物菌操作起开容器取出内容物。 无菌检查法包括薄膜过滤法和直无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品性状允许，应接接种法。只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。采用薄膜过滤法。供试品无菌检查供试品无菌检查所所采用的检查方法和检验条件应与验证采用的检查方法和检验条件应与验证的方法

27、相同。的方法相同。 操作时，用适宜的消毒液对供试操作时，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒，品容器表面进行彻底消毒，如果供试如果供试品容器内品容器内有一定的真空度，可用适宜有一定的真空度，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头）头）向容器内向容器内导入无菌空气，再按无导入无菌空气，再按无菌操作起开容器取出内容物菌操作起开容器取出内容物。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查-供试品处理及接种培养基供试品处理及接种培养基CP2005CP2005CP2010CP2010薄膜过滤法应优先采用封闭式薄薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也可使用一般薄膜过滤器

28、膜过滤器，也可使用一般薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应不大于。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45m0.45m。直径约为。直径约为50mm50mm。根据供试。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。滤品及其溶剂的特性选择滤膜材质。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。的完整性。薄膜过滤法应优先采用封闭式薄薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也可使用一般薄膜过滤器膜过滤器，也可使用一般薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应不大于。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0 0.45m.45m。直径约为。直径约

29、为50mm50mm。根据供。根据供试试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。品及其溶剂的特性选择滤膜材质。抗抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜。膜。滤器及滤膜使用前应采用适宜的滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。滤前后的完整性。明确抗生素检明确抗生素检品检验注意点品检验注意点6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查-供试品处理及接种培养基供试品处理及接种培养基CP2005CP2005CP2010CP2010薄膜过滤法薄膜过滤法 供试液经薄膜过滤后，若需要用供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每

30、张滤膜每次冲洗冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为量为100ml100ml，且总冲洗量不宜过大，以，且总冲洗量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。避免滤膜上的微生物受损伤。薄膜过滤法薄膜过滤法供试液经薄膜过滤后，若需要用供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量量一般一般为为100ml100ml，且，且总冲洗量不得超总冲洗量不得超过过1000ml1000ml，以避免滤膜上的微生物受以避免滤膜上的微生物受损伤。损伤。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 薄膜过滤法薄膜过滤法 -供试品处理及接种培养基供试品处理及接种培养基CP2005CP200

31、5CP2010CP2010 供试液经薄膜过滤后，若需要用供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为量为100ml100ml，且总冲洗量不宜过大，以，且总冲洗量不宜过大，以避免滤膜上的微生物受损伤。避免滤膜上的微生物受损伤。供试液经薄膜过滤后，若需要用供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量量一般一般为为100ml100ml，且，且总冲洗量不得超总冲洗量不得超过过1000ml1000ml，以避免滤膜上的微生物受以避免滤膜上的微生物受损伤。损伤。本版药典重大变动之二本版药典重大变动之二6 6

32、、供试品无菌检查供试品无菌检查 薄膜过滤法薄膜过滤法 -可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试品 CP2005CP2005CP2010CP2010 取规定量，混合至适量的无菌十四烷酸异丙酯中，剧烈振摇，使供试品充分溶解，如果需要可适当加热，但温度不得超过44，趁热迅速过滤。若无法过滤，应若无法过滤，应加入不少于100ml 的稀释液，充分振摇萃取，静置，取下层水相作为供试液过滤。过滤后滤膜冲洗及培养基接种培养基接种照非水溶性制剂供试品项下的方法操作。 取规定量，混合至适量的无菌十四烷酸异丙酯中，剧烈振摇，使供试品充分溶解，如果需要可适当加热，但温度不得超过44，趁热迅速过滤。对仍然无法过滤的供

33、试品，于含对仍然无法过滤的供试品，于含有适量的无菌十四烷酸异丙酯中的供有适量的无菌十四烷酸异丙酯中的供试液中试液中加入不少于100ml 的稀释液，充分振摇萃取，静置，取下层水相作为供试液过滤。过滤后滤膜冲洗及接接种培养基种培养基照非水溶性制剂供试品项下的方法操作。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 薄膜过滤法薄膜过滤法 -无菌气（喷）雾剂供试品 CP2005CP2005CP2010CP2010 取规定量，将各容器置冰室冷冻约1 小时。以无菌操作迅速在容器上端钻一小孔，释放抛射剂后再无菌开启容器，然后照水溶液或非水溶性制剂供试品项下的方法操作。 取规定量，将各容器置至少2020的冰室冷冻约1

34、小时。以无菌操作迅速在容器上端钻一小孔，释放抛射剂后再无菌开启容器，并将供试并将供试液转移至无菌容器中，液转移至无菌容器中，然后照水溶液或非水溶性制剂供试品项下的方法操作。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 薄膜过滤法薄膜过滤法 -装有药物的注射器供试品 CP2005CP2005CP2010CP2010 取规定量，装上无菌针头（非包装上无菌针头（非包装中所配带的），装中所配带的），若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，然后按水水溶液或非水溶性制剂供试品项下的方溶液或非水溶性制剂供试品项下的方法操作法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的无菌针头的无菌检查 取规定量，排出注射器中的内容

35、排出注射器中的内容物，物，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，直接过滤，或混合采用直接过滤，或混合采用薄膜过滤法过滤除菌至含适量稀释液薄膜过滤法过滤除菌至含适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤。的无菌容器内，混匀，立即过滤。然后按水溶性供试品项下水溶性供试品项下方法操作。 同时应采用直接接种法进行包装中所配带的无菌针头的无菌检查。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 薄膜过滤法薄膜过滤法 -装有药物的注射器供试品 CP2005CP2005CP2010CP2010 取规定量，装上无菌针头（非包装上无菌针头（非包装中所配带的），装中所配带的），若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，然后按水

36、水溶液或非水溶性制剂供试品项下的方溶液或非水溶性制剂供试品项下的方法操作法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的无菌针头的无菌检查 取规定量，排出注射器中的内容排出注射器中的内容物，物，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，直接过滤，或混合采用直接过滤，或混合采用薄膜过滤法过滤除菌至含适量稀释液薄膜过滤法过滤除菌至含适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤。的无菌容器内，混匀，立即过滤。然后按水溶性供试品项下水溶性供试品项下方法操作。 同时应采用直接接种法进行包装中所配带的无菌针头的无菌检查。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 直接接种法直接接种法CP2005CP2005CP2010C

37、P2010 直接接种法即每支（或瓶）供试品每支（或瓶）供试品按规定量按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10ml。培养基的用量和高度同方法验证试验；每种培养基接种的管数同每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。供试品的检验数量。 直接接种法即取规定量供试品取规定量供试品分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体

38、积的10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10ml。培养基的用量和高度同方法验证试验；6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 直接接种法直接接种法 -固体制剂供试品 CP2005CP2005CP2010CP2010取规定量直接接种至各管培养基中。或加入适宜的稀释剂稀释剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定量接种至各管培养基中。 取规定量直接接种至各管培养基中。或加入适宜的溶剂溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定量接种至各管培养基中。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 直接接种法直接接种法 -有抑菌活性的供试品CP2005CP2005CP2010CP2

39、010-内酰胺类或磺胺类内酰胺类或磺胺类供试品 取规定量，混合，加入适量的无菌-内酰胺酶溶液或对氨基苯甲酸溶内酰胺酶溶液或对氨基苯甲酸溶液中使中和液中使中和，接种至各管培养基中。或直接接入含含-内酰胺酶或对氨基苯内酰胺酶或对氨基苯甲酸甲酸的各管培养基中。有抑菌活性的有抑菌活性的供试品 取规定量，混合，加入适量的无菌中和剂或灭活剂中和剂或灭活剂，然后接种至各管培养基中。或直接接入含适量中和剂含适量中和剂或灭活剂或灭活剂的各管培养基中。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 直接接种法直接接种法 -敷料供试品CP2005CP2005CP2010CP2010 取规定数量，每个包装以无菌操作每个包装以无

40、菌操作拆开，拆开，于不同部位剪取约100mg 或1cm3cm 的供试品，接种于足以浸没供试品的适量培养基中。取规定数量，以无菌操作拆开每个包以无菌操作拆开每个包装，装，于不同部位剪取约100mg 或1cm3cm 的供试品，接种于足以浸没供试品的适量培养基中。6 6、供试品无菌检查供试品无菌检查 培养及观察培养及观察CP2005CP2005CP2010CP2010 上述含培养基的容器按规定的温度培养14 天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14 天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于或划线接种于斜面培养基上斜面培养基上，细菌培养2 天、真菌培养3 天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊