黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影

1、黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影         作者：龚明玉， 于晓敏， 周晓慧， 杨鹤酶 【摘要】 目的观察黄芩茎叶总黄酮（Scutellaria Baiculensis Stem-leaf Total Flavonoid，SSTF）对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min，然后松开再灌注2 h的方          

2、60;                 作者：龚明玉， 于晓敏， 周晓慧， 杨鹤酶【摘要】  目的观察黄芩茎叶总黄酮（Scutellaria Baiculensis Stem-leaf Total Flavonoid，SSTF）对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min，然后松开再灌注2 h的方法，复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。实验分为假手术组、缺血再灌注组（IR）

3、，SSTF不同剂量治疗组。采用原位缺口末端标记法（TUNEL）及免疫组化法，检测心肌细胞凋亡指数（AI），Bax和Bcl-2基因蛋白表达。结果与假手术组比较，缺血再灌注组AI增加，Bax阳性表达增强，Bcl-2阳性表达减弱（P0.01）；与缺血再灌注组比较，SSTF组AI、 Bax阳性表达下降（P0.05或P0.01），Bcl-2阳性表达上调（P0.05或P0.01）。结论 SSTF能明显抑制IR引起的心肌细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bax蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达，提高Bcl-2/Bax比值有一定关系。 【关键词】  黄芩茎叶总黄酮 再灌注损伤 细胞凋亡 基因表达Abstr

4、act：ObjectiveTo observe the effects of total flavonoid(SSTF) in  Scutellaria Baiculensis Stem-leaf on myocyte apoptosis and the expression of apoptosis-associated genes in rat hearts with acute myocardial ischemia and reperfusion（IR）.MethodsThe left anterior descending branch of coronary artery

5、 was ligated for 30 min and reperfused for 2h to make a myocardial ischemia-reperfusion model in rats.The experiment rats were divided into five groups :sham, ischemia-reperfusion(IR),SSTF(17.5，35，70 mg·kg-1·d-1)group. Apoptosis index of(AI) of myocardium was detected by in situ end labeli

6、ng method,and the protein expression of Bcl-2 and Bax genes cardiomyocytes was shown through immunohistochemistry method.ResultsIn IR group,AI was significantly increased , a protein expression of Bcl-2 gene was decreased and protein expression of Bax gene was increased.Compared with sham group,SSTF

7、 could decrease AI(P0.05，0.01)，up-regulate protein expression of Bcl-2 gene (P0.05，0.01)，and down- regulate protein expression of Bax gene (P0.05，0.01).ConclusionSSTF can significantly inhibit cardiomyocyte apoptosis in ischemia-reperfusion rat hearts.The possible mechanism is to raise the ratio of

8、Bcl-2/Bax proteins by increasing  the expression of bcl-2 gene and decreasing the expression of bax gene.Key words：Total flavonoid in Scutellaria Baiculensis Stem-leaf；  Reperfusion injury；  Apoptosis ；  Gene expression    近年来，研究发现细胞凋亡是心肌缺血再灌注过程中心肌细胞死亡的重要机制之一1。细胞凋亡

9、的发生、发展受多种基因的调控，其中凋亡加速基因bax和凋亡抑制基因bcl-2被认为与细胞凋亡密切相关2。本实验观察大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的发生情况，并探讨SSTF对心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。1  材料与方法1.1  动物健康SD大鼠40只，体重（230±20）g，雌雄各半（由承德医学院实验动物中心提供）。1.2  药品、试剂及仪器SSTF纯度为61.8%，批号010608，由本院省重点实验室中药研究所提供，用饱和NaHCO3溶解配置后灌胃。原位细胞凋亡检测试剂盒及Bax ，Bcl-2免疫组化试剂盒购

10、自北京中杉生物技术有限公司产品。DB-3型心电图机，上海光电医用电子仪器有限公司；DW-2000型动物人工呼吸机，上海嘉鹏科技有限公司；RM-2155型石蜡切片机，瑞士LeiCa有限公司产品。1.3  大鼠心肌缺血再灌注模型的复制10%乌拉坦腹腔注射麻醉（1.0 mg/kg），仰卧位固定，用针型电极插入大鼠四肢皮下记录标准肢体II导联心电图，气管插管，接人工呼吸机，呼吸频率60 次/min，从胸骨左缘34肋间切开胸壁，切开心包膜后，暴露心脏，以左冠状静脉主干为标志，于左心耳根部下方2 mm处进针穿过心肌表层在肺动脉圆锥旁出针，将一段直径2 mm，长5 mm的硅胶管置于结扎线与心肌之间

11、备用，稳定10 min后进行实验。1.4  实验分组40只SD大鼠随机分为5组：假手术组（sham operation group,SO）：用3号丝线穿过冠状动脉左前降支，但不结扎。心肌缺血再灌注组(Ischemia Reperfusion group,IR)：结扎冠状动脉左前降支，造成心肌缺血，30 min后剪断缝合线，取出硅胶管，再灌注2h，假手术组和心肌缺血再灌注组于术前分别给予相应容积的生理盐水，连用1周；SSTF小剂量组(SSTFI组)：手术前给予SSTF灌胃17.5 mg·kg-1·d-1，连用1周，其余同组。SSTF中剂量组(SSTFII组)：手术前给予SSTF灌胃35 mg·kg-1·d-1，连用1周，其余同组。SSTF大剂量组(SSTFIII组)：手术前给予SSTF灌胃75 mg·kg-1·d-1，连用1周，其余同组。  &#