反相高效液相色谱法测定萘普生钠血浆浓度

1、    反相高效液相色谱法测定萘普生钠血浆浓度        摘要目的:建立用高效液相色谱法测定萘普生钠血浆浓度的方法。方法:血浆样品在酸性条件下,以1,2-二氯乙烷提取,吲哚美辛为内标,采用Lichrosorb C18(5 m)柱,流动相为甲醇醋酸-醋酸铵缓冲液(pH 4.5)=7426,流速为1.0 ml.min-1结果:线性范围在190 g.ml-1(r=0.999 9,最低检测浓度为0.4 g.ml-1血浆,RSD%<3.5。结论:本方法可用于萘普生钠的药物动力

2、学研究。关键词萘普生,萘普生钠,高效液相色谱法 RP-HPLC determination of naproxen sodiumin human plasmaZhou Meihua,Duan Gengli,Huang Jianmin(Department of Analytical Chemistry,Shanghai Medical University,Shanghai 200032)ABSTRACTOBJECTIVE:To establish an RP-HPLC method for determining plasma level of naproxen sodium.METHODS

3、:Naproxen extracted by 1,2-dichloroethane could be detected at 318 nm.An RP-C18 was used as the stationary phase and a solution composed of methanol:HAc-NH4Ac buffer(pH 4.5) (7425) as the mobile phase with a flow rate of 1.0 ml.min-1.Antifan was used as an internal standard.RESULTS:The peak area rat

4、io of naproxen and internal standard against naproxen concentration was linear with a correlation coefficicent of 0.999 9 over the range of 1 g.ml-1 to 90 g.ml-1.The minimal detectable concentration of this method was 0.4 g.ml-1.The average recovery was 101.5%.The RSD% was less than 3.5%.CONCLUSIONS

5、:This method is simple,precise and usable for pharmacokinetic studies in human beings.KEY WORDSnaproxen,naproxen sodium,HPLC萘普生作为非甾体消炎镇痛药,在临床上广泛应用于治疗风湿性疾病。目前文献报道的血药浓度测定方法,其前处理均用有机溶剂二次提取1.2。作者建立了用1,2-二氯乙烷一次提取的高效液相色谱(HPLC)测定法。本法具有准确、灵敏、简便等特点,为进一步研究人体内萘普生的药物动力学过程、药效学及临床血药浓度监测提供了良好的分析手段。1材料与方法1.1仪器与试药高效

6、液相色谱仪:302型输液泵,Holochrome可见-紫外检测器,SP4600色谱处理机,7125型进样阀,Lichrosorb C18(5 m)色谱柱(4.6×150 mm)。甲醇(HPLC级);1,2-二氯乙烷(分析纯);无水乙醇(分析醇);水(三蒸水)。试验片:萘普生钠片(上海罗氏制药有限公司提供,批号96试01,每片220 mg);对照片:萘普生钠片(瑞士豪夫迈罗氏制药有限公司提供,批号B0365,每片220 mg);萘普生钠标准品由上海罗氏制药有限公司提供;吲哚美辛由本校生物制剂教研室提供。用无水乙醇配制1 mg.ml-1的萘普生钠标准贮备液,精密稀释成100 g.ml-1

7、的萘普生钠标准液。内标配成100 g.ml-1。以上溶液4 冷藏备用。1.2血样含量测定方法在0.5 ml血浆样品中,加入100 l内标溶液(吲哚美辛100 g.ml-1)和0.1 ml盐酸溶液(2 mol.L-1),摇匀,加1,2-二氯乙烷5 ml,振摇30 s,离心5 min(3 000 r.min-1),取出有机层,70 水浴氮气吹干,残渣用100 l甲醇溶解,进样10 l。流动相为甲醇醋酸-醋酸铵缓冲液(pH 4.5)=7426,流速为1.0 ml.min-1,检测波长318 nm;萘普生的TR=3.35 min,内标的TR=4.71 min,分离情况良好,无杂质峰干扰,其色谱见1。1

8、空白血浆()、血浆样品()及标准溶液()2方法评价2.1血样标准曲线与检测限于空白血浆中加入萘普生钠标准溶液,使药物浓度分别为1,2,5,10,30,50,70,90 g.ml-1,按前述方法提取、测定。以萘普生与内标物的峰面积比(Y)对萘普生血浆浓度(C)作,见2得标准曲线为:Y=0.025 56 C-0.006 62,r=0.999 9。萘普生的最低检测限为20 ng,血浆最低检测浓度为0.4 g.ml-1(血浆体积为0.5 ml,S/N=2)。 2平均药血浓度-时间曲线试验片对照片2.2回收率与精密度于空白血浆中加入高、中、低(2,30,90 g.ml-1,n=5)三个浓度的萘普生钠标准

9、溶液,同前法提取、测定,结果见表1。表 1方法回收率与精密度浓度g.ml-1方法回收率%日内精密度RSD/%日间精密度RSD/%2100.73.32.930102.52.12.890101.41.21.22.3提取回收率:于空白血浆中加入高、中、低(2,30,90 g.ml-1,n=5)三个浓度的萘普生钠标准溶液同前法分析,其测定值与相应浓度萘普生标准溶液测定值的比值作为提取回收率,结果见表2。 表 2提取回收率浓度/g.ml-1提取回收率/%平均值/%RSD/%276.3±2.676.12.93076.9±3.09075.3±1.83血药浓度测定健康男性自愿者8

10、名(年龄21.6±0.5岁,体重66.2±5.1 kg),按交叉设计分别于清晨空腹服用萘普生钠试验片或对照片440 mg,以温开水200 ml送下,并于服药后0.165,0.33,0.5,0.75,1,1.5,2,3,5,8,13,24,36,48 h取静脉血3 ml,收集于加有肝素钠的离心管内,离心(3 000 r.min-1)10 min,分离得血浆,按上法测定。平均血药浓度-时间曲线见2,用3P87软件计算出主要药物动力学参数见表3。 表 38名受试者口服萘普生钠试验片和对照片440 mg后的主要药动学参数(±s)剂型TmaxCmaxAUC048 hh-1g

11、.ml-1g.min.ml-1试验片1.2±0.455.3±7.355 270.08±6 285.1对照片0.8±0.668.4±8.756 282.93±6 415.14讨论本文采用的高效液相色谱法与文献1.2不同。本文以1,2-二氯乙烷为提取溶剂,使血浆内源性杂质大为减少,一次提取率与文献2采用的乙醚二次提取率相当,使方法更简便,同时避免了用苯提取带来的毒害。缓冲溶液选择醋酸-醋酸铵(pH 4.5),使萘普生与内标的峰形得到改善。检测波长定为318 nm,在该波长下,经1,2-二氯乙烷提取的血浆内源性杂质无吸收值。通过提高灵敏度和流动相中甲醇的配比来增大萘普生的吸收值,弥补了萘普生在318 nm的吸收值比263 nm小的不足,最低血浆药物浓度可测至0.4 g.ml-1,比文献低。由于空白血浆谱无杂质峰干扰,可以大大缩短萘普生与内标的出峰时间,使得一次分析仅需5.5