抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义

1、抗型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义         【摘 要】 目的 了解抗型胶原抗体在类风湿关节炎(RA)中的临床意义。 以改进的酶联免疫吸附法(ELISA)检测179例RA患者和171例其他风湿病患者的血清IgG型抗天然及抗变性型胶原抗体水平。结果 RA患者抗天然和抗变性型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%，早期RA患者各为         【摘要】目的了解抗型胶原抗体在类风湿关节炎(RA)中的临床意义。以改进的酶联

2、免疫吸附法(ELISA)检测179例RA患者和171例其他风湿病患者的血清IgG型抗天然及抗变性型胶原抗体水平。结果RA患者抗天然和抗变性型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%，早期RA患者各为30.0%和36.7%。其他风湿病患者中各为3.5%和31.6%，健康人二者均为2.5%。抗天然型胶原抗体阳性RA患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(P0.05)。抗变性型胶原抗体和抗天然型胶原抗体同时阳性RA患者的CRP平均水平较高。结论抗天然型胶原抗体可以作为RA的一个辅助诊断指标。抗天然与抗变性型胶原抗体的检测有助于判断RA病情活动性。 Anti-type collagen

3、antibodies in rheumatoid arthritis ; 【Abstract】ObjectiveTo investigate the clinical significance of anti-type-collagens antibody in rheumatoid arthritis (RA).MethodSerum IgG antibodies to native and denatured type collagens (anti-nc and anti-dc ) were detected in 179 patients with RA by an improved

4、enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.ResultsIn RA,the positive rates of anti-nc and anti-dc were 22.3% and 36.9%;in early RA were 30.0% and 36.7%,respectively.In other rheumatic diseases the positive rates were 3

5、.5% and 31.6%,respectively and were both 2.5% in healthy controls.Anti-nc positive RA showed higher prevalence rate of RF and higher scores of patients global assessment of disease activity (P 0.05). presence of anti-nc and anti-dc concomitantly was associated with high CRP level in RA patients.Conc

6、lusionAnti-nc could serve as a supplemental parameter in diagnosing RA and together with anti-dc may help evaluate the disease activity. 【Key words】Rheumatoid arthritis;Anti-type collagen antibody;Enzyme-linked immunosorbent assay;C-reactive protein 抗型胶原抗体(antibodies to type collagen)与类风湿关节炎(RA)病情活动

7、性、严重性的关系仍有争论。本参照Fujii等1提出的实验条件检测179例RA患者、171例其他风湿病和118名正常人血清的抗型胶原抗体，探讨其在RA中的临床意义。结果报告如下。 1资料与方法 1.1一般资料 1.1.1病人组：为1994年9月至1999年3月在汕头大学医学院第一附属风湿科住院、门诊、随访的RA患者，共179例，全部符合1987年美国风湿病协会(ARA)的RA分类标准2。其中男性53例，女性126例，年龄1776岁，平均46.3岁。其中病程1年之内，X线未出现明显骨质破坏者(以下简称早期病例)30例。 1.1.2对照组：共289例，分为两组：一组为同期在汕头大学医学院第一附属医院

8、风湿科门诊或住院的非RA的其他风湿性疾病患者171例；另一组为正常对照组，共118名。 1.2抗型胶原抗体的体测 参照Fujii等1的方法。 1.2.1微量反应板的包被及封闭：正常羊血清于62 加热20 min，加入固体Tris (0.05 mol/L)、NaCl (0.15 mol/L)和2 mol/L HCl，调pH值至8备用(BNGS)。天然型胶原在46 水浴中加热20 min，即为变性胶原。 将天然型和变性型胶原分别溶解于0.05 mol/L的醋酸中，浓度为3 mg/ml。0.02 mol/L磷酸缓冲液(PB) pH 7.6稀释胶原溶液，使浓度为40 g/ml，加入微量反应板孔，每孔1

9、00 l，保鲜膜覆盖，4 过夜。 在与待检血清标本进行温育之前，包被好的微量反应板用含0.05%吐温20的生理盐水溶液洗涤3次，然后每孔加入100 l BNGS，室温(2428 )下封闭30 min，洗涤液洗涤3次。 1.2.2检测：BNGS稀释待检及阳性对照、阴性对照血清，转入微量反应板的微孔中，设二孔平行，每孔100 l，同时设空白对照。室温温育2 h，生理盐水-吐温溶液洗涤3次。含25%BNGS的0.1 mol/L TBS pH 8.0溶液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG，每反应 孔加入100 l，室温温育2 h，洗涤。将联苯二胺和过氧化氢溶解于柠檬酸-磷酸缓冲液pH 5.0中，使各

10、自浓度分别为0.05%和0.017%，加入反应孔，每孔100 l，37 温育30 min后每孔加入终止液1.25 mol/L硫酸50 l终止反应，酶标分光光度计492 nm处测吸光度(A)值。 1.2.3结果判断：以正常血清的平均A值加3个标准差作为正常值上限，待检血清A值超过者即被认为是阳性。 1.3统计学处理 计量资料数据采用t检验，计数资料数据采用2检验。 2结果 2.1ELISA工作浓度的选择：为便于比较，选择工作浓度时以天然型胶原作为包被抗原，测定血清抗天然型胶原抗体水平。 参照3的方法进行。结果表明，型胶原包被液浓度以40 g/ml，第二抗体辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG稀释度以1

11、400，血清以140稀释为最佳。 2.2RA患者及对照组血清抗型胶原抗体检测结果：179例RA患者中，抗天然型胶原抗体阳性者40例，阳性率22.3%，显著高于健康人和疾病对照组(3.5%和2.5%)(P0.05)；抗变性型胶原抗体阳性者66例，阳性率36.9%，与正常对照组(2.5%)相比差异有极显著性(P0.000 1)，与其他风湿病(31.6%)差异不大。30例早期RA患者抗天然型胶原抗体阳性9例，阳性率为30.0%。 抗天然型胶原抗体对RA诊断的敏感性为22.3%，特异性为96.9%，抗变性型胶原抗体对RA诊断的敏感性为36.9%，特异性为80.3%。 2.3抗型胶原抗体与RA病情的关系：抗天然型胶原抗体阳性患者RF阳性率高于阴性组(79.5%对61.8%，P0.041)，病情活动评分较高(8.5±9.5对6.6±1.5，P0.027)。抗变性型胶原抗体阳性RA患者血清CRP平均水平较阴性组高(24.8%对19.6%，P0.003)。晨僵时间、压痛关节数、肿胀关节数、干燥综合征并发率、类风湿结节的发生率、功能分级二组间无统计学差异。IgG、IgM、IgA、-球蛋白，ESR水平、ANA阳性