Graves眼病眼眶组织病理与IgA、IgE表达的研究

1、    Graves眼病眼眶组织病理与IgA、IgE表达的研究        【摘要】目的观察Graves眼病患者眼部组织免疫球蛋白的表达及组织病理学的改变。方法收集Graves眼病患者眼外肌及眶脂肪19例，采用免疫组化、HE及特殊染色方法观察眼眶组织中IgA和IgE的表达、粘多糖的堆积及眼外肌受损情况。结果Graves眼病眼外肌肌内膜、肌外膜有IgA阳性染色，其表达程度与治疗有关，差异有显著性(P=0.034 6)；肌细胞、浸润的浆细胞及多形核白细胞IgE染色阳性，其表达程

2、度与病程和治疗均有关，差异均有显著性(P=0.019 1, P=0.007 2)。眼外肌细胞破坏，肌细胞和脂肪细胞间有大量亲水性酸性粘多糖堆积。结论IgA、IgE在Graves眼病自身免疫反应中起重要作用，免疫反应引起组织间粘多糖的堆积和眼外肌破坏。【关键词】格雷夫斯病自身免疫病理学免疫球蛋白A study on pathology and immunoglobulin of orbital tissues from cases with Graves ophthalmopathyZHOU Xiaohong, LUO Qingli, XIA Ruinan. Department of Opht

3、halmology, Affiliated First Hospital, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041【Abstract】ObjectiveTo investigate pathological changes and the expression, localization of immunoglobulins (IgA & IgE) in orbital tissues from patients with Graves ophthalmopathy. MethodsOrbital tissue

4、s were obtained at surgery from 19 patients with Graves ophthalmopathy and 17 control subjects. Immunohistochemical studies were carried out by using anti-IgA, anti-IgE antibody and a streptavidin-biotin-peroxidase detection system. In addition, hematoxylin-eosin, alcian blue and Masson trichrome st

5、ains were employed to demonstrate the pathologic changes in the tissues. Results12 of 17 samples from patients exhibited IgA positive staining for the connective tissue associated with the extraocular muscles and orbicularis oculi, however only 2 control muscles reacted minimally. IgE positive mater

6、ial was found in association with the majority of leukocytes and with muscle fibers in 13 patients, but only 4 control subjects displayed mild reactions. Significant expression of IgE was more often demonstrated in patients with eye disease of short course than in those of longer course. ConclusionT

7、hese results support the notion that the eye muscle fiber and fibroblast are important targets of the orbital autoimmune reaction in Graves ophthalmopathy in which IgA and IgE both play important roles. 【Key words】Graves diseaseAutoimmunityPathologyImmunoglobulin目前普遍认为Graves眼病是一种自身免疫性疾病1，可能是免疫自身稳定机制

8、紊乱而诱发的自身免疫反应2-4，其具体的发病机制目前尚不清楚。我们通过常规和特殊染色及标记链霉卵白素-生物素(labelled streptavidin-biotin, LSAB)的方法，观察19例Graves眼病患者眼部组织的免疫球蛋白，如IgA、IgE的表达，以及眼眶结缔组织增生、粘多糖堆积、眼外肌受损和纤维化的程度。以期探讨Graves眼病患者眼部的免疫功能状态，为了解其发病机制提供理论依据和线索。材料与方法一、标本采集收集19901996年因Graves眼病在我科行眼眶减压术后切除的眼外肌和眶周脂肪19例，男11例，女8例；年龄1864岁，平均47.1岁。所有患者均具有Graves眼病

9、典型的临床症状和体征，并经CT证实。其中急性期13例，慢性期6例。有14例患者曾经行免疫抑制剂治疗， 5例未经治疗。均除外其他自身免疫性疾病及眼眶肿瘤。其中下直肌10例，内直肌4例，上直肌2例，外直肌、上斜肌、下斜肌各1例，(19例中， 6例切取眶脂肪)。正常对照17例(其中4例切取眶脂肪)，年龄2554岁，均为意外死亡者。其中切取眼外肌包括下直肌7例，外直肌3例，上直肌、内直肌、上斜肌各2例，下斜肌1例。标本采用4甲醛固定，脱水，石蜡包埋，储存于干燥环境中。二、实验方法1.组织学染色：HE染色、阿辛蓝pH 2.5染色和Masson三色染色。2.免疫组化：采用LSAB法；1抗IgA(美国Zym

10、ed公司产品);IgE(美国Dako公司产品)；2及3抗(美国Victor公司产品)。阳性对照用中国福州迈新公司产品，阴性对照用PBS代替1抗。三、判定标准IgA染色按照显色的强弱、分布范围及特点分级：<25%呈碎片状记为；25%50%呈断线状为+；>50%呈连续状为+；无染色则记为。IgE染色的分级先计算阳性细胞阳性率的平均值，再换算成级增殖指数：25记为；2650记为+；>50%记为+；无染色则记为。四、统计学分析本文数据采用确切概率法检验两组IgA和IgE的表达，并检验IgA和IgE表达和Graves眼病病程、治疗的关系。检验水准=0.05。结果一、组织学染色实验组：眼

11、外肌均有不同程度的肌浆凝聚、颗粒变性、肌浆部分溶解、淡染和空泡形成，甚至出现溶解性坏死，仅存细胞核（1）。在急性期的病例中，可见大量淋巴细胞浸润，眶脂肪细胞的细胞间质明显增多，有大量亲水性弱酸性粘多糖堆积（2）。而慢性期病例以眼外肌纤维化为主（3）。正常对照无上述改变。二、IgA在眼眶组织的表达1.实验组与对照组间IgA表达的差异：实验组19例中，12例眼外肌的肌内膜和肌束膜有IgA的特异性染色，阳性率为63.16%（4,5），而正常对照组仅2例有少许着色，阳性率为11.77%，两组间比较差异有显著性(P=0.004 1)。2.IgA表达程度与Graves眼病病程的关系：病程短、急性期的病例与

12、病程长、慢性期病例的IgA表达差异无显著性(P=0.099 0)。3.IgA与Graves眼病治疗的关系：未治疗组与治疗组IgA表达，治疗组IgA明显低于未治疗组，差异有显著性(P=0.034 6)。三、IgE在眼眶组织的表达1.实验组与对照组IgE表达的关系：实验组中，13例可见眼外肌细胞、浆细胞和多形核白细胞(polymorphonuclear, PMN)有IgE的特异性染色，阳性率为68.42%（6,7）；正常对照组仅有4例出现弱阳性着色，阳性率为25.53%，两组间比较差异有显著性(P=0.017 0)。2.IgE表达程度与Graves眼病病程的关系：急性期的病例眼外肌可见较多的浆细胞

13、和PMN，且肌细胞、浆细胞和PMN的IgE染色明显强于慢性期者，差异有显著性(P=0.019 1)。3.IgE表达程度与Graves眼病治疗的关系：未治疗组IgE的表达明显高于治疗组，两组间比较差异有显著性(P=0.007 2)。1部分肌细胞出现肌浆凝及肌细胞颗粒变性，肌浆部分溶解，有空泡形成HE×4002脂及细胞间大量粘多糖积阿辛蓝染色×4003眼外肌的结缔组织出现明显的纤维化Masson三色染色×4004正常对照组眼外肌结缔组织无IgA特异性染色免疫组化×4005眼外肌结构缔组织IgA特异性染色免疫组化×4006正常对照组眼外肌结缔组织无I

14、gE特异性染色免疫组化×4007肌细胞和浸润的浆细胞IgE特异性染色免疫组化×400讨论一、IgA在眼外肌的表达与治疗的关系本研究通过LSAB法证实IgA在实验组眼外肌肌内膜、肌外膜结缔组织有特异性表达，并与治疗有显著相关性。与Rosen等5的ABC法实验结果相似。证实了Graves眼病眼外肌的早期改变是肌内膜结缔组织的炎症这一假说。可能在抗体识别眼眶某种抗原时，激活肌内膜纤维母细胞，先后产生透明质酸和胶原。而免疫抑制治疗能抑制IgA和IgE的表达，降低免疫状态，这是免疫抑制剂治疗该病的理论依据之一。二、眼眶组织IgE的表达与病程的关系Raikow等6研究发现，Graves

15、眼病患者血清中IgE有明显增高，且与急性Graves眼病的进展有关。本研究经LSAB法进一步证实，IgE主要分布于眼外肌、PMN和浆细胞，且与病程和治疗因素有关，这与Raikow等2采用APAAP(alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase)法证实IgE在PMN、浆细胞样细胞和肌细胞中的表达相一致。在所有患者中均有不同程度的IgE表达，且在急性活跃期患者表达更强，说明IgE可能不仅是参与发病的重要因素、是眼外肌早期炎症的标志，也是导致眼外肌纤维化的原因，这是通过类似正常组织受损后的反应机制实现的。本课题受四川省卫生厅科学研究基金资助（基金编号F

16、0139）作者单位：610041 成都，华西医科大学附属第一医院眼科参考文献1Bahn RS, Garrity JA, Gorman CA. Clinical review 13: diagnosis and management of Graves ophthalmopathy. J Clin Endocrinol Metab,1990,71:559-563.2Raikow RB, Dalbow MH, Kennerdell JS, et al. Immunohistochemical evidence for IgE involvement in Graves orbitopathy. O

17、phthalmology, 1990, 97: 629-635.3McLachlan SM, Prummel MF, Rapoport B. Cell-mediated or humoral immunity in Graves ophthalmopathy? profiles of T-cell cytokines amplified by polymerase chain reaction from orbital tissue. J Clin Endocrinol Metab, 1994,78:1070-1074.4Grubeck-loebenstein B, Trieb K, Sztankay A, et al. Retrobular T cells from patients with Graves ophthalmopathy are CD8 and specifically recognize autologous fibroblasts. J Clin Invest ,1994, 93:2738-2743.5Rosen CE, Raikow RB, Burde RM, et al. Immunohistochemical evidence for IgA