实验室常用技术参数资料样本

1、实验室常见技术参数资料实验室常见技术参数资料 一、 核酸及蛋白质常见数据 1核苷三磷酸的物理常数化合物 分子量 入max（pH7.0）1摩尔溶液（pH7.0）中入max时的最大吸收值OD280/OD260ATP 507 259 15400 0.15CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494 259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 482 267 9600 0.71 2常见核酸的长度与分子量 核酸

2、 核苷酸数 分子量入 DNA 48502（双链环状）3.0 X 107PBR322 4363（双链）2.8 X 10628SrRNA 4800 1.6X106 23SrRNA 3700 1.2X10618SrRNA 1900 6.1X105 19SrRNA 1700 5.5X1055SrRNA 120 3.6X104tRNA（ 大肠杆菌） 75 2.5 X1043常见核酸蛋白换算数据( 1) 重量换算1 卩 g=10-6g1pg=10-12g1ng=10-9g1fg=10-15g( 2) 分光光度换算 :1A260双链 DNA=5Qg/ml1A260单链 DNA=3Qg/ml1A260单链 R

3、NA=4Qg/ml( 3) DNA 摩尔换算 :1 卩 g 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol 末端1 卩 g pBR322 DNA=0.36pmolIpmol 1000bp DNA=0.66 ygIpmol pBR322=2.8 yg1kb双链DNA(钠盐)=6.6 X 105道尔顿1kb单链DNA(钠盐)=3.3 X 105道尔顿1kb单链RNA(钠盐)=3.4 X 105道尔顿( 4) 蛋白摩尔换算 :100pmol分子量 100, 000 蛋白质=10yg100pmol分子量50, 000蛋白质=5yg100pmol分子量10, 000蛋白质=1 yg氨基酸的平均分

4、子量 =126.7 道尔顿(5)蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333个氨基酸编码容量=3.7 X 104MV蛋白质10, 000MW蛋白质=270bp DNA30, 000MW蛋白质=810bp DNA50, 000MW蛋白质=1.35kb100, 000MW蛋白质=2.7kb DNA 4常见蛋白质分子量标准参照物( 1) 高分子量标准参照 ( 2) 中分子量标准参照 ( 3) 低分子量标准参照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶 B 97, 400 碳酸酐酶 31, 00肌球蛋白 212, 000 牛血清白蛋白 66, 200 大豆脻蛋白酶 21, 500B -半乳糖甘酶B 116, 000谷

5、氨酶脱氢酶55, 000 抑制剂磷酸化酶 B 97, 400 卵白蛋白 42, 700 马心肌球蛋白 16, 900 牛血清白蛋白 66, 200 醛缩酶 40, 000 溶菌酶 14, 400过氧化氢酶' 57, 000 碳酸酐酶31, 000 肌球蛋白(F1) 8, 100 醛缩酶 40, 000 大豆脻蛋白酶 21, 500 肌球蛋白 ( F2) 6, 200 抑制剂 肌球蛋白 ( F3) 2, 500溶菌酶 14, 4005.常见DNA分子量标准参照物入 DNA/HindM 入 DNA/EcoRt 入 /Hind 川 +EcoRI pBR322/HaeM23130 21226

6、21227 587 1239416 7421 5148 405 1046557 5804 4973 504 894361 5643 4268 458 802322 4843 3530 434 642027 3530 2027 267 575641904 234 511251584 213 211375 192 18974 184 11831 124 7564125续上表pBR322/Hinf I ©x 174/Hinf I ©x 174/Hae 川 ©x 174/Tap I 1631 726 140 1353 2914517 713 118 1078 117550

7、6 553 100 872 404396 500 82 603 327344 417 66 310 231298 413 48 281 141221 311 42 271 87220 249 40 234 54154 200 24 194 3375 151 118 2072二、 常见缓冲液1分子克隆常见缓冲液2磷酸缓冲液(1) 25 C下O.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml)5.8 8.5 91.56.O 13.2 86.86.2 19.2 8O.86.4 27.8 72.26.6 38.1 61.96.8 49.7 5O

8、.37.O 61.5 38.57.2 71.7 28.37.4 8O.2 19.87.6 86.6 13.47.8 9O.8 9.28.O 94.O 6.2(2) 25 C下O.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml)5.8 7.9 92.16.O 12.O 88.O6.2 17.8 82.26.4 25.5 74.56.6 35.2 64.86.8 46.3 53.77.O 57.7 42.37.2 68.4 31.67.4 77.4 22.67.6 84.5 15.57.8 89.6 1O.48.O 93.2 6.8 :

9、 用蒸馏水将混合的 两种 1mol/L 贮存液稀释至 1OOOml, 根据Henderson-Hasselbalch 方程计算其 pH值：pH=pK'+1g( 质子受体/ 质子供体)在此，pK ' =6.86(25 C )。3电泳缓冲液 测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺1Omol/L EDTA(pH8.O)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺： 许多批号的试剂级甲酰胺 , 其纯度符合使用要求 , 无须再进行处理。不过,一旦略呈黄色,则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与DoweXXG8混合床树脂共同搅拌 1 小时进行去离子处理 , 并用 Whatman1 号滤纸过滤

10、2 次, 去离子 甲酰胺分装成小份,充氮存于-70 C。常见的电泳缓冲液缓冲液 使用液 浓贮存液 ( 每升)Tris-乙酸(TAE) 1 X : 0.04mol/L Tris -乙酸 50X : 242g Tris 碱0.001mol/L EDTA 57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris- 磷酸( TPE) 1 X:0.09mol/L Tris -磷酸 10X:10g Tris 碱0.002mol/L EDTA 15.5ml85% 磷酸( 1.679g/ml)40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris- 硼酸( TBE) a 0.5 X

11、0.045mol/L Tris -硼酸 5X: 54g Tris 碱0.001mol/L EDTA 27.5 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)碱性缓冲液 b 1 X :50mmol/L NaOH 1X:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris- 甘氨酸 c 1 X:25mmol/L Tris 5 X:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸 94g 苷氨酸( 电泳级) ( pH8.3)0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)说明: TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物 , 为避免

12、这一问题 , 可在室温下用 玻璃瓶保存5X溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以1X TBE作为使用液(即1: 5稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。 但0.5 X的使用液已具备足够的缓冲容量。当前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1: 10 稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小 , 故经过缓冲液的电流量一般 较大，需要使用1X TBE以提供足够的缓冲容量。 碱性电泳缓冲液应现用现配。 Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。2X SDS凝胶加样缓冲液：100mmol/L Tris?HCl(6.8)200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)4%S D S (电泳级)0.2%溴酚蓝20%甘油1mol/L不含DTT的2X SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温,应在临用前取 贮存液现加于上述缓冲液中。4凝胶加样缓冲液缓冲液类型6X缓冲液贮存温度I 0.25%溴酚蓝4 C0.25%二甲苯青 FF40