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文档简介

1、猫郎356%侬酣、 加89628”,藻理部编单克隆抗体制备过程中筛选杂交瘤细胞的原理和方法单克隆抗体制备过程中，有两次筛选过程，第一次是选出杂交瘤细胞（用选择培 养基），第二次是进一步选出能产生我们需要的抗体的杂交瘤细胞。第一次筛选的原理和方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选 择性培养液是在普通的动物细胞培养液中家次黄喋吟、氨基蝶吟和胸腺嚓咤核甘酸。 其一居室细胞中的DNA合成油两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其其他小分子化合物合 成氨基酸，为DNA分子的合成提供原料。再此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与 这一过程，而HA

2、T培养液中氨基蝶吟是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的D途 径。另一条途径是应急途径（“S途径”）,她是利用次黄口票吟一一鸟嗯吟磷酸核甘 转移酶和胸腺嗓咤核昔激酶催化次黄喋吟和胸腺嚓咤生成相应的核甘酸，两种酶缺一 不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞核两个效应B细胞融合的D途径被 氨基蝶吟阻断，随S途径正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10天左右 会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄 喋吟-鸟喋吟磷酸核甘转移酶缺陷型细胞，因此自身没有S途径，且D途径乂被氨基蝶 吟阻断，所有在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤细胞与效应

3、B细胞 相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的S途径，乂具有骨髓瘤细胞在体外 培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。第二次筛选的原理和方法：在单克隆抗体的生产过程中，由于效应B细胞的特异性是不同的，经HAT培养液 第一次筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体存在差异，必须对杂交瘤细胞进行第二次筛 选，选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。二次筛选通常采用有限稀释克隆细胞的方 法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，是每孔细胞不超过一个， 通过培养让其增殖，然后检测各孔上清液中的细胞分泌的抗体，上清液可与特定抗原 结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，继续进

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