W2104-4 双流向酶联免疫法快速检测牛乳中黄曲霉毒素M

1、农产品快速检测技术课程-微教材微课编号W2104微课名称双流向酶联免疫法快速检测牛乳中黄曲霉毒素M1的原理所属模块生物安全快速检测子模块真菌毒素的快速检测关键词双流向酶联免疫法；牛乳；黄曲霉毒素M1是否通用通用 农产品 食品是否重点建设是 否微课类型讲授型微课形式PPT动画式教学设计模式直观演示法教学目标了解黄曲霉毒素M1的产生与危害理解双流向酶联免疫法原理教学内容知识点技能点1、黄曲霉毒素M1的产生与危害2、双流向酶联免疫法原理双流向酶联免疫法原理知识讲解案例导入：2011年12月24日，国家质检总局公布了近期对液体乳产品抽查的结果显示，蒙牛乳业（眉山）有限公司生产的一批次牛奶产品被检出黄曲

2、霉毒素M1实测值为，国家规定的最高值为，蒙牛该批次产品超标140%。蒙牛该批次超标的产品为该集团眉山公司2011年10月18日生产的250 mL/盒包装的纯牛奶产品。1.什么是牛奶中的黄曲霉毒素M1黄曲霉毒素是一类主要由黄曲霉菌属黄曲霉菌和寄生曲霉产生的次生代谢物，黄曲霉毒素不仅是一种化合物，而是一组化学结构类似的化合物总称，目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素及其衍生物有20多种，包括B1、B2、G1、G2、M1、M2等毒素和毒醇。由于不同化合物的形成条件不同，所以来源分布和毒性也不同。其中以黄曲霉毒素B1最为多见，危害性也最强，而牛奶检测超标的黄曲霉毒素M1则是黄曲霉毒素B1的代谢产物。2.生活中

3、的黄曲霉毒素黄曲霉菌广泛存在于土壤中，菌丝生长时会产生毒素，产生的孢子可扩散至空气中传播，而后会侵染合适的寄生体，产生黄曲霉毒素。当粮食未能及时晒干及储藏不当时往往容易被黄曲霉或寄生曲霉污染而产生此类毒素，所以，黄曲霉毒素主要存在于被黄曲霉菌寄生过的的粮食、油及其制品中。其中花生、花生油、玉米、大米、棉籽中最为常见，在动物性食品如肝、咸鱼中以及奶和奶制品中也比较常见。 3.黄曲霉毒素的毒性黄曲霉毒素是目前发现的强致癌物之一，它的毒性高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，是氰化钾的5倍，砒霜的40倍。研究发现，人类和乳牛摄入黄曲霉毒素B1 后，在其乳汁中变成黄曲霉毒素M1的转化率为0.3%-6.1

4、%。黄曲霉毒素M1毒性主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。4. 食品中黄曲霉毒素的国内外限量标准随着人们对食品安全问题关注度的提高，黄曲霉毒素污染问题也受到世界各国政府的日益关注和重视，各国纷纷制定黄曲霉毒素的限量标准，以保护本国食品安全和贸易利益。其中欧盟和日本对乳制品中的黄曲霉毒素M1最为严格，规定牛奶中的限量值为g/kg，在婴幼儿配方奶粉中不得检出。而我国食品安全国家标准食品中真菌毒素限量GB27612011规定乳及乳制品和婴幼儿配方奶粉中黄曲霉毒素M1的限量指标为g/kg。由此可以看出，我国食品中黄曲霉毒素限量标准与欧盟、日本、美国标准

5、相比存在一定差异。这样的比较，也为我国缩小与进口国标准的差异，增强出口产品的国际竞争力提出了更高要求。表1 部分国家和地区黄曲霉毒素M1 的限量标准5. 牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法为避免食品中黄曲霉毒素M1的污染对人体健康造成危害，针对食品中黄曲霉毒素M1的定性定量检测方法就显得尤为重要。传统检测方法有薄层层析色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）。但是由于TLC 只能定性不能定量，而且所需时间长；HPLC样品处理过程较为繁琐，仪器昂贵。所以，这两种方法在实际应用中都无法进行大范围推广。基于抗原抗体反应的免疫学检测方法具有灵敏性好、特异性强、操作简单等优点，可以进行现场大规模检测，能

6、够得到很好的推广。近年来，随着学科间的相互渗透，免疫学检测方法涉及的范围不断扩大，新的免疫学检测方法层出不穷。酶联免疫吸附法的原理是将抗体或完全抗原包被在固相载体上，测定时将待测样品和酶标抗原或抗体的混合物与固相载体表面吸附的抗体或抗原反应，再洗涤去除抗原抗体复合物或游离成分，然后加入酶作用底物，催化显色，最后加终止液终止反应。ELISA方法具有快速简便、特异性高、敏感性强、无需昂贵的仪器设备且对样品的纯度要求不高等优点，特别适应于大批样品的检测，在黄曲霉毒素M1 的快速检测上有较高的应用价值。由于该方法对样品纯度要求不高，所以在试验中易产生假阳性现象，且受外在环境影响较大。我国农业行业标准NY/T 1664-2008 规定了牛乳中黄曲霉毒素M1的快速检测双流向酶联免疫法标准，该方法主要原理是酶联免疫竞争原理，样品中