阿昔洛韦生物粘附微球的动物胃粘膜表面粘附能力和体外缓释效果

1、相色谱精密测定 , 其在 6号处方中溶解为最大值 , 此 时 , 加入的月桂氮酮全部溶解 。实验结果表明 :月桂氮酮在水及低浓度乙醇中几无促渗透作用 , 如 2,3号处方 。从表 1、 表 2中可见 4,5,6号处方 均含有 50g L -1的丙二醇 , 同时随着乙醇浓度的增 加 , 月桂氮酮的溶解度逐渐增大 , 进而对皮肤的 作用增强 , 导致药物透皮速率与渗透系数的增大 。 在 4,5,6号处方中 , 月桂氮酮的溶解度分别是 3号处方的 1. 4倍 、 26. 8倍与 30. 4倍 , 其渗透速率分 别是 3号处方的 3. 6倍 、 26. 7倍与 54. 8倍 。本实 验提示 :在考察月

2、桂氮酮促渗透作用时 , 应当充分 注意其在溶剂系统中溶解度的影响 。很多文献报 道 , 月桂氮酮的使用浓度与促渗作用呈抛物线关 系 , 但大多尚未考虑月桂氮酮在溶剂中的真实溶 解状况 , 影响到结论的准确性 。 3. 3 及 ACV 透皮速率的关系。运 1数 (J 1/2 cm -依 为 47. 90, 44. 75, 40. 37, 38. 21,30. 68,27. 37。 按 Hildebrand s 理论 5, 溶解 度参数表示分子间的内聚力 , 参数愈接近者 , 愈能相 互溶解 。 月桂氮酮的溶解度参数为 18. 55(J 1/2 cm -3/2 , 与 6号处方溶剂的溶解度参数最为

3、接近 , 故加入的月桂氮酮在处方中全部溶解 。 实验结果 表明 : 溶剂系统的溶解度参数与月桂氮酮溶解 度及 ACV 透皮速率呈以下对应关系 , 见图 1。图 1 溶剂溶解度参数与月桂氮酮溶解度 、 ACV 渗透速率 的关系 -ACV 渗透速率 -溶剂溶解度参数曲线 ; 3 -月桂氮酮溶解度 -溶剂溶解度参数曲线 ; -1号溶剂处方 ; -2号溶剂处方 ; -3号溶剂处 方 ; -4号溶剂处方 ; -5号溶剂处方 ; -6数相近 , , 对皮肤 。因此在选择 , 以增强月桂氮酮的促透 参考文献1Krisfl A , Mrhar A , K ozjek F. The ionization pro

4、perties of acy 2clovir and deoxyacyclovir. Int J Pharm . 1993,99(1 :79.2Greg EP ,Dunn P ,Vinol P ,S , et al . Acyclovir Bioavailability in Humam Skin. J Invest Dermatol. 1992,98(6 :856-863.3陈国珍 , 黄贤知 , 刘文远 , 等 . 紫外 -可见分光光度法 . 北京 :原 子能出版社 ,1987:178.4Barton Allan F. M. CRC Handbook of solubility Param

5、eters and other cohesion Parameters. Boca Raton , Florida , CRC Press. Inc. ,1983:35,6465.5Cheng -hsiung Liu , Hsiu -o Ho , Meng -Chen Hsieh , et al . Studies on the i n 2vit ro percutaneous penetration of indomethacin from gel systems in hairless Mice. J Pharm Pharmacol . 1995, 47:365.(收稿 :19972052

6、24阿昔洛韦生物粘附微球的动物胃粘膜表面粘附能力和体外缓释效果陆伟跃 潘俊 刘敏(上海 200032上海医科大学药学研究所药物靶向制剂研究室 摘要 目的 :研制一种具有较好生物粘附能力和药物缓释效果的阿昔洛韦 (Acv 2卡波姆 (Cb 2乙基纤维素 (Ec 微球 。 方法 :通 过油包水乳剂的溶媒蒸发法制备 Acv 2Cb 2Ec 微球 ; 以动物体内外胃粘膜表面滞留程度 , 考察 Cb 与 Ec 不同配比 、 Acv 含量 、 微 球粒径对 Acv 2Cb 2Ec 微球生物粘附能力的影响 ; 以体外释药速率评价 Cb 与 Ec 不同配比 、 Acv 含量 、 微球粒径和介质 p H 对Ac

7、v 2Cb 2Ec 微球缓释效果影响 。 结果 :Cb配比增加 ,Acv 2Cb 2Ec 微球生物粘附能力增强 , 药物缓释效果降低 , 表现为负相关性 ; Acv 含量增加 ,Acv 2Cb 2Ec 微球生物粘附能力和药物缓释效果均降低 , 但 Acv 含量 20%时 , 缓释效果基本接近 ; 粒径增大 , Acv 2Cb 2Ec 微球生物粘附能力有所减小 , 但在 5001200m 时 , 药物缓释效果显著提高 (12h , 而粘附性变化不明显 ;Acv 2Cb 2Ec 微球在酸性介质中的释药速率明显快于中性或近中性介质 。 结论 :载药量 20%, 粒径为 5001200m ,Cb 与

8、Ec 配比为 1 9的 Acv 2Cb 2Ec 微球在胃粘膜表面具有良好粘附特性 , 且药物缓释可达 12h , 近中性 p H 条件下的缓释效果更佳 。关键词 阿昔洛韦 2卡波姆 2乙基纤维素微球 ; 生物粘附 ; 药物缓释The bioadhesive property of aciclovir microspheres on animal s gastric mucin and its in vitro effect of sus 2313 中国药学杂志 2000年 5月第 35卷第 5期Chi n Pharm J , 2000M ay , V ol. 35No. 5tained dru

9、g releaseLu Weiyue (Lu W Y ,Pan J un (Pan J ,Liu Min (Liu M (Depart ment of Targeting Pharm aceutical , Institute of Phar 2m acy , S hanghai Medical U niversity , S hanghai 200032ABSTRACT OB JECTIVE :To prepare aciclovir (Acv 2carbomer (Cb 2ethylcellulose (Ec microspheres with good bioadhesion and s

10、ustained drug release. METH ODS :The microspheres were prepared using a w/o emulsion 2solvent evaporation technique. The bioadhe 2sion was evaluated via counting the microspheres retaining at the surface of gastric mucin. In vit ro drug release was also studied. The factors influencing the bioadhesi

11、on and drug release ,such as Cb/Ec ratios ,Acv content ,particle size as well as the p H of media were studied ,respeitively. RESU LTS :While Cb/Ec ratio being increased ,the bioadhesion of Acv 2Cb 2Ec microspheres increased ,but teh drug release rate slowed down ,which showed a negative correlation

12、. The more the Acv content was ,the worse the bioadhesion was and the faster Acv released. When the Acv content was 20%,the drug release rate slightly changed. The bioadhesion the micros pheres was also reduced when the particle size was increased. However when the particle sizes were between 500,th

13、e drug release rate was significantly retarded (12h . In acedic media ,the drug release rate was than CONC L USION :The Acv 2Cb 2Ec microspheres had a good bioadhesion and sustained drug when 20size was between 5001200m and the Cb/Ec ratio was 1 9. The drug released KE Y WOR DS Acv 2Cv 2Ec microsphe

14、res ,bioadhesion 80年代初 ,Robinson 等 12, 动物体内外 , , 可使胃肠道对其排空时间明 显延长 , 为生物粘附型的口服定位释药制剂研究奠 定了基础 。为提高药物生物利用度 , 生物粘附微球制剂研 究主要有以单纯 Polycarbophil 胃粘附微球与氯噻嗪 微球混合体 3, 以 Polycarbophil ,Carbomer 包衣的 , Carbomer 和 Eudragit RL100混合包衣的小肠粘附微球 4, Carbomer 分散于四甘油五硬脂酸酯 (TG 2PS 和四甘油单硬脂酸酯 (TGMS 制成的胃粘附微 球 5; 以脱乙酰壳多糖制成的阿昔洛

15、韦上皮粘附微 球 6。 实验结果表明 , 或显著延长微球在设定给药 部位滞留时间 , 或显著提高药物生物利用度 。人体 试验结果证明 , 呋塞米和维生素 B 2生物粘附微球的 生物利用度分别高于非生物粘附微球 1. 8倍和 2. 4倍 , 生物利用度提高显著 7。阿昔洛韦作为一种抗疱疹病毒类药物 , 因其血 浆半衰期短 (2. 9h , 口服吸收主要依赖于小肠内的 被动扩散 , 且吸收速率低 , 口服剂量越大 , 生物利用 度越低 8, 故目前市售阿昔洛韦口服制剂均存在生 物利用度低 (15%30% 和给药次数多 (5次 /日 的缺点 9, 但若将阿昔洛韦制备成生物粘附微球 , 则可克服其口服

16、制剂的上述不足 3。本实验报道 一种油包水溶媒蒸发法制备的阿昔洛韦 (Acv 2卡波(Cb 2乙基纤维素 (Ec 微球在动物体内外胃粘膜 表面粘附性能和体外药物缓释效果 。 为研制开发具 有类似于阿昔洛韦特点的新颖药物口服制剂奠定实 验基础 。 1 材料与方法 1. 1 材料与仪器Acv (上海第六制药厂 ;Acv 标准品 (中国药品生物制品检定所 ; Cb (上海申兴制药厂 ; Ec (20mPa s , 卡乐康辅料有限公司 ;Span 280(浙江温州清 明化工厂 ; 轻质液蜡 (上海大场化工厂 ; 无水乙醇 (上海振兴化工厂 ; 石油醚 (常熟市杨园化工厂 。756MC 可见紫外分光光度

17、仪 (上海第三分析仪器厂 ;ZRS -8智能溶出试验仪 (天津大学无线电 厂 ;SHZ 222水浴恒温振荡器 (江苏太仓医疗器械 厂 ;Nikon 相差显微镜 (日本 。 SD 大鼠 (326. 2±22 g 15只 , 昆明种小鼠 不拘 , (23. 3±2. 3 g 24只 , 均由上海医科大学动 物部提供 。 1. 2 微球制备取含 Ec 与 Cb 一定比例混合物 3g 的无水乙醇 溶液 50ml , 混悬入 0. 52. 0g Acv 后 , 加入到含 Span 28010g 的 400ml 轻质液蜡中 , 室温条件下 , 600r min -1搅拌蒸发 16h 。

18、 砂芯漏斗抽滤 , 收集微球 , 石油醚洗涤 (50ml ×3 , 室温真空干燥 24h 。根 据不同需要 , 分别以 5016目不锈钢筛筛分得 Acv 2Cb 2Ec 微球 。 同法 (不加 Cb 制备 Acv 2Ec 微球 。 1. 3 药物含量测定413 Chi n Pharm J , 2000M ay , V ol. 35No. 5中国药学杂志 2000年 5月第 35卷第 5期 1. 3. 1 标准曲线建立 精密称取 Acv 对照品约 8mg 4份 , 分别溶解于 p H1. 3盐酸溶液 ,p H5. 0重蒸水和 p H6. 0,6. 8磷酸盐缓冲液中 。定容至 100ml

19、 后 , 各精取 0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0,1. 2,1. 4,1. 6, 1. 8和 2. 0ml , 稀释至 10ml , 依次分别于 200300nm 波长区扫描 , 确定 254,252和 250nm 波长处测 定吸光度值 。以吸光度值对相应的 Acv 浓度进行 线性回归 , 得标准曲线 :p H1. 3, A=0. 0512c +0. 0083(r =0. 9998, 254nm p H5. 0, A =0. 0584c +0. 0115(r =0. 9997, 252nm p H6. 0, A =0. 0584c +0. 0140(r =0. 9997, 2

20、50nm p H6. 8, A =0. 0591c +0. 0080(r =0. 9998, 250nm 根据溶出介质 p H , 行计算 。 1. 3. 2 (p H1. 3, 5. 0,6. 0和 g ml -1Acv 溶液和 40g ml -1Cb Acv 的 Cb 浓度介于 010g ml -1的溶液 , 照标准 曲线项下方法测定 。 1. 3. 3 载药量测定 用 p H1. 3溶液混悬约 40mg 的 Acv 2Cb 2Ec 微球粉末 , 超声处理 5min 和振荡 6h 后 , 定容到 100ml ; 以 0. 8m 微孔滤膜过滤 , 取续 滤液 1ml 稀释至 10ml , 于

21、 254nm 波长处测定吸光 度值 。 按其标准曲线方程和如下公式求算 Acv 2Cb 2Ec 微球载药量 :X =(c ×10×100/W ×1000 ×100% 其中 , c :Acv 2Cb 2Ec 微 球 粉 末 中 Acv 浓 度 (g ml -1 ;W :Acv2Cb 2Ec 微球粉末重量 (mg 。 1. 3. 4 回收率测定 分别精密称取 Acv 87. 5mg , Cb 31mg 和 Ec 283mg 于 1000ml 量瓶中 , 用 p H 1. 3盐酸溶液溶解并定容 , 以 0. 8m 微孔滤膜过 滤 , 取续滤液 10ml 5份

22、, 分别稀释至 100ml , 照载 药量测定项下方法测定 。 1. 4 动物体内外生物粘附试验 1. 4. 1 在体动物生物粘附 按 Cb 与 Ec 不同配比 制得的 Acv 2Cb 2Ec 微球 。将大鼠随机分为 5组 , 禁 食供水饲养 24h 后 , 每只均灌入对应配方的 Acv 2Cb 2Ec 微球各 100粒 ,2. 5h 后处死 , 分别取胃和小 肠 (等分为三段 , 计数微球在各部位滞留数 。 1. 4. 2 离体动物生物粘附 将禁食供水饲养 24h后的小鼠随机分为 6组 , 处死后取胃 , 自贲门打开后 平铺于载玻片上 。 分别取不同粒径 Acv 2Cb 2Ec 微球 (Cb

23、/Ec =1 9 和不含 Cb 的 Acv 2Ec 微球各 100粒 , 撒在小鼠胃粘膜表面 , 置于饱和氯化钠溶液的密闭 容器中 , 保湿 20min 。取出后使载玻片呈 45°斜角 放置 。 用 p H1. 3盐酸氯化钠溶液以 22ml min -1冲 洗 5min 后 , 计数微球在胃粘膜表面的粒数 。 1. 4. 3 粘附触角观察 分别将 Acv 2Cb 2Ec 和 Acv 2Ec 微球放入 p H1. 3溶液中 , 置于显微镜下观察不同 时间内的微球形态及表面变化情况 , 并摄片记录 。 1. 5 体外释药试验 1. 5. 1 释药速率 取 6份 Acv 2微球各约 60m

24、g , , p 3盐酸溶液 , r min -1。 , 10ml 后 , 照含量 5. p H 对释药速率影响 按上法分别测定 Acv 2Cb 2Ec 微球在 p H1. 3,5. 0,6. 0和 6. 8溶出介质 中释药速率 。 2 结 果2. 1 Acv 含量测定方法考察Cb 浓度在 010g ml -1范围内 , 不同介质中 的 Acv 测 定 回 收 率 分 别 为 :p H1. 3(254nm , 100. 6%(n =10, RS D =0. 73% ;p H5. 0(252nm , 100. 8%(n =10, RS D =0. 51% ;p H6. 0(250nm , 100.

25、 0%(n =10, RS D =0. 78% ;p H6. 8(250nm , 100. 1%(n =10, RS D =0. 67% 。 按载药量测定方 法的 Acv 回收率为 100. 4%(n =5, RS D =0. 75% 。表明 Acv 含量测定基本不受 Cb 和 Ec 干扰 , 方法可 行 。 2. 2 Acv 2Cb 2Ec 微球生物粘附性2. 2. 1 Cb 与 Ec 配比对微球的生物粘附程度影响 随着 Cb 在 Acv 2Cb 2Ec 微球中的配比升高 , 微球在 大鼠胃内的滞留率明显升高 (图 1。图 1 Cb 与 Ec 不同配比的 Acv 2Cb 2Ec 微球 (15

26、%Acv;300500m 在大鼠胃肠道内滞留程度a -胃 ;b -小肠 (上 ;c -小肠 (中 ;d -小肠 (下 513 中国药学杂志 2000年 5月第 35卷第 5期Chi n Pharm J , 2000M ay , V ol. 35No.5 2. 2. 2 粒径和载药量对微球生物粘附程度影响 在 Cb 与 Ec 配比恒定的条件下 , 随着 Acv 在 Acv 2Cb 2Ec 微球中载药量的增加 , 微球在小鼠胃粘膜表 面的滞留率显著降低 (表 1 。 Acv 载药量一定时 , 粒径处在 5001200m 范围的 Acv 2Cb 2Ec 微球 , 其 在小鼠胃粘膜表面滞留率略低于 3

27、00500m 的 微球 ; 不含 Cb 的 Acv 2Ec 微球的粒径大小对其在小 鼠胃粘膜表面滞留率影响不大 , 但显著低于 Acv 2Cb 2Ec 微球的滞留率 (表 2 。表 1 Acv 含量对 Acv 2Cb 2Ec 微球 (Cb/Ec =1 9 在离体小 鼠胃粘膜表面滞留程度影响 . x ±s , n =3 ACV 含量 /%粒径范围 /m滞留率 /%15±150090092±420±1500120085±530±1500120069±22表 2 粒径对 Acv 2Cb 2Ec 微球 (Cb/Ec =1 9 和 A

28、cv 2Ec 微球 在离体小鼠胃粘膜表面滞留程度影响 . x ±s , n =3微球类型粒径范围 /m 滞留率 /%Acv 2Cb 2Ec 300500954Acv 2Cb 2Ec 50012005Acv 2Ec ±8Acv 2Ec12004 2. 2. 3 经筛分后的 Acv 2Cb 2Ec 5001200m 之间 , 圆整度较好 , 且在 p H1. 3盐酸溶液中未发现微球明显溶胀和溶蚀 , 但微球边缘可见明显的粘附触 角生成 (图 2 。 图 2 Acv 2Cb 2Ec 微球 (左 和 Acv 2Ec 微球 (右 在 p H1. 3介 质中形态照片2. 3 Acv 2

29、Cb 2Ec 微球释药速率2. 3. 1 Cb 对释药速率影响 在 Acv 含量约为 15%时 , 随着 Cb 与 Ec 配比增大 ,Acv 2Cb 2Ec 微球中 Acv 的体外释药速率显著加快(图 3 。2. 3. 2 载药量和粒径对释药速率影响 在 Cb 与 Ec 配比恒定条件下 , 随着 Acv 载药量降低 ,Acv 2Cb 2Ec 微球释药速率明显减慢 (图 4 。在 Acv 含量相对恒定时 , 随着粒径增大 ,Acv 2Cb 2Ec 微球释药速率显著减缓 (图 5 。 2. 3. 3 介质 pH 对释药速率影响 Acv 2Cb 2Ec 微球 在酸性介质中的 Acv 释药速率显著快于

30、近中 性 或图 3 Cb 与 Ec 不同配比 Acv 2Cb 2Ec 微球 (15%Acv; 300500m 在 p H1. 3介质中释药速率曲线 -1 24; -1 19; -1 14; × -1 9; 3 -1 44Acv 2Cb 2Ec 微球 (Cb/Ec =1 9;5001200m 在 p H1. 3介质中释药速率曲线 -17. 6%; -20. 9%; -25. 1%; × -37. 7%图 5 不同粒径 Acv 2Cb 2Ec 微球 (Cb/Ec =1 9;20%Acv 在p H1. 3介质中释药速率曲线 -300500m ; -500900m ; -50012

31、00m中性介质中的释药速率 (图 6 ,Acv 2Cb 2Ec 微球在 p H1. 3介质中的缓释达 12h , 而在 p H5. 0,6. 0,6. 8介质中 ,12h 仅释放 64%69%。图 6 Acv 2Cb 2Ec 微球 (Cb/Ec =1 9; 20%Acv; 5001200m 在不同介质中释药速率曲线 -p H1. 3; -p H5. 0; -p H6. 0; -p H6. 83 讨 论鉴于 Acv 在胃肠道内的吸收特点 8, 要使 Acv 2Cb 2Ec 微球达到明显提高 Acv 生物利用度之目的 , 必须在考虑其对胃粘膜有显著粘附性能外 , 还应兼613 Chi n Phar

32、m J , 2000M ay , V ol. 35No. 5中国药学杂志 2000年 5月第 35卷第 5期 备有较好的缓释效果 。为此 , 我们研究了粘附材料 用量 、 载药量和粒径等因素对 Acv 2Cb 2Ec 微球的生 物粘附能力和药物缓释效果的影响 。 Cb 是一种聚 丙烯酸类的粘合材料 , 具有较好的水溶胀性 , 故而 , 分散于微球中的 Cb 遇水可在微球边缘生成粘附触 角 (图 2 , 同时也给 Acv 从该处快速溶出创造了条 件 。 结果是 Cb 含量越高 ,Acv 2Cb 2Ec 微球生物粘附 能力越强 , 而 Acv 缓释效果越差 (图 1和图 3 , 表现 为微球生物粘

33、附能力与药物缓释效果的负相关性 。 为兼顾 Acv 2Cb 2Ec 微球的粘附能力和药物缓释效 果 ,Cb 与 Ec 按 1 9配比作为该微球的辅料配方 , 并 用载药量和微球粒径大小来加以调节 , 以寻求生物 粘附与药物缓释之间的较好平衡点 。实验结果表明 ,Acv 含量对 Acv 2Cb 2Ec 微球生 物粘附能力影响程度明显高于微球粒径 , 即 Acv 绝 对含量对微球生物粘附的影响比粒径更明显 。 Cb 2Ec 微球粒径对 Acv 大而缓释效果明显提高 , 而 , %。 因此 , 2Cb 2Ec 微球较为 理想 。Acv 2Cb 2Ec 微球在酸性和中性或近中性介质中 释药速率有所差异

34、 , 其主要原因可能有二方面 。一 是 Cb 在 p H <3的介质中粘度较低 10, 其自微球溶 胀和扩散加快 ,Acv 透过 Cb 胶状触角而溶出至介质 的阻力减小 ; 二是 Ec 分子间氢键在酸性介质中不易 形成 , 影响了微球膜的致密程度 ,Acv 透膜扩散阻力 降低 。结果导致 Acv 2Cb 2Ec 微球在 p H1. 3介质中 的 Acv 释放速率明显快于中性或近中性介质 。根据上述实验结果 , 可以认为 :载药量 20%, 粒径为 5001200m ,Cb 与 Ec 配比为 1 9的 Acv 2Cb 2Ec 微球在胃粘膜表面具有良好的生物粘附能力 , 且药物释放可达 12

35、h , 随着微球排入近中性体液 环境 , 其生物粘附能力和药物缓释效果可能会更好 。参考文献1Park K ,Robinson J R. Bioadhesive polymers as platforms for oral 2controlled drug delivery :Method to study bioadhesive. Int J Pharm , 1984,19:107.2Ch ng HS ,Park H , K elly P , et al. Bioadhesive polymers as plat 2forms for oral 2controlled drug delive

36、ry :Synthesis and evalua 2tion of some swelling , water insoluble bioadhesive polymers. J Pharm Sci , 1985,74:399.3Longer MA , Ch ng HS , Robinson J R. polymers as platforms for oral 2controlled drug :Oral delivery of chlorothi 2azide using a J Pharm Sci , 1985, 74:406.4CM , Tukker transit bioad 2in i n loop in the rat A comparative and blends based on poly (acrylic acid . J Cont Release , 1990,13:51.Y ,Nagahara N , K ashihara T , et al. In vit ro and i n vi 2vo evaluation of mucoadhesive microspheres prepared for the gas 2trointesti