W4-4-3 水产品中孔雀石绿的快速检测-微教材

1、水产品快速检测专题-微教材微课编号及名称W4-4 水产品中孔雀石绿的快速检测微课形式 二维动画式教学设计模式任务驱动、案例分析法、直观演示教学目标了解水产品中孔雀石绿的来源及危害；掌握胶体金试纸法检测水产品中孔雀石绿的操作及结果判读教学内容涵盖知识涵盖技能1. 水产品中孔雀石绿的来源及危害；2. 胶体金试纸法测定孔雀石绿的原理；3. 胶体金试纸法测定孔雀石绿结果的判读。1. 胶体金试纸法测定孔雀石绿的操作；2. 胶体金试纸法测定结果的判读。一、认识孔雀石绿1.孔雀石绿是什么？孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿，严基块绿、孔雀绿，是一种有毒的三苯甲烷类有机物，它既是杀真菌剂，又是

2、燃料，易溶于水，溶液呈蓝绿色。水产品中为什么会出现孔雀石绿？长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。孔雀石绿在鱼内残留时间很长，且其具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，鉴于此，许多国家均将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。我国于2002年5月也将孔雀石绿列入食品动物禁用的兽药及其化合物清单中。二、胶体金试纸法检测孔雀石绿的原理胶体金试纸法测定样品中的孔雀石绿，这种方法快捷迅速、操作简便、灵敏度高，适合于水产品中孔雀石绿的快速检测。该方法采用胶体金免疫层析技术，试纸条一端为吸水纸，一端为金标垫，其中

3、含金标抗体-玻璃纤维膜。中间为线和线（见示意图1）。其原理是：当样品溶液滴入样品孔后，样品溶液中的孔雀石绿与金标抗体相结合，进而封闭金标抗体上孔雀石绿的抗原结合点，阻止金标抗体与纤维素膜上孔雀石绿蛋白偶联物结合，使之显色较弱，甚至不显色；反之，如样品溶液中没有孔雀石绿，则不能阻止金标抗体与纤维素膜上的孔雀石绿蛋白偶联物结合，从而显色较强。本实验选用产品的检测限为：隐性孔雀石绿0.5ng/mL(ppb)。图1 胶体金试纸构造图三、胶体金试纸法检测孔雀石绿的操作过程（一）实验准备1.实验材料：鲢鱼2.实验试剂和器材： 孔雀石绿胶体金试纸条、 孔雀石绿（水产） 快速检测试纸条试剂盒（内含 试剂A、试

4、剂B、试剂C、试剂D、试剂E）、 微孔板架、 电子天平、氮吹仪（或者电吹风），移液器（20L200L；100L1000L）、离心管（50mL、7mL、5mL）、均质器、 涡旋仪、离心机等（二）试验步骤1. 【样品前处理】 鱼虾蟹类水产品等去皮、脂肪，用均质器均质样本； 称取5g 均质样本到50mL 离心管中；加入3mL 试剂A和10mL 试剂B，立即涡旋振荡3min 至组织完全分散； 5000r/min 离心4min; 取上层溶液于15mL 离心管中，再加入1 袋试剂C，振荡混匀2min；5000r/min 离心4min; 取上层溶液4mL 于7mL 离心管中，加入200L 试剂D，立即振荡混

5、匀1min，60氮气/ 电吹风吹干或者水浴蒸干； 用移液器加入150L 试剂E 于吹干的离心管中，充分振荡至吹干固体完全溶解后待测。2.【检测步骤】 使用前将检测试纸条和待检样本恢复至室温； 用移液器取120L 待检液加入到微孔中，缓慢并充分吹打混匀，大约56 次后开始计时。 室温孵育1min 后将孔雀石绿快速检测试纸条膜面冲下插入到微孔中，然后开始计时，放置3min后，取出试剂条观察结果，其他时间判断无效。四、结果判读结果判读见下图：图2 胶体金试纸检测结果判读图阴性：T 线比C 线显色深或一样深，表示样品中待检测物质浓度低于检测限，或不含待检测物质。 阳性：T 线比C 线浅或T 线无显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。无效：C 线不显色，无论T 线是否显色，该检测均判为无效。五、注意事项1、使用前将检测试纸条和待检样本恢复至室温； 2、检测时避免阳光直射和电风扇、空调直吹； 3、取试纸时用手接触吸水纸端，尽量不要触摸试纸条下部的白色膜面；4、试剂D 使用完后立即密封，并置于2