2017南宁科学技术进步奖

1、2017年度南宁市科学技术进步奖推荐材料卷内目录项目名称：HLA高分辨基因分型结果模棱两可难题解决技术体系的建立与应用自治区科技成果登记号：201696492序号文件编号责任者文件材料题名日期页号12017020040南宁中心血站（南宁输血医学研究所）南宁市科学技术进步奖推荐书1-362南科验2016134 号、201696492南宁市科学技术局、广西壮族自治区科学技术情报研究所第三方评价证明（项目验收证书、成果登记证书）2016.4.192016.6.3037-513南宁中心血站（南宁输血医学研究所）公开发表的论文专著52-914南宁中心血站（南宁输血医学研究所）项目完成单位的直接经济效益证

2、明92-93520171490广西医学科学情报所科技查新报告2017.6.2394-1006南宁中心血站（南宁输血医学研究所）公示情况说明2017.6.30101-1077其他证明：世界卫生组织HLA命名委员会颁发的6个 新的HLA等位基因命名证书108-1148知情同意推出南宁市科学技术奖报奖证明1152017 年度南宁市科学技术进步奖推荐书一、项目基本情况专业评审组：南宁市科学技术奖励委员会办公室制项目HLA高分辨基因分型结果模棱两可难题解决技术体系的建立名称与应用是否属于（B ）保密项目A、是B、否主 要 完 成 单 位南宁中心血站（南宁输血医学研究所）主 要 完 成 人授权发明专利（项

3、）授权的其他知识产权（项）李恒聪、吴国光、何保仁、裴永峰、李丽兰、黄惠妮、李彬、黎海燕、刘学军项目起止时间2010年 1月1日起2016年 6月30日止所属国民 经济行业（Q）卫生、社会保障和社会福利业项目曾获科技计 划、基金资助情况计划、基金名称编号下达部门下达年度南宁市科学研究与技术开发计划项目201003048C3南宁市科技局2010奖励类别（D ）A、技术开发类B、推广应用类 C、重大工程类 D、社会公益类32099学科分类名称（代码） 32011二、项目简介所属科学技术领域、简要背景、主要技术内容及创新要点、技术经济指标、促进行业科技 进步作用及推广应用、效益情况。.所属科学技术领域

4、：本项目属临床诊断学学科（学科分类号32011 ）输血医学实验室诊断技术领域。.简要背景：本项目属南宁市科学研究与技术开发计划项目，合同编号:201003048C-3），项目类别为科技攻关与新产品试制。 本项目系统分析了广西人群 HLA-A、B、DRB1基因测序分型中模棱两可结果的分布状况，发现了 PCR-SBT测序技术出现模棱两可结果的规律，建立了以组特异性测序引物法和高分辨聚合酶链反应 -序列特异性引物法相互补的模棱两可难题解决技术体系， 有效解决HLA高分辨基因分型结果模棱两可问题, 成功地用于临床（社会）服务。三. 主要技术内容及创新要点1.主要技术内容（1）使用PCR-SBT测序技术

5、对1000份标本做HLA-A、B、DRB1高分辨基因分型,HLA-A、B、发现96.7%的标本其HLA-A，B，DRB1基因至少有1个位点出现模棱两可,DRB1各位点出现模棱两可结果的比例分别为65.7%、58.8%、77.2%，充分揭示了 HLA-A、B、DRB1各位点出现模棱两可结果分布规律和高比例模棱两可率的特点。（2）建立了使用组特异性测序引物法（GSSP）技术和高分辨聚合酶链反应-序列特异1000性引物法（PCR-SSP技术相配合的模棱两可问题的新解决技术体系，成功解决了 份标本HLA-A，B，DRB1高分辨基因分型检出的模棱两可问题。（3）在中华骨髓库HLA基因分型检测和临床组织配

6、型中应用所建立的技术体系，提高了分型检测结果精确性，并成功正确鉴定和报道了 6个HLA新等位基因：HLA-A*33:88,A*02:513,B*40:01:18 ，B*40:01:40, DRB1*14:150, DRB5*01:15。(4) 发表研究论文6篇，其中SCI简报论文2篇，国内核心论文4篇。2.创新要点1.以大样本量数据做研究，更充分可靠地揭示了HLA-A，B，DRB1各位点出现模棱两可结果的分布规律和高比例模棱两可率的特点。2.建立了联合使用组特异性测序引物法和高分辨聚合酶链反应-序列特异性引物法解决HLA高分辨模棱两可难题的技术体系，较好解决基因测序分型模棱两可问题。四. 技术

7、经济指标：将研究成果应用到临床实践及社会公益事业，为中华骨髓库提供HLA基因分型检测服务和为临床提供 HLA组织配型服务。截止2016年底共提供6343例次检测服务，2014年-2016年收入97.63万元。五. 促进行业科技进步作用及推广应用、效益情况(1) 将建立的HLA高分辨模棱两可难题解决技术体系应用于中华骨髓库HLA基因分型和临床组织配型中，显著提高了分型结果精确性，为临床移植配型和骨髓库供者分型 提供更好的技术保障。(2)成功正确鉴定和报道了 6个HLA新等位基因，这些HLA新等位基因的鉴定对临床移植配型、法医学鉴定以及人类迁移和人类遗传学研究等方面具有重要意义。（限1000个汉字

8、）、项目主要科技创新阐述项目具有创造性的关键技术或成果转化和推广应用的集成创新与推广模式创新的内 容。一、项目简介人类白细胞抗原（HLA）是迄今所知人类最复杂的免疫遗传多态性系统，准确的 HLA分型对于临床造血干细胞移植、HLA与疾病相关性等研究有着重要的意义。聚合酶链反 应-直接测序分型法（PCR-SBT）因达到高分辨水平和能鉴定新等位基因而应用广泛。但PCR-SBT法的一个大问题是该法在分型判断时存在较高比例的模棱两可组合的结果，对HLA分型数据的精确判断带来了很大程度的困扰。故亟待寻找并建立有效解决HLA高分辨基因分型结果模棱两可问题的方案，为临床移植配型和骨髓库供者HLA基因数据库建设

9、提供可靠的HLA分型保障。本项目系统分析了 HLA-A、B、DRB1基因测序分型中模棱两可结果的分布状况和各类HLA高分辨基因分型模棱两可解决技术的优缺点，发现了 PCR-SBT测序技术出现模棱两可结果的规律，建立了以组特异性测序引物法和高分辨聚合酶链反应 -序列特异性引物法相互补的模棱两可难题解决技术体系，有效解决了HLA高分辨基因分型结果模棱两可问题，并将创新成果成功应用于中华骨髓库 HLA基因分型和临床组织器官移植基因分型、广西人群基因多态性和人类遗传学研究、HLA新等位基因的鉴定中，取得新的学术发现、显著的社会效益和良好的经济效益。二、技术特征1.通过对1000份标本的HLA- A ,

10、B,DRB1聚合酶链反应-直接测序分型（PCR-SBT）分型，探明HLA高分辨基因分型结果模棱两可的比例和分布规律，进一步明晰解决HLA 高分辨基因分型结果模棱两可的重要性和紧迫性。本项目采用聚合酶链反应-直接测序分型（PCR-SBT）方法对1000名中华骨髓库广西 分库供者的HLA-A，B，DRB1基因进行测序分型，发现 HLA-A，B，DRB1基因均存在较高比例的模棱两可分型结果。检测的1000份标本中，仅33份标本无模棱两可情况，96.7% 的标本其HLA-A，B，DRB1基因至少有1个位点出现模棱两可结果，其中 HLA-A，B，DRB1各位点出现模棱两可结果的比例分别为65.7%、58

11、.8%、77.2%。这些结果表明，主流的 PCR-SBT方法对HLA-A，B，DRB1基因分型结果均存在较高比例的模棱两可，严重影响到 HLA基因分型的精确性，厄需予以解决。2.深入系统地分析国内外以往使用的各类HLA高分辨基因分型模棱两可解决方法的 优缺点，研究建立了解决 HLA高分辨模棱两可难题的实验技术体系，实验验证表明该技 术体系简单高效。（1）对国内外以往使用的各类 HLA高分辨基因分型模棱两可解决方法做了深入系统 分析：包括焦磷酸测序分型法、参照链介导构象分析法、组特异性扩增法（ GSA）、组特异性测序引物法（GSSP）、高分辨聚合酶链反应-直接测序分型法（PCR-SBT）、克隆测

12、序 法、单倍型分离法等等，能部分解决 HLA高分辨基因分型模棱两可问题，但都有自身缺点。已发表的相关学术论文有:1李恒聪，吴国光.HLA高分辨分型模棱两可组合研究和问题解决的进展.中国实验血液学杂志，2010,18(5):1345-1349（2）建立了解决HLA高分辨模棱两可难题的实验技术体系，成功解决问题，实验验 证表明该技术体系简单高效。在通过对国内外以往使用的各类 HLA高分辨基因分型模棱两可解决方法的优缺点深入系统的分析的基础上，制定了 HLA测序分型模棱两可解决技术体系，即联合使用组特异性测序引物法和高分辨聚合酶链反应-直接测序分型法来解决模棱两可问题。本项目在中华骨髓库标本检测中验

13、证 HLA高分辨基因分型结果模棱两可问题解决技术体系。对于1000份标本HLA-A，B，DRB1基因测序分型检出的模棱两可结果，发现采 用组特异性测序引物法可以解决 87.37%HLA-A、93.54HLA-B和60.49%的HLA-DRB1基因模棱两可分型结果，采用高分辨聚合酶链反应-序列特异性引物法解决12.63% HLA-A、4.76%HLA-B和15.29%的HLA-DRB1基因模棱两可分型结果，剩余1.70%HLA-B 和24.22%的HLA-DRB1基因模棱两可分型结果联合使用组特异性测序引物法和高分辨聚合酶链反应-序列特异性引物法解决。组特异性测序引物法和高分辨聚合酶链反应-序列

14、特异性引物法分别对位于HLA-A，B和HLA-DRB1基因检测区内、外的模棱两可分型结果具 有较高的解决能力，二者互为补充，可有效解决 HLA高分辨基因分型结果模棱两可问题。实验表明，本项目建立的 HLA测序分型模棱两可解决技术体系可有效解决模棱两可问题，具有简单高效的优点。已发表的相关学术论文有:1李恒聪，裴永峰，黄惠妮等.人类白细胞抗原A_B和DRB1测序分型模棱两可结果的分布及解决.重庆医学，2017,46(13):1759-1761基因分型和临床组织器官移植基因分型、广西人群基因多态性和人类遗传学研究、HLA新等3成功将建立的解决HLA高分辨模棱两可难题技术体系应用在中华骨髓库 HLA

15、HLHLA位基因的鉴定中，取得好的成效。(1)中华骨髓库HLA基因分型和临床组织器官移植基因分型中的应用，确保了 分型检测结果准确可靠。本项目在中华骨髓库HLA基因分型和临床组织器官移植基因分型中应用建立的 高分辨模棱两可难题解决技术体系，有效解决了实验中出现的分型结果模棱两可问题，确保了分型结果的准确可靠。南宁输血医学研究所HLA组织相容性和免疫遗传实验室，在中华骨髓库HLA高分辨基因分型数据抽检结果正确率 100%,实验室参加卫生部临床室间质量评价检测结果正确率100%。(2)在广西人群基因多态性和人类遗传学研究中的应用所建立的技术体系，对广西HLA基3431名无个体血缘关系健康个体进行了

16、HLA-A、B、D R B1等位基因进行高分辨分型， 首次报告了广西地区人群HLA等位基因和单体型频率相关参数，发现广西地区 因座的基因型和等位基因具有较高的遗传多态性和地域差异性且具有其自身特点。该工作为今后开展临床造血干细胞移植、中国人群CWD表的制订和骨髓库最适库容的评估等研 究及相关疾病研究提供有益信息支持。已发表的相关学术论文有:1黄惠妮,裴永峰,李恒聪等.广西造血干细胞骨髓库HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因多态性研究.中国输血杂志，2017,30(1):51-552裴永峰，李恒聪,黄惠妮.广西地区汉族人群HLA-B15和HLA-B40组抗原多态性的初步分析.国际检验医学杂志，

17、2017,38(9):1155-1159(3) 在HLA新等位基因的鉴定中的应用，成功鉴定了 6个新的HLA等位基因，对 临床移植配型、法医学鉴定以及人类迁移和人类遗传学研究等方面具有重要意义。通过应用本项目建立的HLA高分辨模棱两可难题解决技术体系， 鉴定HLA新等位基 因 6 个：A*33:88,A*02:513,B*40:01:18，B*40:01:40，DRB1*14:150, DRB5*01:15。该 6 个 新等位基因均已获得世界卫生组织(WHO)HLA命名委员会的正式命名。这些 HLA新等位基因的鉴定，对临床移植配型、法医学鉴定以及人类迁移和人类遗传学研究等方面具有 重要意义。已

18、发表的相关学术论文有:1 YF P ei, HN Hua ng, HC Li, et al. Ide ntificatio n of a n ovel HLA-DR*14 allele,DRB1*14:150, i n a Chi nese in dividual. HLA : immu ne response gen etics, 2016,87(5) :407-408 2 YF P ei, HN Hua ng, HC Li, et al. HLA-A*02:513, a novel HLA-A*02 allele. HLA : immune res ponse gen etics, 201

19、6,87(5):382-383三、应用本项目建立的技术体系，成功开展大量的临床和社会服务工作,取得显著的社会效益和良好的经济效益。1依托本项目所建立的技术，充分保障了在完成中华骨髓库 HLA基因分型和临床组织器官移植基因分型中检测数据的稳定可靠，对于提高临床组织器官移植患者的移植治疗效 果和保护患者生命安全，起了重要积极的作用，取得了显著的社会效益。2.本项目首次报告了广西地区人群 HLA等位基因和单体型频率相关参数，发现明广西地区HLA基因座的基因型和等位基因具有较高的遗传多态性和地域差异性且具有其自身特点，为今后开展临床造血干细胞移植、中国人群CWD表的制订和骨髓库最适库容的评估等研究及相

20、关疾病研究提供有益信息支持。3.本项目为临床医疗单位和社会公益事业提供中华骨髓库HLA基因分型服务和临床组织配型服务，至2016年12月已完成6343例（份）的检测服务，其中2014至2016年 为临床和社会提供的检测服务共计 2061例（份），检测服务收入97.63万元，取得良好的经济效益。4.本项目成功鉴定了 6个新的人类HLA等位基因，对临床移植配型、法医学鉴定以及人类迁移和人类遗传学研究等方面具有重要意义。5.经过本项目的实施，项目组成员中有两名主要成员被南宁市遴选为“第九批南宁市新世纪学术和技术带头人第一层次人选”，一名成员被评为“南宁市第七批优秀青年专业技术人才”（限5页内）五、项

21、目曾获科技奖励情况获奖时间奖项名称奖励等级授奖部门（单位）六、公开发表的论文专著（不超过20篇）序号论文专著名称/刊名/作者年卷页码（年卷页）发表时间（年 月）通讯作者第一作者1人类白细胞抗原 A B和 DRB1测序分型模棱两可结 果的分布及解决/重庆医 学/李恒聪，裴永峰，黄惠 妮等2017,46（13）:1759-17612017 年 5月吴国光李恒聪2广西造血干细胞骨髓库 HLA-A B DRB1高分辨等 位基因多态性研究/中国 输血杂志/黄惠妮，裴永 峰，李恒聪等2017,30（1）:51-552017 年 1月黄惠妮3广西地区汉族人群 HLA-B15 和 HLA-B40 组抗 原多态性的初步分