Waterse2695高效液相色谱仪操作规程

1、Waters e2695 高效液相色谱仪操作规程1目的 指导和规范 Waters e 2695 高效液相色谱仪的操作。2适用范围该操作规程适用于 Water e 2695 高效液相色谱仪的操作。3职责 检验员应按操作规程进行仪器操作，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。4操作4.1仪器组成和开机4.1.1仪器组成本仪器由 Waters e 2695 分离单元、 Waters 2998 二极管阵列检测器、 Waters ELSD2424 蒸发光散射检测器、Empower 色谱工作站和打印机组成。Waters e2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气，可 容纳 1

2、20 个样品瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘； 显示器，键盘用户界面。4.1.2开机4.1.2.1依次接通 Waters e 2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。4.1.2.2接通 Waters e2695 分离单元后，约 20s 仪器开始自检，约 3mn 内各部件的 初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。4.2溶剂管路系统的准备4.2.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按Menu Status 】，进入“ Status(1) ”屏幕，光标选“Degasser ”，按 Enter 】。4.2.2灌注当色谱仪流

3、路没有溶剂或系统中有空气时，需进行干灌注 (DryPrime) ，注入流动相。 否则，进行湿灌注 (Wet Prime) 以驱除气泡。干灌注：按主机面板上 Menu Status 】，进入 “Status(1) ”显示，按 Direct Function 】，选择“ Dry Prime ”，选溶剂通道，如 Open A， 选“DurationIIi按数字键输入 5 分钟，按” COntinue ”，待限定时间结束后，重复操作，使所需的溶剂通道注满流动相。湿灌注：进入“ Status(1) ”显示，选溶剂通道，输入100，按DirectFunction，选“ Wet Prime ”，按【OM ,

4、根据面板提示设置流速及时间(默认流速为 7. 5ml/min，一般不用更改，时间可设置为5min)，按【OK】。4.3样品管理系统的准备4.3.1冲洗自动进样器在“ status(1) ”，屏幕下，光标选“ Compositio n ”，输入流动相的组成。按【Direct Fun ctio n, 光标选“ Purge Injector ”，按【 Enter ，显示“ Purge Injector ”屏幕，输入“ Sample Loop Volumes6. 0”，光标下移“ Compression Check ”，按任意数字键，按【 OK。4.3.2冲洗进样针在主屏幕下， 按 【Diag,显示“

5、Diagnostics ”屏幕， 按 【Prime Ndl WasU ,显示“Prime Needle Wash屏幕，按Start , 30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【 Close】、【Exit】。4.3.3冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag,显示” Diag no sties ”屏幕，按【Prime Seal WasH ,显示“ Prime SealWash ”屏幕，按 Start ， 30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close 】、【 Exit 】。待排放口有水流出，按【 Half 】、【 Close】、【Exit 】。4.3.4装入样品与转盘打开样品舱门，显示Doo

6、r is Open屏幕，将样品盘取出，把样品瓶插入样品盘后，装入样品盘，按【Next】直至所有样品盘装毕，关好舱门。4.4色谱柱平衡 换上检验所需的色谱柱和流动相，进入 Status（1） ”显示，选择流路、设定流速、柱温，按【Enter】开始注入流动相，通常情况下约1 530 分钟色谱柱可达到平衡，可以开始进样，采集数据。5 Empower 3 软件的应用5.1建数据采集方法5.1.1双击电脑屏幕上的Empower快捷图标，出现 Empower 登录界面，输入用户名 和密码。5.1.2单击高级键，选择用户类型和 QuiekStart 界面。5.1.3选择 QuiekStart 界面，点击“确

7、定” ，然后选择选定的操作项目以及色谱系统 （仅 查看数据可选择色谱系统中的“没有系统” ） ，单击“确定” 。5.1.4登录 Empower 的 QuickStarlt 界面。5.2编辑仪器方法和方法组（以 e2695_2998 为例）。5.2.1采集栏单击“方法组编辑向导” ：5.2.2选择“新建”选项。5.2.3弹出仪器方法编辑器。5.2.4单击“2695”，弹出 2695 编辑界面。5.2.4.1 Alia nee系统（包括 2695、2795 和 2695D）通用编辑页面中，可选择“单次输送体积”，请针对不同的流速选定适当的单次输送体积，以确保最佳的流速精度与准度。5.2.4.2查看

8、脱气选项，确认设置正确。5.2.4.3流量选项中设置“泵模式” 、“总流量”以及流动相配比。5.2.5单击 2998，弹出 2998 编辑界面。5.2.5.1 3D数据采集：在通用栏中选择启用3D 数据，输入检测波长的范围；5.2.5.2采集 2D 数据，点击“ 2D 通道”，最多可同时采集 8 个不同波长的通道的数据。5.2.6点击“文件” ，选择“另存为” ：输入仪器方法名称，点击“保存” ；点击“文件” ， 选择“退出” 。5.2.7在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步 （N） ”。5.2.8在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择“无处 理”、“无报告

9、” ） ，点击下一步。5.2.9输入方法组名称，单击“完成” 。5.3进样点击进入“平衡系统监视基线”界面，选择相应的仪器方法，点击“平衡监视器， 在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击“进样”。5.3.1单进样：点击，进入“定义单进样参数”编辑界面，输入样品名、功能、方法组 等参数，点击“进样” 。5.3.2使用向导建立样品组和样品组方法。5.3.2.1选择“运行样品” ，然后单击“样品队列” ，进入样品列表。5.3.2.2单击“新建样品组向导” ，建立样品组。5.323选择创建样品组方法类型为“Lc 或 PDA ,然后点击“定义样品板”。5.4.2.8在“选择标准进样在那里开

10、始”中选择合适的选项。检查开始加载样品瓶的位置 是否正确，点击“下一步” 。5.4.2.9在描述标样中需要设置一下内容：样品组中的标样数：X；每瓶标样进样次数：X;进样体积：X；运行时间：XX;方法组 XXX 点击“选项”：输入下一进样延迟时间X;点击下一步。5.326样品数：X;每瓶样品进样次数：X;进样体积：X;运行时间：X;方法组 X;点击选项：输入下一进样延迟时间X;点击下一步。在识别标准样界面中，输入标样名称，增量后缀使用1在识别样品界面中，输入样品名称，增量后缀使用a。点击下一步。运行模式选项中选择 “只测试”。查看摘要， 点击下一步。【注： 弹出组分编辑器， 输入标样中每个组分的

11、名称 （内标不需要输入含量 ） 。可以直接关闭该窗口， 在处理数据的时 候再添加】。点击完成，在菜单栏中选择文件。为方法组命名并保存样品组方法。单击“样品队列” ，打开运行样品窗口， 点击运行当前样品组方法键， 选择运行。选择需运行的样品组名称，点击运行。5.3.2.13 样品组运行过程中，在“正在运行”栏中正在运行以及运行完毕的样品以红色 显示。 （注：以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正，一般在运行样品前删除该行或 改为“平衡” 。 ）5.4建立数据处理方法5.4.1 2D 数据处理方法5.4.1.1单击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目标样品组。在样品组上点击鼠标右键选择“查看相关

12、T通道”，样品组在单个通道中显示。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看，会显示未处 理的色谱图形。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 点击处理方法向导快捷键，选择创建新处理方法，点击确定。0464f-Numbered_e

13、e8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 确认处理类型为 LC,积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，选择 确定。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 常按鼠标左键，选择色谱图上最窄峰。（注：在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰。点击鼠标右键全视图可以还原色谱图。）0464f-Numbered_ee8b2

14、523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 在色谱图的积分界面选择一段典型基线作为积分的阈值，点击下一步。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 常按鼠标左键，在基线上选取积分的起止时间点。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7

15、-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰 （或键入相应数值 ）。小于此 峰高 90的峰将不被积分。点击下一步。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 定量方法选择面积，组分信息选择含量，校正类型选择线性。点击下一步。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4

16、b2-8254be39a91b( 跨通道内标样界面点击否。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 因为选择的是标样，点击峰 1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或 者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 如

17、果是多点校正样品，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。（单点校正可在这里添加含量 ） 。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 选择外标法：0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 选择单一内标样，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称，然后点击 下一步。0464f-Numbered_

18、ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 选择多重内标需要输入所有内标的名称。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结 果，包括积分。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Number

19、ed_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。 积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。有任何更改均需再次保存处理方法。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7

20、-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 点击峰表底部可预览 2D 通道和峰。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 点击“浏览项目”键，选择“通道”或“样品组”标签栏，右键点击目标样品组或通道并选择处理。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 在处理界面，选择使用

21、指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。0464f-Numbered_ee8b2523-3321-4b52-ad17-d9a1ce2f166f-Numbered_3ddcb0e7-a22c-4e0c-b4b2-8254be39a91b( 点击确定，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。5.4.2建立 3D 数据处理方法5.4.2.1点击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目标样品组。5.4.2.2在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组中各个数据在单个通道中显示。5.4.2.3选择定量最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看。5.4.2.4在预览界面

22、选择“轮廓线”标签栏，会显示未处理的轮廓图。5.4.2.5从处理或右键下拉菜单中选择提取色谱选项。5.4.2.6键入所需要提取的波长，按回车键，得到该波长的色谱图。542.7点击处理方法快捷键，选择创建新处理方法，确认处理类型为PDA 积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，点击确定。常按鼠标左键，选择色谱图上最窄峰。 （ 注：在色谱图区域内可以放大某个需 要监测的峰。点击鼠标右键选择全视图可以还原色谱图。 ）在色谱图的积分界面选择一段平滑的基线作为积分的阈值，点击下一步。常按鼠标左键，在基线上选取积分的起止时间点。建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰（ 或键入相应数值 ）。小于此

23、 峰高 90的峰将不被积分。点击下一步。定量方法选择面积，组分信息选择含量，校正类型选择线性。点击下一步。跨通道内标样界面点击否。因为选择的是标样，点击峰 1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或 者键入运行样品相应的名称。添加组分名称相匹配的标准含量，然后点击下一步。如果是多浓度点的一组标样，跳过添加含量的窗口直接点击下一步。（ 单一浓度可以在这里添加含量 ） 。选择外标法：选择内标法单一内标样校正，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应的名称， 然后点击下一步。选择多重内标需要输入所有内标的名称。PDA 纯化及匹配选项：为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后的色谱结果，

24、包括积分。在“文件” 下拉菜单中选择 “另存为” 方法组， 将该处理方法存入方法组。 （ 注：3D 数据必须用方法组处理。 ）如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事 件。积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。点击“浏览项目”键，选择“通道”或“样品组”标签栏，右键点击目标样品 组或通道并选择处理。在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清 除校正，选择校正并定量。点击确定，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。6查看结果和视图筛选6.1选择“结果”标签栏，使用视图筛选器从下拉菜单中选择今天。6.2选择需

25、查看的结果，右键点击选择查看。6.3查看结果点击快捷键，查看每个组分的校正曲线。切换至主窗口点击。7预览结果并创建报告方法7.1点击“预览项目”切换回结果表显示状态。7.2选中一个或多个结果，点击鼠标右键选择预览。7.3若选取一个结果，在预览窗口选择使用一下方法：使用缺省单个报告，单击确定。7.4预览报告并查看数据。点击“编辑方法”键修改报告方法。7.5双击色谱图或峰结果表编辑报告属性。7.6点击文件，选择保存，为新建的报告方法命名。点击预览报告。7.7如需将报告保存为 PDF 格式，点击。8方法组的建立 以上讲解了如何建立仪器方法、处理方法和报告方法，组合可以得到一个方法组。8.1监视区单击

26、方法组编辑向导：8.2弹出新方法组：选择仪器方法界面。选择相应的仪器方法，点击下一步。8.3选择缺省方法界面选择相应的处理方法和报告方法，导出方法缺省。点击下一步。8.4命名方法组，点击完成。8.5在运行样品时，方法组报告方法中调用该方法组，可以自动完成采集、处理、报 告数据流程。9数据管理9.1项目的备份9.1.1在 QuickStart 界面，选择菜单“管理一备份当前项目” 。9.1.2出现“项目备份向导” ，点击下一步。9.1.3出现“项目备份向导一选择目的地 通过浏览选择目的地，建议选择在非操作 系统安装的硬盘分区内。 选择完成， 单击“确定” 关闭后， 回到项目备份窗口， 单击“下一

27、步”。9.1.4出现“项目备份向导一备份显示” 。确认数据的复制已经成功，再单击“下一步” 。9.1.5出现备份数据向导一开始界面。点击完成，结束备份。9.2项目的还原9.2.1在 QuickStart 界面，选择菜单“管理” ，下拉菜单中选择“还原项目” 。9.2.2出现“还原项目向导” 。通过“浏览”选择被还原的项目所在的路径，单击“确9.2.3单击下一步。9.2.4如出现类似以下内容的对话框 （项目名 test 已经被使用。 请输入另一个项目名 ） ， 则需为还原的项目另起一个名字。9.2.5在“输入磁盘空间配额 页中，输入项目名，并注意此处的“表空间配额”应 不得小于欲还原的项目原有的

28、配额 （ 数据文件大小 ） ，然后单击“下一步” 。9.2.6如果需要，可以在此页面中，选择该项目是否属于某个父项目。9.2.7在“还原显示 中，如果出现如下对话框 （ 还原的项目需要被更新到下一个版本） ，单击确定”。（注：当还原由 Millennium 或 Empowe 啲先前版本创建的项目时，需要为该 项目选择时区。 ）9.2.8在“还原显示” 中，等待数据还原结束后，单击“完成”。（ 注：提示：在重装 Empower软件之后，可以通过还原项目将相关的项目数据进行还原。）10项目管理10.1新建项目10.1.1进入到 Empower3 的 QuickStart 界面。在菜单中选择管理一创

29、建新项目”。10.1.2出现“新项目向导”的对话框，选择新建项目的父项目：10.1.3单击“下一步”，弹出“新建项目向导一表空间”，表空间 50MB 为默认设置，可 根据需要增减。10.1.4出现“新建项目向导一选项”页。选择用于本项目的选项，如果无法确定适当 的设置，请接受默认选项。单击“下一步” 。10.1.5新建项目向导一访问控制：根据需要选择设置对您所创建的项目具有访问权限 的用户和用户组，或者接受缺省的选项，然后单击“下一步” 。10.1.6新建项目向导一复制所选项：需要选择复制的项目，一般选择Defaults 项目。（ 注：此页的复制是指从另一个项目复制现有设置，可以复制项目的“视

30、图筛选器”、“白定义字段” 、 “方法”和“参数” 。 所以， 一般不允许更改或使用 Defaults 项目中的任何 数据。）10.2查看及更改项目属性 在建立了新项目以后，可以根据需要在不同的项目之间进行切换。10.2.1进入 Empower3 的 Quick$tart 界面，选择菜单“管理一改变系统/项目”。10.2.2改变系统项目： 根据需要进行选择项目或者选择系统（如果存在二个或者二个以上的系统 ） 。选择完毕后，单击确定。如果选择了“在该窗口切换项目/系统” ，当前的项目/系统会被新选中的项目/系统 所替代，如果选择了“为项目/系统打开新窗口” ，则会为选中的项目重新打开另外一个 QuiekStart 的界面。10.2.3在新的项目/系统的 QuickStart