纯化水的微生物限度检查方法验证

1、微生物限度检查方法验证纯化水的微生物限度检查方法验证验证方案制定人： 部门： 日期： 验证方案审核人： 部门： 日期： 验证方案批准人： 部门： 日期： 1验证目的：当建立纯化水的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌和酵母菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于纯化水的细菌、霉菌和酵母菌检查。2验证方案：照中国药典2005版二部附录 J 方法。仪器：STV3无菌检查薄膜过滤器（浙江宁海白石药检仪器厂），微孔滤膜（孔径0.45um,直径50mm）。试药：培养基：营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基。来源：北京三药科技开发公司生产 中国药品生物制品检定所监制试液：生理盐水，氯化钠-

2、蛋白胨缓冲液。（均按照中国药典2005版二部附录 H、J要求配制）对照菌株：大肠埃希菌CMCC(B) 44 102、金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003、枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501、白色念珠菌CMCC(F) 98 001、黑曲霉 CMCC(F) 98 003。来源：广州药物研究中心2.2对照菌液的制备：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面新鲜培养物各1环分别接种于15ml 营养肉汤培养基内，于3035培养1824小时后，稀释至1：1051：107，取1ml注入平皿中，注入约45的营养琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置3035培养48h，进行活菌计数。取

3、白色念珠菌的玫瑰红钠琼脂斜面新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内，于2528培养2448小时后稀释至1：1051：106，取1ml注入平皿中，注入约45的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置2528培养72h，进行活菌计数。取黑曲霉的玫瑰红钠琼脂新鲜培养物1环接种于改良的马丁琼脂培养基内斜面中，于2528培养57天后，用35ml0.9%的无菌氯化钠溶液洗脱。然后，用管口带有无菌薄棉花的无菌吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%的无菌氯化钠溶液稀释至1：1051：106，取1ml注入平皿中，注入约45的玫瑰红钠琼脂培养基约15ml，混匀，凝固后置2528培养72h，进行活菌计数。

4、2.3试验过程：供试液的制备：取原液作为供试液。 细菌、霉菌及酵母菌计数：试验组： 取供试液1ml直接过滤，取适宜稀释级试验菌1ml（含菌量为50100cfu）加入到的氯化钠-蛋白胨缓冲液中，过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上，每株试验菌制备1个平皿，按薄膜过滤法测定其菌落数。供试品对照组： 取供试液1ml，直接过滤，用的氯化钠-蛋白胨缓冲液分两次冲洗，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上，每种培养基制备一张滤膜。稀释剂对照组： 以稀释剂代替供试品同试验组做法测定其菌数。菌液组： 见对照菌液的制备。3验证数据：样品名称： 取 样 点： 试验用量： 试 验 人： 试验日期： 报告日期： 菌种名称菌种代数菌液组菌落数（cfu）供试品对照组菌落数（cfu）试验组菌落数（cfu）稀释剂对照组菌落数（cfu）试验组回收率（%）稀释剂对照组回收率（%）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉公式：×100% ×100%4数据