柴胡黄芩配伍抗大鼠急性酒精性肝损伤作用的实验研究(一)

1、柴胡黄芩配伍抗大鼠急性酒精性肝损伤作用的实验研究(一)    作者：刘仁慧 王宪龄 刘方洲【关键词】 柴胡摘要：目的研究柴胡、黄芩以不同剂量比例配伍（21，11，12）对大鼠急性酒精性肝损伤的防治作用。方法采用白酒灌胃造成大鼠急性酒精性肝损伤模型，以单味柴胡黄芩和小柴胡冲剂作为对照药，通过血清和肝匀浆乙醇脱氢酶（ADH）的测定和肝组织病理学的观察，探讨柴胡黄芩配伍对急性酒精性肝损伤的影响。结果柴胡黄芩12组对各项检测指标影响最显著。结论不同比例配伍的柴胡黄芩抗急性酒精性肝损伤中发挥作用的强弱趋势不同，以柴胡黄芩12组疗效较佳。关键词：急性酒精性肝损伤；

2、柴胡； 黄芩； 中药配伍Experimental Study of Radix Bupleuri and Radix Scutellare in Compatibility on Acute Alcoholic Liver InjuryAbstract：ObjectiveTo study the prevention and treatment effects of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility ratio of different dosage by two to one,one to one,one to tw

3、o on acute alcoholic liver injure by animal experiments.MethodsRat model was duplicated by the white spirit through consecutive gastric infusion for ten days. Radix Bupleuri, Radix Scutellariae and XiaoChaihu Granules were used as positive control medicines, respectively.By investigating the concent

4、ration of alcohol dehydrogenase(ADH)in blood serum and liver and the alteration of livers pathology ,explore the effects of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility on acute alcoholic liver injure.ResultsThe effect of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility by the ratio

5、of one to two was better than any other treatment groups.ConclusionThe effects of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility ratio of different dosage were different on acute alcoholic liver injure.Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility by the ratio of one to two had the

6、best function.Key words：Acute alcoholic liver injury； Radix Bupleuri； Radix Scutellariae； Compatibility of Chinese Materia Medica； Experimental study中医学认为酒为湿热有毒之品，过饮之必伤及脾胃肝胆而引发疾病。柴胡黄芩药是伤寒论柴胡系列方中最有代表意义的基本配伍，可疏肝清肝，和解少阳，针对急性酒精中毒病因病机，有着广泛的临床应用基础。我们前期的研究表明，柴胡黄芩配伍对小鼠急性酒精性肝损伤有良好的保护作用1。本实验采用大鼠急性酒精性肝损伤模型，进一步

7、探讨柴胡黄芩配伍对其的保护作用。1 材料与方法1.1 动物健康Wistar大鼠96只，雄性，体重（170±20）g，由河南省实验动物中心提供。1.2 药物柴胡，伞形科多年生草本植物北柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根，产于河南省嵩县。黄芩，唇形科多年生草本植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，产于山东莒县。小柴胡颗粒，天津市爱康药业公司生产，批号：011202。1.3 主要试剂与仪器56度二锅头白酒（批号：020128），北京京宫城酒业技术发展公司生产。甘氨酸（批号：20011120），上海化学试剂采购供应站。氢氧化钠（批

8、号：20000710），郑州化学试剂二厂（进口分装）。辅酶（NAD，批号：6110），美国Biomol公司（原装）。722光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂。1.4 方法大鼠随机分8组，除正常组（以等体积的蒸馏水灌胃）外，其余各组均按7 ml白酒/kg/次灌胃给予56度二锅头白酒，2次/d，连续10 d造模结束2。自造模第1天起，每日灌胃给药2次。正常对照组和模型对照组灌服等体积的蒸馏水，其余各组分别灌胃给予相应的药物，剂量皆为10 ml/kg(12 g/kg）连续10 d。末次给酒后24 h，腹主动脉取血制备血清。迅速摘取肝脏右叶以10%的甲醛溶液固定，采用HE染色方法，观察病理形态学；剪下

9、肝左外叶制成10%的匀浆。1.5 乙醇脱氢酶检测方法（底物发光法） 参照文献3，4方法自行测定，具体操作为：配制0.1 mol/L甘氨酸氢氧化钠缓冲液（pH=9.0），77 mmol/ L NAD溶液，将以上两液按61混合配成试剂，配制825 mmol/L乙醇溶液作为试剂。样品100 l，试剂1 500 l。预孵5 min后，加试剂50 l（空白对照管加等量蒸馏水），22水浴反应1 h，分光光度计340 nm波长处，以空白对照管调零，读取吸光度值。ADH活力单位定义：每分钟催化1 mol还原型辅酶（NADH）的酶量为1个单位。1.6 统计学处理病理学半定量等 级资料采用Ridit分析法；计量数

10、据采用均数±标准差（±s) 表示，组间比较采用方差齐性检验及单因方差分析。2 结果2.1 一般情况观察模型对照组大鼠实验开始时造模后反应不一，或先出现兴奋状态,在笼内奔跑，打斗，尔后见四肢瘫软、行走不稳、卧倒酣睡等中枢神经抑制状态；或直接进入中枢抑制状态。造模3 d左右，灌酒后兴奋不已不明显。随着造模时间的延长，出现酣睡的时间逐渐缩短，酣睡持续时间逐渐延长。大便稀软不成形，毛发干枯无光泽，饮食量减少，体重明显降低，精神萎靡不振。各给药组一般情况好于模型对照组。实验过程中模型对照组大鼠死亡3只，柴胡组、柴胡黄芩11组大鼠各死亡2只，其余各组死亡1只。2.2 各组大鼠血清样和肝

11、组织中ADH含量的比较表1结果显示：与正常对照组比较，模型对照组肝匀浆和渗漏入血清中的ADH含量显著增高（均为P0.01）。与模型对照组比较，柴胡组、3个柴胡黄芩配伍组、小柴胡组均能明显降低血清中ADH含量；对肝脏中ADH含量的增高有明显改善作用的是小柴胡组、柴胡黄芩21组和12组，并显示柴胡黄芩配伍后以12组对肝脏及血清ADH的改善作用最优。表1 柴胡黄芩配伍对大鼠血清和肝组织中ADH的影响（略）2.3 各组大鼠肝组织脂肪变性、炎症变性病理分级统计表23结果显示：各造模组大鼠肝组织脂肪变性与炎症变性与正常对照组均有显著性差异，表明酒精对肝脏造成显著的脂肪及炎症变性的病理改变；柴胡黄芩11组、

12、12组对肝组织脂肪变性与炎症变性均有显著的发送作用，小柴胡组对炎症变性改善作用明显。表2 柴胡黄芩配伍对大鼠肝组织脂肪变性的影响（略）表3 柴胡黄芩配伍对大鼠肝组织炎症变性的影响（略）3 讨论ADH是特异性很广泛的酶，主要作用是催化乙醇生成具有高度毒性的乙醛，后者在肝细胞线粒体中由乙醛脱氢酶（ALDH）转化为乙酸。研究证实，大鼠酒精性肝损伤（ALD）时胞浆质ADH活性增强，导致乙醇氧化加强，肝内耗氧增加，伴随着大量NAD被还原形成NADH，使NADH/NAD比值相应增高而失衡，改变了细胞氧化还原状态，严重干扰了细胞的新陈代谢，使三羧酸循环受到抑制，导致肝细胞的损伤。随着ALD的发生发展，肝AD

13、H活性进行性增加，其增加程度和ALD的病理演变呈正相关，所以ADH酶活性水平在酒精性肝损伤病理学具有重要意义。同时由于乙醛生成增加，乙醛较乙醇对肝毒性更强，伴随着线粒体ALDH活性降低，未被氧化的乙醛进入血中，通过黄嘌呤氧化酶转变为超氧化物，导致脂质过氧化，促进肝损伤。本实验结果证实，大鼠急性酒精性肝损伤时血清和肝组织中ADH活性均明显增强；柴胡黄芩配伍组、小柴胡组、柴胡组均能明显降低血清ADH水平，提示能减轻肝细胞损伤，使肝中ADH渗漏入血减少；柴胡黄芩21组、12组、小柴胡组能抑制肝脏中ADH活性的增高，以柴胡黄芩配伍组中12组的作用最佳，与小柴胡组的作用相仿，表明影响乙醇代谢的关键酶ADH、调节乙醇的代谢使之恢复正常、抑制乙醛的过度产生是柴胡黄芩配伍抗酒精性肝损伤的另一重要机制。同时，肝脏的病理学的结果也证实在本实验中选择的3组不同比例的柴胡黄芩配伍，有随着黄芩剂量的增加，抗急性酒精性肝损伤的作用加强的趋势。这与中医对急性酒精性肝损伤的辨证论治，对证治疗的认识相一致，以黄芩清利中焦湿热酒毒祛除致病之邪为主，辅以柴胡疏解湿热导致的肝郁气滞，治病求本故有较佳疗效。参考文献：1 刘仁慧，王宪龄，宋 宁.柴胡黄芩酒精作用的研究J.中药药理与临