肺表面活性物质在缺血预处理肺保护中的作用

1、肺表面活性物质在缺血预处理肺保护中的作用    【关键词】  缺血/再灌注    Role of pulmonary surfactant on lung ischemic preconditioninginduced protection against lung ischemia reperfusion injury【Abstract】 AIM: To investigate whether the pulmonary surfactant (PS) is involved in the protective

2、effects of lung ischemic preconditioning (IPC) against lung ischemia reperfusion (I/R) injury. METHODS:  In vivo I/R injury of rabbit was induced by blocking the hilum of left lung. The arterial partial pressure of oxygen (PaO2), lung permeability index, leucocyte count and neutrophils percenta

3、ge in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were detected as indexes of lung injury. Total phospholipid (TPL), saturated phosphatidylcholine (SatPC) and total protein (TP) in the BALF were respectively measured by Bartlett method, Mason method and Lowry method. The activity of PS was presented by the

4、ratio of SatPC/TP and SatPC/TLP. RESULTS:  I/R injury markedly reduced the arterial oxygen pressure, which increased in IPC group (P<0.01). The lung permeability index, leucocyte count and neutrophils percentage in BALF of I/R group were significantly higher than those in control group, whic

5、h markedly reduced in IPC group (P<0.01). The SatPC/TP(ng/g) and SatPC/TLP（）in I/R group were 124±23 and 36.5±4.9, respectively, both significantly lower than those in control group (P<0.01). The two indexes in IPC group were 159±28 and 44.7±6.8, respectively, markedly high

6、er than those in I/R group (P<0.01). CONCLUSION:  Lung IPC has a remarkable protective effect against I/R injury. The effect is related to the maintaining of the content and activity of PS.【Keywords】 lung；reperfusion injuries;ischemic preconditioning；pulmonary surfactant【摘要】 目的： 探讨肺表面活性物质（pu

7、lmonary surfactant, PS）是否参与了肺缺血预处理（IPC）对肺缺血/再灌注损伤（I/R）的保护作用. 方法： 建立兔在体I/R损伤模型，实验分为对照组（Control）,I/R组和IPC组. 通过阻断左肺门造成兔在体I/R损伤，检测各组动脉血氧分压（PaO2）、肺通透性指数、支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞数和中性粒细胞百分比；采用Bartlett法、Mason法和Lowery法检测BALF中总磷脂（TPL）、胞和卵磷脂（SatPC）和总蛋白（TP）含量，PS活性以SatPC/TP和SatPC/TLP来表示. 结果： 肺I/R损伤后，PaO2较正常对照组显著降低（P&l

8、t;0.01），肺通透性指数及BALF中白细胞数和中性粒细胞百分比亦明显升高（P<0.01）；IPC组上述指标较I/R组均有显著改善（P<0.01）. I/R损伤组SatPC/TP(ng/g)和SatPC/TLP（）分别为124±23和36.5±4.9，明显低于对照组（P<0.01），IPC组上述两指标分别为159±28和44.7±6.8，显著高于I/R组. 结论: 缺血预处理可通过维持PS的分泌和功能而对肺I/R损伤有显著的保护作用.【关键词】 肺； 缺血/再灌注； 缺血预处理； 肺表面活性物质0引言肺缺血/再灌注（ischemia

9、reperfusion, I/R）损伤常见于肺动脉袖状切除、肺移植术，可致肺动脉高压、肺水肿及呼吸衰竭等，严重影响患者术后肺功能的恢复. 因此，对肺I/R损伤保护作用的研究具有十分重要的意义. 1986年，Murry等1首次报道了心肌缺血预处理（ischemic preconditioning, IPC），即短暂缺血后恢复血流再灌注，心肌对随后出现更长时间的严重缺血产生耐受的状态. 此后在多种脏器均发现IPC现象，已有报道IPC对肺I/R损伤也具有保护作用，但是其作用机制尚未明确. I/R损伤可导致内源性肺表面活性物质（pulmonary surfactant, PS）异常，而引起呼吸功能下降

10、2，IPC对PS活性有无影响鲜见报道. 我们在兔I/R损伤模型的基础上，探讨IPC对肺I/R损伤的保护作用及其对内源性PS活性的影响，为临床上肺I/R损伤的防治提供新的思路和理论依据.1材料和方法11材料新西兰大白兔36只（第四军医大学实验动物中心提供，合格证号陕动字08015号），体质量（2.0±0.2）kg，牛血清白蛋白购于美国Sigma公司.12方法将大白兔在无特殊病原体(SPF)的条件下随机分为3组，每组12只，即对照组（Control），I/R组和IPC组.121制作兔原位肺缺血/再灌注模型手术前肌注阿托品0.1 mg，经耳缘苯巴比妥钠麻醉后(30 mg/kg, 

11、 iv)仰卧位固定于手术台上，气管切开插管，接动物呼吸机，呼吸频率30次/min，潮气量10 mL/kg，吸入氧浓度1 L/L，股动脉插管监测动脉压. 胸骨正中切口，开胸后，肝素1 mg/kg iv. IPC组为阻断左肺门5 min，开放5 min，反复3次，然后阻断左肺门60 min，再灌注120 min. I/R组为直接阻断左肺门60 min，再灌注120  min. 对照组为开胸后仅游离肺门而不进行其他处理的假手术组.122氧分压（PaO2）测定实验结束时，取半数动物用肝素化抗凝空针自主动脉取血2 mL, 保持密闭，测PaO2.123肺通透指数测定实验结束后抽取半数动物肺动脉血

12、制备血清；以Hanks液经左主支气管灌洗，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），采用Lowery法检测BALF上清及血清中蛋白浓度，BALF中蛋白浓度与血清蛋白浓度之比为肺通透性指数.124BALF中白细胞分类计数取BALF离心沉渣涂片，瑞氏染色，光镜下计数BALF中的白细胞数量，并进行细胞分类.125PS测定用生理盐水10 mL/kg对其余半数动物经左主支气管灌入左肺,进行支气管肺泡灌洗，然后灌洗液流出，再注入与前次流出量相等的生理盐水，同法操作，共灌洗3次. 灌洗液经双层纱布过滤后计算回收量，然后于4下1500 r/min离心10 min，取上清分装后保存于-70低温冰箱中. 采用Lowry法检测BALF中总蛋白（total protein，TP