三氧化二砷局部注射治疗原发性肝癌的临床研究

1、三氧化二砷局部注射治疗原发性肝癌的临床研究张勇 李志民 辽宁省大连市第三人民医院116031刘音 辽宁省大连理论医学研究所116013主题词：As2O3；局部注射；原发性肝癌；细胞毒；细胞凋亡中国图书馆分类号：R735.7 文章编号：1563-3993（2002）-16-1246-03摘要 目的：观察三氧化二砷局部注射治疗原发性肝癌的疗效，探讨其作用机制。方法：B超引导下病灶内局部注射三氧化二砷815mg，每周一次；四次为一疗程。结果：治疗后病人的机体免疫力提高，AFP水平下降，病理组织学及电镜检查示病灶内大量肿瘤细胞坏死，部分肿瘤细胞凋亡。结论：三氧化二砷局部注射治疗原发性肝癌安全有效，方法

2、简便易行，其作用机制是细胞毒作用为主，细胞凋亡为辅。原发性肝癌临床确诊时的原发性肝癌大多为晚期，恶性程度高，手术切除机会很少。由于肝癌对放、化疗均不敏感，因此失去手术机会的原发性肝癌主要以肝动脉栓塞介入治疗为主。三氧化二砷（As2O3）是传统中药，近年来我国学者应用它成功地治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）。大量的基础研究表明As2O3对肝癌细胞具有诱导凋亡等作用。基于上述研究成果，我们在B超引导下病灶局部内注射三氧化二砷治疗原发性肝癌38例，旨在观察其疗效，同时对As2O3的作用机制作进一步探讨。1.1病例选择 原发性肝癌38例均经病理证实，其中原发性肝细胞癌34例，原发性胆管癌4例。男性2

3、8例，女性10例，年龄3472岁（中位57岁），KPS评分5070分（中位55分）。药物：哈尔滨伊达药业生产的As2O3（国药准字1999019）CD3+、CD4+、CD8+单克隆抗体试剂盒：北京邦定公司提供。VEGF单克隆抗体试剂盒：北京邦定公司提供。B超仪：美国acuson生产的ASPEN彩色超声诊断仪。CT机：荷兰菲利浦生产的AURA型螺旋CT机。1.2 方法：入组病例行血清学AFP、CD3+、CD4+、CD8+检查。在无菌条件下，B超引导行肝穿病理组织学检查及VEGF水平检测，然后在病灶部位应用多孔穿刺针于病灶中央注射As2O3 8-15mg，具体剂量以B超监视中强回声光团弥散全病灶为

4、准。每周一次，四次为一疗程，一个疗程结束后行CT、B超及病理组织学检查，CD3+、CD4+、CD8+、AFP、VEGF水平检测及电镜检查，疗效评定及观察指标：按WHO实体瘤近期疗效评定标准（1981年）分为完全缓解（CR），部分缓解（PR）、无变化（NC）、进展（PD）：免疫学指标：治疗前后病人的AFP、CD3+、CD4+、CD8+水平。1.3 B超及CT检查：治疗前后病灶的影像学变化及血流变化。1.4 组织学检查：治疗前肝穿组织学检查，治疗后肝穿或手术中组织病理检查。1.5 电镜及VEGF检查。1.6 统计学处理：采用x2及I检验。疗效评价 CR0例，PR10例 (26.32%)、NC25例

5、（65.8）、PD 3例（7.89）。CR+PR10例（26.32）。免疫检验结果：治疗后CD4+和CD4+/CD8+、值较治疗前明显提高，有显著差异（p0.05）见（表1）。表1 治疗前后T细胞亚群活性变化（x±s）（n38）CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+治疗前±±±±治疗后±±±±AFP水平检查：治疗后AFP水平下降，其中AFP20ug/L的12例占总数的31.6。VEGF检查：VEGF主要表达于肝癌细胞的细胞浆或细胞膜，在治疗前的肝癌细胞呈高表达，38例中35例为阳性，占92.1。在治疗

6、后呈低表达，38例中9例为阳性，占23.7（见表2）。表2 治疗前后AFP、VEGF的水平变化（n38）AFP（ug/L）VEGF治疗前92.1（35/38）治疗后23.7（9/38）治疗后AFP20ug/L的12例，占总数的31.6。B超检查：治疗后瘤体内由治疗前的强回声区，回声逐渐减弱，直至回声消失。彩超示瘤体内血流减少或消失。CT检查：治疗后肝癌病灶内密度降低，边缘变光整，增强扫描病灶未见强化。细胞病理学检查：术后大体标本可见注药区出血、破溃、坏死组织学肝癌细胞大部分坏死，细胞器破碎，细胞核溶解消失。电镜检查：注药区可见肝癌细胞的细胞膜断裂，胞浆中细胞器减少或消失，基质密度降低、核染色体

7、溶解等变化，提示这些细胞发生了坏死。亦可见到少数细胞的核染色质浓缩。核边集或呈碎裂状，提示该细胞凋亡。毒副反应；病人在病灶内注药时有胀痛感，可耐受。用药后肝功能转氨酶过性升高，保肝治疗后很快恢复正常。38例病人的治疗后未见骨髓抑制及胃肠道反应。原发性肝癌恶性程度高，进展速度快，死亡率高。临床确诊时的原发性肝癌大多为晚期，手术切除仅占10。由于肝癌细胞的生物学特性使原发性肝癌对放、化疗不敏感，因此失去手术机会的原发性肝癌主要以肝动脉栓塞介入治疗为主。三氧化二砷（As2O3）是传统中药，一直被人们认为是剧毒物质，近年来我国学者应用它治疗急性早幼粒细胞白血病（APL），收到了满意的疗效。大量的基础研

8、究表明三氧化二砷（As2O3）对肝癌细胞具有诱导分化、促进凋亡的作用。血管生成在肿瘤生长和转移中发挥重要作用，血管内皮生长因子（VEGF）是其中关键因素，有学者研究发现三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株VEGF的表达具有抑制作用，我们研究结果显示VEGF在治疗前的肝癌细胞中呈高表达，在治疗后呈低表达，说明三氧化二砷（As2O3）具有抑制VEGF表达的作用，这与文献报道相一致，治疗后血清中CD4+水平升高，CD4+/CD8+比值升高，提示病人的机体免疫力水平提高。AFP水平明显降低，说明肝癌的病情发展被控制。B超及CT检查表明治疗后肝癌病灶缩小，瘤体内血流减少，增强区病灶未见液化。病理学及组织学检查显示：注射后的瘤体破溃、液化、坏死、镜下见到大量的肝癌细胞坏死，细胞核、细胞器溶解，消失。电镜观察发现用药后大量肝癌细胞细胞膜断裂、基质密度降低，核染色体溶解、提示大部分肝癌细胞坏死。提示As2O3对肝癌细胞具有较强的细胞毒作用，局部应用可以直接杀伤肝癌细胞。电镜下还可见少数肝癌细胞表面微绒毛减少甚至消失，细胞体积缩小，核染色质浓缩，核边集或呈碎裂状，这些变化提示少部分肝癌细胞发生了细胞凋亡。本