关于家禽化验室常用的资料

1、 文章来源：多胚蛋白酶 关于家禽化验室常用的资料 、设备：层吸定性滤纸、打孔器、平皿、密封小瓶、眼科镊、生理盐水、天平、烧杯、待检药品（原粉或成药）2、操作步骤21用打孔器在层吸式定性试纸上打6毫米直径的滤纸片备用。22备检药品的药液配制：一般按备检药品稀释倍数的20倍到60倍，但注意的是所以各公司的药品须按同一倍数的稀释液制取药敏片。例：先特锋每100克标准兑水量为400斤，即每1克加水4斤（2000ml），按60倍量制药敏片即1克先特锋粉加生理盐水2000/60=30ml。将药品分别放入不同的锥形瓶中加定量蒸馏水稀释溶解，用纸把瓶口封好，并对每一种药品在瓶签做好标记备用。23将滤

2、纸片浸泡于药液中半小时以上，然后把药敏片放入恒温干燥箱中37-45干燥2-3小时后置于密封瓶中。（温度不易超过60，否则会有部分药物受热分解或变性，导致变色反应等）24药敏片的保存：密封瓶中放在冰箱中冷藏可保存半年。     实验二、 药敏实验实验目的：抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验，是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治疗选药。操作步骤：1、 将麦康凯琼脂粉称取4.5-5g放入三解瓶中，再加入100毫升蒸馏水，封口备用。2、 取另一

3、三角瓶放入加入4.5-5g营养琼脂粉100毫升蒸馏水，操作同上。3、 将上述三角瓶分别做好标记后放入高压灭菌锅中1.5个大气压10分钟高压灭菌。（注意按高压灭菌锅的操作规定，注意安全） 4、 待高压蒸汽灭菌锅指示归零后，取出琼脂和麦康凯分别倒入准备好的培养皿中，稍稍凉后即可盖上平皿盖，分别标记后备用。（注意平皿必须是经过清洗并干燥灭菌；倾注平板时，厚度应合适约5-6mm，不可太薄或太厚）5、 接种：用经过灭菌的接种环挑取肝脏组织以划线方式接种。或用盐水浸泡一下肝脏或心脏组织，用棉拭子沾取其溶液轻涂于培养基表面。6、 用灭菌尖头镊子，取已经制备好的药敏片分别贴于培养基表现，梅花形排列。

4、用镊子轻按一下药敏纸片，并在平板底部相应的位置上做出不同药敏片相对应的标记。7、 将上述平皿置于37恒温箱中悬挂培养24小时。观察结果。8、 观察记录结果。以药敏纸片周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈，根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。药敏试验结果判定标准抑菌圈直径（毫米）敏感性20极敏感15-20高敏感10-14中敏感10低敏感0不敏感实践证明，利用自制药敏纸片进行药敏试验，可以灵活选药，与某病菌相关的药物均可随时制作药敏纸片用于治疗。可在本场药品范围内或本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物。还可在短时间内选择最佳药品和最佳剂量，既能缩短病程，又能避免盲目用药，减少浪费。实验三、

5、 革兰氏染色（与药敏试验相结合）实验目的：学习和掌握显微镜的使用，染色片的制备和染色。实验材料：结晶紫染色液、碘液、95%酒精、番红显微镜、载玻片、盖玻片、生理盐水、滤纸、酒精灯、接种环、结晶紫、碘液、95%的酒精沙黄。试验方法：将病菌落接到载玻片然后染色在显微镜下镜观察菌落形态。操作步骤1、涂片11将载玻片用生理盐水冲洗干净。12将载玻片在酒精灯上烤干，然后在载玻片上滴一滴生理盐水。13接种环在火上烧一下（灭菌），然后沾菌落接种在载玻片上的生理盐水，混合混匀，并在火上烘干，即对菌落进行固定。（注意涂片切不可过于浓厚固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。）2 、染色21

6、初染：加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。22媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。23脱色：将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。24复染：用番红液染1 一2 分钟，水洗。25镜检干燥后，置油镜观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。26备注：正确的染色结果，除染色技术的熟练程度外，培养物中的细菌的老幼亦可影响染色结果，如老化的阳性菌或已经死亡的阳性菌通常会出现阴性反应。另染色过程中，酒精的脱色时间极为重要，脱色不足，则阴性菌可

7、能会出现假阳性，脱色时间长短，随着涂片的厚薄，脱色时玻片摇动的快慢和滴加酒精的多少有关。实验四、 细菌的分离与签别（结合上述实验）1、 实验目的能简单区分出大肠杆菌与沙门氏菌在不同培养基上的生长特点。能简单做出细菌的形态学检验2、 操作步骤21细菌在普通琼脂培养基上的培养22细菌在麦康凯琼脂培养基上的培养23观察：在普通琼脂培养基上，大肠杆菌等均可良好生长。在麦康凯琼脂培养基上，大肠杆菌是红色菌落，而沙门氏菌是灰白色菌落（书上对照图）SS琼脂培养基上，大肠杆菌是红色菌落，而沙门氏菌是中心黑色周边略浅的菌落。鸭疫里氏杆菌在普通琼脂培养基上可以良好生长，但在麦康凯琼脂培养基上不生长。24用接种环，

8、取培养出的细菌菌落，做革兰氏染色。然后置于显微镜下观察其形态，要求会辨认大肠杆菌的形态。    实验五、 抗体检测HA（1剂量=25ul）1、 阴性对照：沉淀（1剂量盐水+1剂量红细胞）2、 阳性对照：凝集（1剂量IV+1剂量红细胞）3、 倍比稀释：IVHI1、 阴性对照（11孔）：凝集（1剂量盐水+1剂量IV+1剂量红血球）2、 阳性对照（12孔）：凝集抑制（沉淀）（1剂量盐水+1剂量被检血清+1剂量IV+1剂量红血球）3、 倍比稀释：待检血清先依次加盐水一个剂量再依次倍比稀释血清1-10孔全加入1被检血清，11阴性不加，12阳性加振荡3分钟，静置20

9、分钟。1-12孔全部加入1剂量红血球悬液振荡3分钟，静置20分钟。实验六、 化验室的规则化验室规章制度为保证良好的学习环境，保证化验室秩序井然地进行，参加培训的人员必须遵守以下规则：1.化验室保持整洁卫生，仪器设备要布局合理，保持干净。2.检验用的样品要存放整齐，不可乱堆乱放。3.废弃液体严禁直接倒入水池，以防堵塞腐蚀水管。4对细菌污染的地面、台面要先经消毒液消毒后再擦拭干净，各种废物要丢到指定的污桶中。5消毒时要认真仔细，严格按照操作规程，注意高压灭菌锅的安全使用。6用过的接种环、针应进行火焰灭菌，再放回原处，凡接触过细菌培养基物的器皿、容器均应严格消毒，然后再洗刷。7检验工作结束后，培训人

10、员应认真打扫化验室卫生，地面保持干净，将各种仪器设备摆放整齐，各种玻璃仪器清洗干净并消毒以备下次试验时使用。8.化验室工作完毕后，详细检查化验室的门、窗、水、电安全。9.各种药品及试剂要分类保管，使用后放回原处。 10.进入化验室必须穿好工作服（白大褂）。11.电源导线要经常检查，严禁用湿手接触电源。12.严禁个人物品存放，严禁室内饮食，吸烟，严禁无关人员进入化验室。13.要爱护化验室内的一切仪器设备，对所有药品试剂按要求使用不得浪费。实验七、 化验室器具的洗涤与清洁玻璃仪器的清洗 实验中所用的玻璃仪器清洁与否，直接影响实验的结果，往往由於仪器的不清洁或被污染而造成较大的实验误差，有时甚至会导致实验的失败。 因此玻璃仪器（包括离心管等塑料器皿）是否彻底清洗净就是非常重要的。   初用玻璃仪器的清洗 新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在12盐酸溶液中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100120烘箱内烘干备用。   使用过的