局部注射超抗原对小鼠膀胱癌抑癌效应的研究

1、    局部注射超抗原对小鼠膀胱癌抑癌效应的研究        摘要目的：研究超抗原抗肿瘤机理并评价SEA对T739小鼠膀胱癌的抑癌效应。方法：采用已建立T739小鼠皮下可移植性膀胱肿瘤模型，实验组在移植瘤处局部注射SEA，对照组应用生理盐水，观察治疗后各组的肿瘤重量和存活时间。结果：SEA组小鼠肿瘤重量（0.65±0.18g）明显低于对照组（4.28±0.86g），抑瘤率为84.7（P<0.01),SEA组小鼠存活期(23.1±2.74天

2、)比对照组(18.6±1.50天)处长(P<0.01),存活处长率为24.1%。结论:超抗原做为一种新的抗肿瘤生物制剂有明显的抑癌效应。关键词超抗原膀胱肿瘤抑癌效应Antitumor Effect of Locally Injected Superantigen on Bladder Cancers Implant in Syngenic MiceHan ConghuiZheng BaozhongTian Jun et alAffiliated Hospital of Shandong Medical University, Jinan AbstractObjective: T

3、o study the anti tumor mechanism of superantigen and to evaluate the anti bladder tumor effect of staphylococcal enterotoxin A (SEA) in mice. Methods: We produced a subcutaneous tumor model in T739 mice by implanting BTT739 bladder transitional cell cancer cells in syngeneic mice. The EA was locally

4、 injected to the mice at the site of implant in the trial group, and normal saline to the control group mice only. The weight of the tumor and the survival were recorded after treatment. Results: The average weight of tumors in the trial group (0.65± 0.18g) was lower than that of the control gr

5、oup (4.28± 0.86g) (P<0.01). The tumor inhibition rate of the trial group was 84.75, and the mean survival period of SEA group (23.1±2.47d) was longer than that of the control group (18.6±1.50d) (p<0.01) with a survival prolongation rate of  24.1%. Conclusion: The results in

6、dicate that superantigen has an obvious anti-bladder-tumor effect in T739 mice.Key WordsSuperantigenBladder tumorInhibition action 超抗原（superantigen，SAg）是一组细菌或病毒编码的新型蛋白质分子，1989年由美国White博士首先提出此概念，以与普通抗原或肽类抗原相区别，它活化的细胞毒T细胞（CTL）及促使活化T细胞分泌的多种细胞因子对肿瘤细胞有极其强大的杀伤作用，已逐渐成为肿瘤免疫治疗新的热点。目前研究的超抗原主要是金黄色葡萄球菌肠毒素（staph

7、ylococcalenterotoxin, SE），包括SE之A、B、C13、D、E等。本实验观察局部注射SEA对可移植性T739小鼠膀胱肿瘤的抑癌效应，现报告如下。1材料与方法1.1材料SEA冻干粉剂1mg/瓶，由军事医学科学院微生物流行病研究所提供。T739小鼠由中国医学科学院肿瘤医院购得，共40只，46周龄，体重19±1.8g，BTT739小鼠膀胱癌瘤株由北京医科大学泌尿外科研究所惠赠。1.2方法将40只T739小鼠随机分成4组，每组10只，分别用来做抑瘤效应观察和存活期观察。荷瘤鼠模型采用细胞悬液接种法1，每只小鼠左下肢内侧皮下接种肿瘤细胞悬液2.0×106.只，直

8、至小鼠死亡；对照组注射等量生理盐水，记录每只小鼠的存活时间。1.3统计学处理采用t检验。2结果40只小鼠接种1周内全部成瘤，肿瘤生长迅速，小鼠死亡时均极度消瘦，呈恶病质状态。根据以下公式计算小鼠的抑瘤率、存活延长率。抑瘤率=（1实验组瘤重均值/对照组瘤重均值）×100存活延长率=（实验组平均存活天数/对照组平均存活天数1）×100。具体结果见表1，2。表1SEA对T739小鼠膀胱癌的抑瘤效应（±s）分组鼠只数平均瘤重（g）抑瘤率（）实验组10对照组10表2SEA对T739荷瘤鼠存活时间的影响（±s）分组鼠只数平均荷瘤存活天数存活延长率（）实验组10对照组

9、103讨论机体免疫功能下降是肿瘤发病的最主要病因之一，而抗肿瘤免疫主要是细胞免疫，SAg是一种新型蛋白质分子，它可激活比普通抗原多达数千乃至数万倍的细胞毒T细胞（CTL）及促使活化的T细胞分泌多种足量的细胞因子如：TNF，TNF和INF，IL2，IL6等2，直接或间接地杀伤肿瘤细胞。国外实验显示，对分别接种皮肤癌细胞和结肠癌细胞的小鼠，用SEA注入体内后，肿瘤的发生率显著下降（与对照组比较P<0.01),局部组织中集中大量CTL细胞、单核细胞及多种细胞因子，引起肿瘤细胞的凋亡3，4。超抗原全身应用时，可产生毒素中毒综合征（高热、休克、皮疹）及自身免疫性疾病等毒副作用5。Uchiyama6

10、试验证明反复给小鼠注射SE可使反应性T细胞急剧消失，造成免疫应答减退或消失，目前该机制尚不明了，另一方面，超抗原活化的T细胞增殖后可能会对超抗原的再剌激发生免疫耐受7，如果发生免疫耐受，则无疑给临床治疗需连续应用同一种超抗原带来极大困难。为免除超抗原激活大量T细胞而引发疾病的危险，又消除因全身特异性T细胞免疫受抑而导致机会性感染的可能性，限制SAg的活性只在瘤区发挥是一关键措施。本试验通过建立T739小鼠膀胱肿瘤模型来观察SEA局部注射时的抑癌效应。从表1可知，在相同时间内，实验组与对照组肿瘤的生长速度有显著性差异，实验组肿瘤重量明显小于对照组（P<0.01),显示SEA对活体肿瘤的生长

11、有良好的抑制性,抑瘤率为84.7%。且SEA在提高机体免疫力的同时,尚有抗恶病质等恶性肿瘤并发症的效果8。表2显示给SEA局部注射后,实验组荷瘤鼠的存活时间比对照组明显处长(P<0.01),处长存活率达24.1%。本试验将SEA局部注射于肿瘤接种和生长部位,未发现荷瘤鼠有休克、全身感染等严重并发症出现,较有效地避免SEA使用时的毒副作用。1997年底,Giantonion博士9首先报道21例大肠癌和胰腺癌患者经SEA治疗后，取得较满意的临床效果。考虑膀胱癌多发生于膀胱腔内表面，SAg可经膀胱灌注后直接作用于肿瘤细胞，不会进入血液，这一解剖和病理特点为SAg仅在瘤区发挥效应提供了特殊有利条

12、件。本研究为SAg在膀胱肿瘤生物免疫治疗方面提供了一定的实验基础。本文课题受山东省卫生厅科研基金资助作者单位：山东医科大学附属医院泌尿外科（济南市250012）参考文献1Kuge S,Miura Y,Nakamura Y,et al. Superantigen induced human CD helper/killer T cell phenomenon selective induction of Th1 helper/killer cells and application to tumor immunotherapy. J Immunol,1995;154(4):17752蒋锋，周性明

13、，张忠林可移植性小鼠移行细胞癌模型的建立.中华泌尿外科杂志，1993;14(3):1843Newell KA,Ellenhorn JDI,Bruce DS,et al.In vivo T cell activation by staphyloccocol enterotoxin B prevents outgrowth of malignant tumor. Proc Natl Acad Sci USA,1991;88:10744Litton MJ. Dohlsten M, Lando PA, et al. Antibodytargeted superantigen therapy induc

14、es tumor infiltrating lymphocytes excessive cytokines production and apoptosis in human colon carcinoma. Eur J Immunol,1996;26(1):15Schievert PM, Shands KN, Dan BB, et al. Role of superantigen in human disease. J Infect,1993;167:9976Uchiyama J, XianJie Yan, Imanishi K, et al. Bacterial superantigens

15、mechanism of T cell activation by the superantigens and their role in the pathogenesis of infectious diseases.Microbiol Immunol,1994;38(4):2457Dohlsten M, Abrahmsen L, Bjork P,et al. Monoclonal antibodysuperantigen fusion proteins:Tumor specific agents for Tcellbased tumor therapy. Proc Natl Acad Sci USA ,1994;91:89458李同度,李从铸肿瘤坏死因子抗体和高聚金葡素对抗癌症恶病质的初步探讨中国肿瘤临床，1997;24(3):1889Giantonion BJ, Alpaugh PK, Schultz J, et al.