实验九甲醛滴定法测定氨基酸

1、实验九 甲醛滴定法测定氨基酸一、目的 掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理 和操作要点。二、原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下 平衡：H3N+ R COO H2N R COO +H+-NH3是弱酸，完全解离时pH为1112或 更高，若用碱滴定-NH3所释放的H+来测量 氨基酸， 一般指示剂变色域小于 10，很难准 确指示终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结 合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移， 促使-NH 3释放H +，使溶液的酸度增加，滴 定终点移至酚酞的变色域内 (pH9.0 左右 )。 因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠 溶液滴定。R-CH(COO )-NH 3 R-CH

2、(COO)-NH 2+H + NaOH 中和R-CH(COO )-NH 2 HCHO R-CH(COO)-NHCH 2OH HCHO R-CH(COO )-N(CH 2OH)2 如样品为一种已知的氨基酸， 从甲醛滴 定的结果可算出氨基氮的含量 ( 脯氨酸与甲 醛作用生成不稳定的化合物，使滴定 mL 数 偏低。酪氨酸的滴定 mL 数偏高)。如样品是 多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴 定结果不能作为氨基酸的定量依据。 但此法 简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。 随水解程度的增加滴定值也增加， 滴定值不 再增加时，表示水解作用已完全。三、器材药25 mL 锥形瓶；3 mL 微量滴定管； 吸

3、管； 0.1 mol L 标准甘氨酸溶液 300 mL 准确称取 750 mg 甘氨酸，溶解后定容至 100 mL；0.1 m01L 标准氢氧化钠溶液 500 mL ； (标准氢氧化钠溶液应在使用前标定， 并在 密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定 管中的剩余氢氧化钠。 )酚酞指示剂 20 mL 0.5酚酞的 50乙 醇溶液中性甲醛溶液 400mL 在50 mL 3637%分析纯甲醛溶液中加入 1 mL 0.1 %酚酞 乙醇水溶液，用0.1 mol / L的氢氧化钠溶液 滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂 在临用前配制。如已放置一段时间，则使用 前需重新中和。四、操作1.取3个25 mL

4、的锥形瓶，编号。向 第1、2号瓶内各加入 2mL0.1 mo1 / L的标 准甘氨酸溶液和5 mL水，混匀。向3号瓶 内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5 滴酚酞指示剂，混匀后各加2 mL甲醛溶液， 再混匀，分别用0.1 mo1/ L标准氢氧化钠 溶液滴定至溶液显微红色。重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗 标准氢氧化钠溶液的 mL数。取平均值，计 算甘氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率 =实入理得量X 100公式中实际测得量为滴定第 1和2号瓶 耗用的标准氢氧化钠溶液 mL数的平均值与 3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液 mL数之差 乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。2mL乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再 乘14.008。即为加入理论量的 mg数。2.取未知浓度的甘氨酸溶液 2 mL,依 上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。 计算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的 mg 数。氨基氮(mg/mL)= (A B) mol；NaOH 体008式中：A为滴定待测液耗用标准氢氧化 钠溶液的平均mL数。B为滴定对照液(3号瓶)耗用标准氢氧 化钠溶液的平均 mL数。mol/LNaOH为标准 氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度。