课题3血红蛋白的提取和分离

1、课题 3 血红蛋白的提取和分离同步练习一、选择题1.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料的好处是（）A.血红蛋白是有色蛋白B.红细胞无细胞核C. 红细胞蛋白质含量高D.红细胞 DNA含量高2.血红蛋白呈红色的原因是（）A. 含有 O2B. 含有 COC. 含有 CO2D. 含有血红素3.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（）A.对其他分子的亲和力B.溶解度C. 所带电荷多少D. 相对分子质量的大小4.缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持（）A.温度基本不变B. pH 基本不变C. 渗透压基本不变D. 氧气浓度基本不变5.使用 SDS聚丙烯酰胺电泳的过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于(

2、 )A.电荷的多少B.分子的大小C. 肽链的多少D. 分子形状的差异6.下列操作正确的是（）A. 分离红细胞时采用低速长时间离心B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D. 透析时要用 20mmol/L 的磷酸缓冲液，透析 12h7.血红蛋白的提取和分离中，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后， 可以明显看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是（）A.无色透明的甲苯层B.脂溶性物质的沉淀层C. 血红蛋白的水溶液D. 其他杂质的暗红色沉淀物18.凝胶柱制作的顺序一般是橡皮塞打孔挖凹穴装玻璃管盖尼龙网盖尼龙纱将橡皮塞插入玻璃管接尼龙管、装螺旋夹柱顶安装带

3、玻璃管的橡皮塞A. B. C. D. 9.下列关于凝胶色谱柱的操作, 正确的是 ()A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B. 将橡皮塞下部用刀切出凹穴C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片10. 对于凝胶色谱柱的装填哪项是错误的（）A. 凝胶充分溶胀后配成凝胶悬浮液，在尼龙管打开的情况下一次性缓慢倒入色谱柱内B. 色谱柱内一旦发现有气泡产生就必须重装C. 装填时可轻轻敲打色谱柱，使凝胶装填均匀D. 当凝胶表面干燥后，用 300mL的物质的量浓度为 20mmol/L 的磷酸缓冲液充分洗涤11. 样品的加入和洗脱的操作不正确的是（）A. 加样前

4、，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B. 用吸管小心的将 1ml 透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面C. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内D. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口12. SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳在本课题中的作用是（）A.对分离蛋白质进一步纯化B.对分离的蛋白质的纯度进行鉴定C. 检测分离的蛋白质的活性D. 提高蛋白质的活性二、非选择题13. 红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其它脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列

5、有关问题：2（ 1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、_、 _和_ 。（ 2）样品处理包括红细胞的洗涤、 _、 _ 和_ 四步。红细胞洗涤次数不能过少，否则 _ ；离心速度 _和时间 _会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。（ 3）凝胶色谱柱在装填过程中，凝胶充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，在色谱柱下端的尼龙管的螺旋夹_ 的情况下，一次性缓慢倒入色谱柱内，可轻轻地敲动色谱柱，使凝胶装填均匀。（ 4）图是样品的加入与洗脱示意图，从图中可以看出，正确的加样操作是用吸管小心将透析后的样品_ 加样，正确的操作次序是_ 。14. 凝胶色谱法是60 年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由

6、于设备简单、 操作方便， 不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经在生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学等领域广泛应用，不但应用于科学研究，而且已经大规模地用于工业生产。据图回答下列问题：（ 1） a、 b 均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是_，原因是 _。（ 2）自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d 位置相当于多孔板的结构可由_替代。（ 3）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡的存在，原因是_。3（ 4）洗脱时对洗脱液的流速要求是_。若选用 SephadexG-75, 则“ G”表示 _；“ 75”表示_ 。15. 某生物兴趣小组以 - 淀粉酶为实验材料进行系

7、列实验： 一是用凝胶色谱法测定 - 淀粉酶的相对分子质量，二是用包埋法固定- 淀粉酶来探究固定化酶催化效果。请回答下列问题：（ 1）凝胶色谱法的原理是 _ 。（ 2）某人欲使用凝胶色谱法比较 - 淀粉酶、唾液淀粉酶两种蛋白质的分子质量大小，请你选择需要的材料，借用下图的实验装置，帮助其设计实验步骤，并预测实验结果，得出相关结论。实验步骤：将含有 - 淀粉酶、唾液淀粉酶两种蛋白质的混合液加入装满凝胶的玻璃管上端，用_ 进行洗脱，检测其_ 。实验结果及结论：_ 。（ 3）该小组同学用琼脂作载体，用包埋法固定淀粉酶来探究固定化酶催化效果。实验结果如下：( 注：假设加入试管中的固定化淀粉酶量与普通淀粉

8、酶量相同 )1 号试管2 号试管固定化淀粉酶普通 淀粉酶淀粉溶液60保温 5 分钟，取出冷却至室温，滴加碘液现象变蓝不变蓝该实验设计体现了_原则。41号试管变蓝的原因是_。一、选择题16. 下列哪种现象表示凝胶色谱柱的装填性能良好（）A.色带均匀、狭窄、平整B. 色谱柱内有气泡C.色谱柱内有气泡D. 色谱柱装填不均匀17.凝胶柱制作常用玻璃管，在选择玻璃管时应考虑的因素有（）玻璃管的高度玻璃管的直径样品的体积缓冲液的 pHA. B. C. D. 18.凝胶色谱法分离蛋白质中使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶（Sephadex G75） , 其中 G、 75的含义分别是（）A. G表示凝胶使用量,75

9、表示加75 g 水B. G表示凝胶交联程度,75 表示需加热至 75 C. G 表示凝胶交联程度、膨胀程度及分离范围,75表示每克凝胶及膨胀时吸水7.5 gD. G 表示凝胶膨胀体积 ,75 表示每克凝胶膨胀后体积可达75 cm 319.关于对样品处理过程分析，正确是( )A.洗涤红细胞目 是去除血浆中葡萄糖、无机盐B. 洗涤次数、离心速度及离心时间都会影响实验效果C. 洗涤过程选用的0.1的生理盐水D. 在血液中加入柠檬酸钠能够加速红细胞破裂20. 下列操作可以达到目的的选项是（）选项操作目的A溶解海藻酸钠时用大火加热海藻酸钠可以快速溶解将装有蛋白质粗制品的透析袋（玻璃纸制成）放入透析B蛋白

10、质与其他小分子化合物分离液中5C提取 DNA时，在切碎的洋葱中加入洗涤剂溶解 DNAD在 PCR扩增 DNA时加入引物合成子链的原料A.AB.BC.CD.D21. 将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾。下列哪项不是这种做法的目的（）A.提高凝胶内酶的活性B.加速凝胶膨胀，节约时间C. 除去凝胶中可能带有的微生物D. 排除胶粒内的空气22.下列有关提取和分离血红蛋白叙述，错误的是（）A.样品处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D. 可通过 SDS聚

11、丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度23.在血红蛋白分离过程中如果红色带区歪的曲、散乱、变宽，与其有关是（）A. 凝胶色谱的柱制作B. 色谱柱的装填C. 洗脱过程D. 样品的处理24. 在血红蛋白整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理目是（）A. 防止血红蛋白被氧气氧化B. 血红蛋白是一种碱性物质，需要酸中和C. 磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D. 让血红蛋白处在稳定的pH 范围内，维持其结构和功能625.用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量的大的蛋白质（）A.路程较长B. 路程较短C. 移动速度较慢D. 移动速度较快26.关于凝胶色谱操作的叙述错误的是（）A. 在进行凝胶色谱柱的装填时，装

12、填前要将色谱柱垂直固定在支架上B.在洗脱过程中加入磷酸缓冲液的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH 和体内一致C. 凝胶用缓冲液充分溶胀后配成凝胶悬浮液D. 装填凝胶时要将色谱柱下端连接的尼龙管关闭，一次性缓慢倒入色谱柱内27. 已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种物质，其分子大小、电荷的性质和数量情况如下图所示。下列叙述正确的是（）A.将样品装入透析袋中透析12h，若分子乙保留在袋内，则分子甲也保留在袋内B.若五种物质为蛋白质，则用凝胶色谱柱分离时，甲移动速度最慢C. 分子甲与分子乙所带电荷性质相同D. 若五种物质为蛋白质，用 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则

13、分子甲和分子戊形成的电泳带相距最近二、非选择题28. 图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题的：7（ 1）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有_ 功能。（ 2）甲装置中， B 是血红蛋白溶液，则 A 是 _ 。甲装置用于 _，目的是_ 。（ 3）用乙装置分离蛋白质的方法叫_，是根据 _ 分离蛋白质的有效方法。当_ 时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。（ 4）判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯化的鉴定。在鉴定的方法中使用最多的是_ 凝胶电泳。29. 红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成。我

14、们可以选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：（ 1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。其中加入柠檬酸钠的目的是 _ 。此过程是样品处理，它应包括红细胞洗涤、_、分离血红蛋白溶液。（ 2）收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这是样品的粗分离。透析的目的是_。透析的原理是_ 。透析袋由半透膜制成，常用的半透膜有_ ( 至少填 2 个 ) 。（ 3）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉进行纯度鉴定。其中通过凝胶色谱法将样品纯化的目的是_ ；支持物电泳是目前应用较为普遍的纯化蛋白质的一种方法，支持物有 _( 至少填 2 个) 。30. 试回答下列“蛋白质提取与分离实验”的有关问题：8（ 1）为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是_。（ 2）若要去除血清蛋