免疫细胞功能检测技术

1、免疫细胞功能检测技术淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外I实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定淋巴细胞AT细胞（负责细胞免疫功能AT细胞增殖试验1.原理:刺激物淋巴细胞DNA合成一一分化细胞变大细胞浆扩大未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型未转化的淋巴细胞细胞大小（直径lxm）122012-1668增大、疏松有或无无增多、嗜碱有或无不增大、密集极少、天青色核大小、染色质核仁有丝分裂胞质、着色浆内空泡增大、疏松清晰、14个有或无增多、嗜碱有

2、或无伪足有或无有或无无2.淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物:PHAConAPWMLPS特异性刺激物:M/t：abmhMI*.孥4资料分享-T细胞T细胞-T、B细胞异种抗原B细胞同种组织抗原3.检测方法形态法：刺激物一淋巴细胞（4-6天）一省细胞化同位素法：PHA一沙巴细胞（54h）DNA合成期+3HTdR掺入I收集细胞I检测6射线测定细胞内的3H-TdRWOR格式-专业学习资料-可编辑11AHI(1)形态学检查法转化率=转化的淋巴细胞数转化和未转化的淋巴卯胞数A:未蝴&细胞-学习资料分享-一xlOO%B点I化组胞图151淋巴细胞转化的形态特征示意图方法学评价:优点：形态学方法简便易行

3、，普通光;学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。A缺点：是依靠肉目即飒察形态学变化,*L准确性较差。判断结果易受主观因素影响，重复性和(2)3H-TdR掺入法c?测q试验孔A,.均值=对照孔A570nm均值体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功台匕IboL原理:靶细胞抗原T细胞一靶细胞致敏CTL2.方法，形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞意义:肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力效应细胞测量上清液中释放的5g>PHA皮肤试验AB细胞增殖能力的试验B细胞增

4、殖抗IgM细菌脂多糖SAC的SPA3H-TdR掺入法一WOR格式-专业学习资料-可编辑1.原理:SheeperythrocytescoatedwithantHg2.方法学:A经典溶血空斑形成试验被动溶血空斑试验3.临床应用与评价,溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响A评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力O1,原理:-学习资料分享4学为资料分享-2.应用与方法学评价:，"<1A该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。»优点：稳定、特异、抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。&

5、#187;体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。A将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。WMMa(Ml.I.agiB1Hni*iaa.VF*；h."''-rT.1.A形态法A酶释法A荧光法，同位素法i化学发光法过细胞：K562Z靶细胞溶解染色计数离心取上清测LDH或AKP离心取冗淀.测活细胞荧光测CPM值测发光强度胞株-1b芍资料分享-细胞趋化功能的检测吞噬和杀菌功能的检测学习资料分享（一）细胞运动功能趋化功能检测1.原理：滤

6、膜渗透法（Boyden小室法）-学习资料分享1.显微镜检查法:吞噬细菌的白细胞数计数的白细胞数X10()杀菌率()=胞内含着染菌体的细峨计数的白细胞数xlOO2.溶菌法杀菌率（）= （1 0 min菌落数作用30、60或90min菌落数汽1AAJxI'13.NBT还原试验NBT还原试验原理:N-N-11C+ H+N二N-R-n-nh2II -CIN=NH氮理基（淡黄色）WOR格式-专业学习资料-可编辑中性粒细胞甲膜颗粒沉积于胞质中（一）炭粒廓清试验厂正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%：rhrT;炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁（炭粒悬液）一1间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。11WOR格式-专业学习资料-可编辑(二)吞噬功能检测巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑鎏敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。（三）巨噬细胞溶酶体酶的测定酸性磷酸酶的测定硝酸铅法I|n2.偶氮法非特异性酯酶的测定常用a一茶醋酸法（四）细胞毒作用测定用IFN-Y激活小鼠巨噬细胞，观察其对1251UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤（五）巨噬