小建中汤抗炎免疫作用的实验研究

1、小建中汤抗炎免疫作用的实验研究         【摘要】  目的研究小建中汤的抗炎免疫作用。方法以二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及醋酸诱发小鼠血管通透性增高的炎症模型研究小建中汤的抗炎作用；采用小鼠炭粒廓清实验和溶血空斑生成，观察小建中汤对免疫系统的作用。结果小建中汤对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠血管通透性增加有明显的抑制作用，给药组与模型组比较差异显着；能提高吞噬指数和溶血空斑OD值。结论小建中汤具有抗炎、增强机体免疫力的作用，为其临床应用提供药理学实验基础。 【关键词】  小建中汤 抗炎作用

2、 免疫功能Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of Xiaojianzhong decoction on anti-inflammatory and immune function of experimental animal. MethodsThe anti-inflammatory effect of Xiaojianzhong Decoction was evaluated by ear edema model induced by xylene and HAc-induced peritoneal capillary permeab

3、ility, respectively. The effects of Xiaojianzhong Decoction on specific and non-specific immune response were evaluated by haemolytic plaque forming cell and carbon clearance rate in mice. ResultsXiaojianzhong decoction could inhibit ear edema in mice induced by xylene and HAc-induced capillary perm

4、eability, and significantly increased carbon clearance rate and haemolytic plaque forming cell in normal mice.Compared with model group, there was a significant difference.ConclusionXiaojianzhong Decoction can inhibit acute inflammation and increase specific and non-specific immune function.Key word

5、s：Xiaojianzhong Decoction;   Anti-inflammatory effect;  Immune function   小建中汤首见于伤寒论，由白芍、大枣、桂枝、甘草(蜜炙)、生姜5味中药组成，具有温中补虚、和里缓急之功效1。用于治疗中焦虚寒，气血不足之证兼伤寒表证，以及治脾虚腹痛兼少阳邪郁者。因其功能建立中焦脾胃之气，故名“建中”。本方既有双补阴阳、调补脾胃的作用，又有调和营卫兼以解表功能。由于小建中汤配伍的多层性，故应用极为广泛。其功能温中补虚，缓急止痛主要治疗脾胃虚寒所致的脘腹挛痛，喜温喜按，或虚劳发热等症。历

6、代医家对小建中汤的论述颇多，无论是通过方论还是应用于临证，都显示出小建中汤的应用价值相当可观，尤其在调理或治疗消化系统疾病(脾胃虚弱) 和增强体质方面,都起着积极作用2，但是其基础药理研究内容较为少见。本文根据其临床应用特点以小鼠急性炎症反应、炭粒廓清实验以及溶血空斑生成来考察小建中汤的抗炎免疫作用。1  材料与仪器1  药材白芍、大枣、桂枝、甘草(蜜炙)药材饮片均购自同济堂药店，生姜、饴糖购自贵阳红边门农贸市场；所有药材经贵阳医学院生药学与药用植物学教研室陈祖云副教授鉴定，白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall的根；大枣为鼠李科植物枣Zizip

7、hus jujuba Mill.的干燥成熟果实；桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl. 的干燥嫩枝；甘草(蜜炙) 为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎；生姜为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc. 的新鲜根茎，均符合中国药典（2005版）要求。按照传统中药汤剂的煎煮方法煎煮，最后用旋转蒸发仪50浓缩至 1.2 g（以白芍生药计）/ml。2  仪器721型分光光度计，上海分析仪器厂；上皿电子天平，上海天平仪器厂出品，型号JA-1203。3  动物昆明种小鼠，体重1822g，兼用，

8、由贵阳医学院实验动物中心提供动物合格证号：SCXK（黔）20020001。饲养条件：雌雄分笼饲养于洁净动物实验室，每笼10只。动物室光照充足，通风和空调设备良好，室温1825，相对湿度50%70%，实验室按常规定期消毒。2  方法2.1  二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制实验3取小鼠40只，体重3035 g，按体重随机分层分为4组，每组10只。小建中汤大、小剂量组给药剂量分别为6，12 g（以白芍生药计）/kg；模型组给予等容积的蒸馏水，给药容积为10 ml/kg；阳性对照组（醋酸泼尼松组）给予醋酸泼尼松20 mg/kg。各组灌胃给药1次/d，连续7 d，末次给药30 min后，

9、各鼠右耳分别涂以二甲苯30 l/只致炎，左耳不涂致炎液作为对照，致炎后1 h将小鼠脱颈椎处死，分别取左、右耳，用8 mm打孔器沿左、右耳廓相同部位打孔取相同大小两耳片，电子天平称重，以两耳片重量差（右耳重-左耳重）作为肿胀程度的指标；计算肿胀抑制率。   肿胀抑制率（%）=模型组肿胀度-给药组肿胀度模型组肿胀度×100%2.2   对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响4分组与给药同“2.1”项。末次给药后45 min尾静脉注射1%伊文思蓝生理盐水10 ml/kg，随即腹腔注射7%冰醋酸生理盐水溶液0.2 ml/只，15 min后脱颈椎处死，剪开腹部皮

10、肤肌肉，用6 ml生理盐水分3次洗涤腹腔，吸管吸出洗涤液，合并后加入生理盐水调整容积至10 ml，3 000 r/min离心15 min，取上清液在590 nm比色测定吸收度。按公式计算小鼠腹腔毛细血管通透性抑制率。腹腔毛细血管通透性抑制率（%）=（模型组腹腔液A590-给药组腹腔液A590）/模型组腹腔液A590×100%。2.3  小鼠碳粒廓清实验5昆明种小鼠40只，随机分成4组，即空白对照、阳性对照及小建中汤大、小剂量组。分组给药同“2.1”项。末次给药1 h后，各鼠尾静脉注射中华墨水10 ml/kg，分别在1，5 min时在小鼠眼静脉丛处用尖嘴吸管(预先用肝素湿润)

11、吸取血液20 l，溶于2 ml 0.1%Na2CO3溶液中，在721分光光度计上于650 nm处测定吸光度(A值)。血后立刻放血处死动物，摘取肝、脾脏，称其湿重，按公式计算廓清指数K值K=(logA1 - logA2)/(t2 - t1)和吞噬指数值，= 体重/ (肝重+脾重)×K1/3。2.4  溶血空斑实验6昆明种小鼠40只，随机分成4组。分组给药同“2.3”项。末次给药第24 h，每鼠腹腔注射4×108/ml SRBC 1 ml，将SRBC免疫4 d的小鼠脱颈椎处死，取脾脏，加入RPMI 1640液，制成均匀悬液，过200目钢丝网，RPMI 1640液清洗2

12、次，制成脾细胞悬液(约5×106/ml)。取该悬液0.5 ml，加入0.2SRBC和110豚鼠血清各0.5 ml，混匀。另设不加补体作为空白对照，37温育1 h后离心，3 500 r/min，离心10 min，取上清于721型分光光度计413 nm处比色，检测溶血空斑形成情况。2.5   数据分析实验数据用SPSS11.0进行处理分析，数据均以±s表示，实验结果采用t检验。3  结果3.1  二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制实验小建中汤各组、醋酸泼尼松组与模型组比较两耳重量差均有统计学意义（P0.01或P0.05），实验结果提示小建中汤对二

13、甲苯引起小鼠急性耳廓肿胀有明显的抑制作用。结果见表1。表1  小建中汤对小鼠耳廓肿胀炎症的影响（略）与模型组比较，*P0.05，*P0.013.2  小建中汤对醋酸所致小鼠血管通透性的抑制作用小建中汤高剂量组、醋酸泼尼松组对小鼠腹腔液中伊文思兰浓度较模型组明显减少（P0.05或P0.01），小建中汤低剂量组具有抑制小鼠毛细血管通透性的趋势。提示小建中汤对醋酸所致毛细血管通透性的增加有显着抑制作用，但是作用弱于醋酸泼尼松见表2。表2  小建中汤对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（略）与模型组比较，*P0.05，*P0.013.3  小建中汤对小鼠碳粒廓清功能的

14、影响小建中汤大剂量组与空白对照组比较可明显增加小鼠吞噬细胞的廓清指数K值和吞噬指数值（P0.05）。醋酸泼尼松组与空白对照组比较可明显降低小鼠吞噬细胞的廓清指数K值和吞噬指数值。结果表明小建中汤可提高小鼠巨噬细胞的吞噬功能。结果见表3。         表3  小建中汤对小鼠碳粒廓清功能的影响（略）与空白对照组比较,*P0.05，*P0.01；n=103.4  小建中汤对溶血空斑生成的影响小建中汤大剂量组与空白对照组比较可明显增加小鼠溶血空斑生成，A413值显着增加，与空白对照组比较差异显着（P

15、0.05）。醋酸泼尼松组与空白对照组比较可明显抑制小鼠溶血空斑生成，A413值显着降低，与空白对照组比较差异显着（P0.01）。结果表明小建中汤对小鼠B细胞免疫具有促进作用。结果见表4。表4  小建中汤对小鼠溶血空斑生成的影响（略）与空白对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=104  讨论   小建中汤为仲景名方，主要适用于脾胃阳虚，中气不足，元阳不振，以及阴阳水火升降失调所致的脾胃虚寒证，中医学中的脾胃，在生理功能和病理表现上大致相当于现代医学的消化系统，并与水盐代谢和造血系统密切相关。当前临床主要用于治疗胃及十二指肠溃疡、溃疡性结肠炎、胃酸过多

16、、胃酸过少、慢性胃炎以及产后体虚等疾患7。方中白芍8、桂枝9、甘草等10有效活性成分均具有显着的抗炎作用，本研究采用两个炎症模型，实验结果提示小建中汤对小鼠二甲苯诱导耳肿胀与醋酸所致腹腔毛细血管通透性增加具有显着的抑制作用，提示小建中汤对炎症具有显着的抑制作用，这为其临床应用于消化道溃疡等疾病提供了药理学实验基础。   近年来的研究结果提示，消化道系统疾患与免疫系统功能的异常密切相关11。网状内皮系统/单核巨噬细胞系统是机体最重要的防御系统，其功能反映机体非特异性免疫能力，它具有强大而迅速的吞噬廓清异体颗粒或某些可溶性异物的能力，并能迅速清除体内自身产生的某些有害物质12。

17、本研究采用碳粒廓清实验反应体内单核巨噬细胞的吞噬功能，小建中汤明显提高K值和值，提示小建中汤可以提高机体非特异性免疫的能力。体液免疫是特异性免疫的重要组成部分，与细胞免疫相辅相成，共同发挥免疫作用。溶血空斑实验不仅反映抗体形成的细胞数量，也提示合成抗体的能力，实验结果提示，小建中汤明显提高溶血空斑A413的值，提示其具有增强机体特异性免疫系统能力。以上实验结果提示，小建中汤能够增强机体特异性与非特异性免疫系统，为临床应用提供了新的实验基础与理论补充。   本研究初步证实小建中汤的抗炎和免疫调节，其作用机制有待于进一步的深入研究。【参考文献】  1 许济群. 方剂学

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