51DNA的粗提取和鉴定

1、选修1 生物技术实践 教学案 专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取和鉴定【学习目标】DNA的粗提取和鉴定。【学习过程】一、DNA的粗提取和鉴定：（一） 实验原理：1、粗提取原理：提取生物大分子的基本思路是。对于DNA的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。（1）DNA与其他细胞成分在不同浓度溶液中的溶解度不同；请画出DNA在氯化钠溶液中的溶解度曲线。（）DNA和蛋白质对、和的耐受性不同；蛋白酶能水解，但是对没有影响。例如使用_；大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在以上才会变性。例如可以使用_的恒温水浴箱，严格控制温度范围；洗涤剂

2、能够瓦解，但对DNA没有影响。（）DNA不溶于溶液，但蛋白质则溶于。2、鉴定原理：在条件下，DNA遇会被染成色，因此_可以作为鉴定DNA的试剂。另外DNA还能与_染色剂反应，呈_色。（二）实验过程：1、实验材料的选取：要选取含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难。例如可选择_等作为实验材料。2、破碎细胞，释放和溶解DNA：这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解。如果是动物细胞，直接加入一定量的，用玻璃棒搅拌；如果是植物细胞，需先用溶解细胞膜，再加入_进行充分的搅拌和研磨。最后过滤，收集滤液。特别提示：提取鸡血细胞核物质时，应快速搅拌，其目的

3、是加速血细胞破裂。3、去除滤液中的杂质（DNA的纯化）：根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性不同等特性，最大限度地将与杂质分开。特别提示：向含核物质的2mol/LNaCl溶液中加入蒸馏水析出DNA黏稠物时和DNA黏稠物再溶解于2mol/LNaCl溶液时以及用冷却的95%的酒精提取含杂质较少的DNA时，应轻缓搅拌，目的是尽量保持DNA分子的完整性。实验中四次过滤（填写下面表格）：第一次过滤第二次过滤第三次过滤第四次过滤过滤前加入的物质蒸馏水2mol/LNaCl蒸馏水（至0.14mol/LNaCl）2mol/LNaCl过滤目的滤液中所含物质纱布上遗留物质特别提示：（1）实验中两次用到蒸馏水的作

4、用：第一次是提取鸡血细胞中的核物质时，目的是造成低渗环境，加速血细胞破裂，便于DNA析出；第二次是析出DNA过程中加蒸馏水，目的是使DNA的溶解度下降，从而析出DNA。（2）盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器，因为DNA容易被玻璃容器吸附。4、DNA的析出与鉴定：用与滤液等体积的、冷却的溶液析出DNA；将玻璃棒上的丝状物溶于2mol/LNaCl溶液，加入4ml的试剂，将试管置于沸水中加热5 min，观察颜色变化。（需设置不加DNA的对照组）（三）注意事项：1、以血液为实验材料时，不能选择_动物的血液，因为_。取血时，需要加入_，防止血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要_。否则容易产生_。3、加

5、入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧_。4、二苯胺试剂要_，否则会_。【巩固练习】1在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是 A 防止凝血 B 加快 DNA 析出 C 加快 DNA 溶解 D 加快凝血2下列操作中，对 DNA 的提取量影响较小的是 A 使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出 DNA 等核物质 B 搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C 在析出 DNA 黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加 D 在用酒精沉淀 DNA 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却3 含有 DNA 的氯化钠（ 0 . 015mol / L ）溶液中加入二苯胺试剂后，加热煮沸

6、5min ，溶液呈A 紫色 B 蓝色 C 砖红色 D 红色 4 在“ DNA 的粗提取实验”中，有两次 DNA 的沉淀析出，其依据的原理是 DNA 在物质的量浓度为 0 . 14mol / L 的氯化钠中的溶解度最低 DNA 在冷却的体积分数为 95 的酒精中能沉淀析出 A 两次都是 B 第一次是 ，第二次是 C两次都是 D 第一次是 ，第二次是 5 在向溶解 DNA 的 NaCl 溶液中不断加入蒸馏水的目的是A 加快溶解 DNA 的速度 B 加快溶解杂质的速度 C 减小 DNA 的溶解度，加快 DNA 析出 D 减小杂质的溶解度，加快杂质的析出6 提取含杂质较少的 DNA 所用的溶液是 A

7、体积分数为 90 的冷却的酒精 B 加热的、体积分数为 95 的酒精 C 体积分数为 95 的冷却的酒精 D 加热的、体积分数为 90 的酒精 7 . DNA 的粗提取和鉴定实验，与下列哪项原理无关A . DNA 在0.14mol / L NaCl 溶液中的溶解度最低 B . DNA 易被龙胆紫染成紫色 C 在 DNA 溶液中加入二苯胺，加热后产生蓝色 D 加入 95 的冷酒精， DNA 会从溶液中析出8 下列图示中能反映 DNA 溶解度与 NaCl溶液浓度之间关系的是9下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A、氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大B、人体的血液不可代替鸡血进行该实验C、

8、柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂D、利用DNA易溶于酒精的特点可除去DNA中的部分杂质10 对三次过滤的叙述不正确的是A 第一次过滤后，核物质存在于滤出的固体物中B 第二次过滤时使用多层纱布， DNA 存在于纱布上的黏稠物中 C 第三次过滤后， DNA 存在于滤液中，可进一步除去非 DNA 物质D 上述 B 、 C 均正确11 在 DNA 的粗提取实验中，提取鸡血细胞中的核物质和析出 DNA 粘稠物的操作过程均用到蒸馏水，其作用在于A 前者使血细胞破裂， 后者稀释氯化钠溶液 B 前者用来溶解血细胞，后者用来溶解 DNA C 前者用来分离细胞核，后者用来保护 DNA D 前者防止细胞核破裂，后

9、者使 DNA 析出12 在“ DNA 的粗提取和鉴定实验”中有五次用玻璃棒搅拌。 ( l ）第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液是为了_; ( 2 ）第二次搅拌加 2mol / L 的 NaCl 溶液的滤液是为了使其与 DNA _; ( 3 ）第三次搅拌加蒸馏水至 0 . 14mol / L 的 NaCl 溶液是为了_( 4 ) 第四次搅拌放入 2mol / L NaCl 溶液中纱布上的黏稠物是为_(5 ) 第五次搅拌体积分数为 95 的酒精为了_.13.关于DNA粗提取的实验材料的选择，研究者经过多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料。请据图回答问题：(1)鸡血细胞中红细胞含_，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中_细胞数目较多，可以提供丰富的_。(2)实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因_。(3)生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若它们按实验要求完成实验步骤后，结果是_,这是因为这些动物和人类一样，红细胞中都没有_，但若改用动物肝脏做实验材料，实验能顺利进行。这是因为_。(4)若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加_程序，使细胞更易分离。14下图示