同时检测猪瘟病毒和北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的复合荧光定

1、 1期 成 丹等 : 同时检测猪瘟病毒和北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的复合荧光定量 RT - P CR 方法的建立 4 77 3 1 3 复合荧光定量 RT -PCR 方法的影响因素和改 进措施 荧光定量 RT- PCR 对探针要求非常高, 如果探 针不够特异 , 会出现非特异性反应。在复合荧光定 量 RT- P CR 中 , 由于使用了多种不同荧光标记的探 针, 可能会出现竞争性抑制作用, 从而影响到检测的 准确性和敏感性 , 为了减少这种影响, 要合理设计引 物和探针 , 特别是设计 探针时, 要尽量避开发 夹结 构, 退火温度不能太高或太低 , 以避免探针与探针以 及引物与引物之间的杂

2、交 11 - 12 DENG M Y , W A N G H, W AR D G B, et a l. Compariso n o f six R N A ex traction met ho ds fo r the detec tion o f classical sw ine fev er vir us by real time and co nv entional rever se t ranscr iption - P CR J . J Vet Diagn I nvest , 2005, 17( 6 : 574 - 578. 5 ZH A O J J, CH EN G D , L I

3、N , et al. Evaluat ion of a multiplex real time RT- PCR for quantitative and differentia l detection o f w ild - ty pe viruses and C - str ain v accine o f Classical sw ine fever v irus J . Vet M icr o biol , 2008, 126( 1 -3 : 1 - 10. 。研究中发现, 探针 6 K L EIBOEK ER S B, SCH O M M ER S K , L EE S M , et

4、al. Simultaneo us detection o f N o rth A merican and Euro pean po rcine r eproductive and respirato ry syndro me v ir us using r eal time quantitativ e rever se transcriptase - PCR J . J V et D iagn I nvest , 2005, 17 ( 2 : 165 - 170. 的浓度对于复合荧光定量 RT- PCR 的 CT 值有很大 影响 , 因此探针浓度的优化非常必要。此外, P er s 9 so

5、n 等研究发现 , T aq 酶的选择至关重要 , 作者发 现, H o tSt art T aq DNA 聚合酶比普通 T aq DNA 聚 合酶理想。当然 , 该方法还有待完善, 虽然其污染概 率比常规 RT- PCR 低, 但也可能出现 , 因此 在操作 过程中, 要规范实验操作 , 试剂要分装使用, 尽量减 小污染机会。作者将在现有方法的基础上, 继续对 其进行完善。 8 7 EGL I C, T HU R B, LIU L , et al. Q uant itativ e T aq M an RT - PCR fo r the det ection and differentiati

6、on o f Euro pean and N ort h A merican st rains of po rcine re pro ductive and r espir ator y sy ndro me virus J . J V ir ol M ethods , 2001, 98( 1 : 63 - 75. P AT ON D J, M CGO L DRICK A , G REISER - WIL K E I, et a l. Genetic ty ping classical sw ine fever virus J . V et Micr obiol , 2000, 73( 2 -

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8、 EN Y E K , HO RZIN EK M C, et al. F amily A r ter iv irid ae M / / van REGEN M ORT EL M H V , F A U QU ET C M , BI SH O P D H L , et al. V ir us T ax onomy , Seventh Repo rt o f the In ternational Co mmittee o n T ax onomy of V ir uses, San Dieg o : Academic Pr ess, 2000: 851 - 857. 3 T O N G G Z ,

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10、n - Ov ercoming its limitat ions J . A nal B iochem , 2005, 344( 1 : 33 - 42. 涂长 春 . 猪 瘟国 际 流行 态 势、 我国 现 状及 防制 对 策 J . 中国 农业科学 , 2003, 36( 8 : 955 -960. GIBSON U E, H EID C A , W ILL IA M S P M . A no vel method for real time quant itativ e RT - PCR J . Genome Res , 1996, 6( 10 : 995 - 1001. H IGU CH I R, FO CKL ER C,