DNA的琼脂凝胶电泳

1、 遗传学实验考核标准一 实验名称合理（10）A 实验名称简明扼要，包含了实验材料，目的和方法。(910)B 实验名称包含实验材料，方法和目的，但不简明扼要。(8)C 名称不全。(7)二 实验材料和药品的准备A. 实验材料选用合理，处理正确，实验药品的配制准确。(9)B. 实验材料选用合理，处理基本正确，药品配制正确。(8)C. 实验材料，药品有误，但处理和配制正确。(7)D. 实验材料，药品选用有误，处理和配制有误。（6.6）三 实验目的明确A 实验目的和所做的实验相符。(9)B 实验目的和所做实验有联系，但有误。（8）C 实验目的和所做实验不相符。（7）四 实验材料，仪器的准备A 所选器材，

2、仪器及耗材准备充分。(9)B 所选器材，仪器及耗材准备合理。(8)C 所选器材，仪器及耗材准备不充分。(7)D 所选器材，仪器及耗材不能完成实验所有步骤。(6)五 实验操作步骤。A 能熟练完成整个实验所有操作，仪器，器材使用熟练。B 能完成整个试验所有操作，仪器和器材使用一般。（8）C 基本完成整个实验目的和操作步骤。(7)D 不能完成，有（无）合理解释。(5.6)六 实验原理的解释A. 实验原理叙述简明扼要，对实验关键步骤做合理叙述。(9)B. 对实验原理叙述正确，但未对关键步骤做合理解释。(8)C. 实验原理叙述不完全正确。（7）D. 实验原理叙述不正确七 实验结果准确A. 实验结果准确，

3、完美。(910)B. 实验结果准确，但不完整。（8）C. 由实验结果，但不完全体现。(7)D. 无实验结果，有（或无）合理解释。（5.6）八 实验结果解释合理A 对实验结果的分析准确。(9.10)B 对实验结果的分析基本准备。(8)C 对实验结果的分析有误。(7)D 无实验结果，有（无）合理解释。(5.6)九 讨论A. 能正确总结实验经验和教训。（9）B. 总结了实验的经验和教训，但不完整。(8)C. 有实验的实验和教训，但不准确。(7)D. 有实验的经验和教训，有（无）合理解释。(5.6)十 实验报告的撰写A 实验报告完整，流畅地使用术语，合理使用文字和图表。(9,10)B 实验报告完整，与

4、实验指导书文字准确无误鞥正确使用文字和图表。(8)C 实验报告完整结果不能正确使用文字和图表。（7)D 实验报告不完整。DNA的琼脂糖凝胶电泳 小组成员：张家楠、程玉芬、毛文凌、杨婷、管丽婷、齐奇1、 实验目的： 1、掌握DNA电泳的技术方法。 2、利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA含量、分子量及分离不同大小的DNA片段。2、 实验原理： 电泳时指带电粒子在电厂中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象。在PH高于PI时，DNA分子带负电荷，在直流电场中DNA向正极泳动。不同的DNA分子因电荷数、构象不同在同一电泳系统中的泳动速度的差异，从而达到分离的目的。根据迁移率大小可测定DNA分子的大小。DNA迁

5、移率与分子量的对数值成反比。3、 材料、试剂和仪器： 实验提取的DNA样品、电泳缓冲液0.5XTBE、6X上样缓冲液、0.5ug/ml溴化乙锭（BE）、琼脂糖、40%蔗糖水4、 实验步骤：1、试剂的配制1.1电泳缓冲液：TBE 贮存液（0.5X） 按一下比例加入药品 5.4g Tris碱 2.75ml 硼酸 2ml 0.5mol/L EDTA(PH=8.0) 加入去离子水至1L。分装后高压灭菌。1.2 6X上样缓冲液 0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯氰FF，40%（m/v）蔗糖水溶液， 4摄氏度贮存。2、操作步骤 (1)配制足量的电泳缓冲液（0.5 X TBE）用以灌满电泳槽和配制凝胶。 (

6、2)根据欲分离DNA片段的大小用电泳缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖溶液：应准确称量琼脂糖干粉加到盛有定量好的电泳缓冲液的三角瓶或玻璃瓶中（缓冲液体积应小于烧杯或玻璃容器容积的50%）。 (3)用卫生纸松松塞住三角烧瓶的颈部，在沸水浴或微波炉中加热至琼脂糖充分融化。 (4)用隔热手套或夹子转移三角烧瓶或玻璃杯至55摄氏度水浴。待熔化的凝胶冷却后加入溴化乙锭至终浓度为0.5ug/ml.。轻轻地旋转以充分混匀凝胶溶液。 (5)浇灌温热的琼脂糖进入模具。（凝胶厚度为23mm，需检查在梳齿间有无气泡。熔化的凝胶液终如有气泡，用餐巾纸的角轻触即可容易地出去。 (6)让凝胶完全凝结，室温下3045分钟。加少量电

7、泳缓冲液于凝胶的顶部，小心地拔起梳子，倒去缓冲液。将凝胶安放于电泳槽内。 (7)向电泳槽加入电泳缓冲液，刚好没过凝胶1mm。 (8)混合DNA样品和0.2倍体积6X上样缓冲液。（切忌将点样孔加得太满，最好凝胶稍厚些增加孔的容积或通过乙醇沉淀浓缩DNA减少加样体积）。 (9)用微量加样器及一次性枪头将样品混合液缓慢加入浸没凝胶的点样孔内。分子量标准应分别加至样品孔的左侧和右侧的两个孔内。（许多情况下，不必每个样品用一个枪头，只需在两次加样之间用阳极池内的缓冲液充分洗涤后即可再用。但是凝胶要用于印记分析或将要回收DNA条带，每个样品应使用一个枪头）。 (10)关上电泳槽盖，接好电极插头。DNA应向

8、阳极侧泳动。给予15v/cm的电压，其中距离以阳极至阴极之间的距离为准。如电极插头连接正确，阳极和阴极由于电解作用将产生气泡。电泳期间，溴化乙锭向阴极移动（与DNA迁移的方向相反）。长时间电泳将导致凝胶内溴化乙锭含量显著地减少，使小片段DNA的检测发生困难，此时，可将凝胶浸入0.5ug/ml溴化乙锭溶液中3045min。 (11)将凝胶放入凝胶成像系统的观察室中，先用可见光调整图像的大小和焦距，使点样孔清晰可见。然后转入紫外光，进行拍照。在照片上应标明样品名、DNA标准的分子量以及图片名称。五、注意事项 1、由于是研究每个单雌系果蝇的DNA指纹图谱，所以在提取DNA时要注意不能与其他DNA混用

9、枪头，以防形成交叉污染。 2、由于PCR反应中引物、dNTP、Taq酶在反复冻融中容易失活，所以应该分装，分装的药剂只可使用数次。并且在每次使用时，PCR试剂应放置在冰水混合物中。 3、PCR反应是以指数扩增的反应，所以在加药剂特别是模板时应沿管壁缓缓加入，不可由于用力过猛形成气雾。另外，不可对着药剂或反应管呼吸、手避免接触管口，防止污染。4、溴化乙锭是强的诱变剂，使用时应带胶皮手套。使用后的凝胶、带过的手套、使用过的枪头应在室外焚烧；废弃的EB染液按下面处理方法处理：(1)按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温下放置1小时。(2)用滤纸过滤，并将活性炭与滤纸密封后，焚烧。不可是剂11)Hizhi zu六、实验结果凝胶放入凝胶成像系统的观察室后，先用可见光调整图像的大小和焦距，然后转入紫外光，在观察口看见了较为清晰的DNA电泳带，紫外光下，DNA带呈橘黄色，且带形整齐，DNA均迁移至凝胶全长的2/3处。如图所示，但由于拍摄仪器像素不高，橘黄色的DNA带看着较模糊。七、实验结果分析紫外光下观察到点样孔的DNA迁移了同样的距离，可见实验测定的两种桂花样品DNA分子差别很小，凝胶电泳实验下DNA分子没有明显差异。8、 实验结果讨论此次实验最终得到了比较满意的结果，实验操作考虑到了该注意事项。在职琼脂糖凝