染色体核型分析及染色体显微分离技术研究进展_闫素丽

1、生物技术通报BIOTECHNOLOGY BULLETIN 技术与方法 2008年第 4期收稿日期 :2007-01-07作者简介 :闫素丽 (1982- , 女 , 汉族 , 在读硕士研究生 , 研究方向 :作物遗传育种 ; E-mail:yansuli2005 通讯作者 :安玉麟 (1954- , 男 , 研究员 , 硕士生导师 ; E-mail:nkyanyulin染 色 体 核 型 是 指 某 一 物 种 所 特 有 的 一 组 染 色 体或一套染色体 的形态特征。 核型分析 是对生物细 胞核内全部染色体的 形态 特 征 进 行 分 析 , 是 物 种 分 类的基本依 据。以核型 为 基

2、 础 的 染 色 体 微 分 离 、 微 克 隆 技 术 是 指 在 显 微 镜 下 对 特 定 染 色 体 进 行 显 微 分离或显 微 切 割 , 随 后 进 行 PCR 扩 增 、 DNA 鉴 定 和 克隆 , 进 而 可 以 快 速 的 建 立 相 应 的 DNA 文 库 、 筛 选 有用探针、 构建特 定区 域 分 子 连 锁 图 谱 等 。目 前 该 技 术 已 经 在 动 植 物 遗 传 与 进 化 研 究 中 显 示 出 了 独 特 作用。 对近年来核型 分析和染色体显微切 割技术 的方法进行了综述 , 并 简要介绍了其应用和 前景。1核型分析核 型 是 根 据 细 胞 分 裂

3、 中 期 浓 缩 的 染 色 体 形 态结构建立的 , 核型 模式图 通 常 是 将 显 微 拍 摄 的 染 色 体照片 剪贴、 整理、 绘制而成。 不 同的物种具有不同的核型 , 因 此 核 型 是 区 别 物 种 的 基 本 遗 传 学 依 据 , 也对分子生物 学的研究具有指导意 义。1.1染色体标本的制作过程1.1.1取材 核型分析多以初 生根的根尖 为 材 料 ,因 为根尖易培养、 不受 季节 影 响 , 且 细 胞 分 裂 旺 盛 、 集 中 、 容 易 辨 别 。 李 懋 学 1认 为 凡 能 进 行 细 胞 分 裂 的植物组 织或单个细胞都可以 作为取材的对象。 植 物分生组织

4、的 生 长 具 有 一 定 周 期 性 , 这 就 限 制 了 取 材时间 , 一般 认 为 取 材 应 选 在 细 胞 分 裂 中 期 最 为 合 适 , 研 究 表 明 , 植 物 细 胞 分 裂 中 期 高 峰 一 般 出 现 在 上 午 8:3011:30, 但 也 有 植 物 分 裂 中 期 的 时 间 段 不 只 一 个 , 如 阿 拉 伯 茶 21d 至 少 出 现 2个 分 裂 高 峰 , 因此 , 取材时要根据材料 选择合适的时间。1.1.2预处理 核型分析的关 键是预处理 , 合 理 的预 处理能得到 分 裂 相 高 , 形 态 好 的 中 期 染 色 体 。实染色体核型分

5、析及染色体显微分离技术研究进展闫素丽 1, 2安玉麟 2孙瑞芬 2李素萍 2(1内 蒙 古 农 业 大 学 , 呼 和 浩 特 010019; 2内 蒙 古 农 牧 业 科 学 院 , 呼 和 浩 特 010031摘 要 :染色体核型分析是遗传学研究的重要手段 , 也是物种分类和鉴定的基本依据。染色体显微切割技术是细胞遗传学和分子遗传学相结合的一种技术 , 应用前景广阔。重点综述了染色体核型分析和单染色体显微切割技术的操作规程。关键词 :染色体 核型分析 显微切割 微克隆Research Progress of Karyotype Analysis and ChromosomeMicro-di

6、ssection TechnologyYan Suli 1, 2An Yulin 2Sun R uifen 2Li Suping 2(1Inner Mongolia Agriculture University , Huhhot 010019; 2Inner Mongolia Academy of Agriculture and Animal HusbandrySciences , Huhhot 010031Abstract :Karyotype analysis is an important method for genetic research , it is also the basi

7、s of plant classificationand appraisal. Chromosome micro-dissection and micro-clone is a combined technology of cytogenetics and molecular genetics , which have a bright prospect. The major procedures of karyotype analysis and micro-dissection and micro-clone were summarized in this paper.Key words

8、:Chromosome Karyotype analysis Micro-dissectionMicro-cloningDOI:10.13560/ki.biotech.bull.1985.2008.04.0142008年第 4期际操作中常用的方法 有物理方法和化学方 法。 物理 方 法 是 用 低 温 对 材 料 进 行 处 理 , 处 理 温 度 一 般 在 0 8 , 常 用 的 方 法 是 用 冰 水 混 合 物 4 对 材料进行处理 , 该 方 法 的 优 点 是 简 单 、经 济 、 安 全。化 学 方 法 预 处 理 常 用 的 试 剂 有 :秋 水 仙 素 、 对 二氯苯、 8-

9、羟喹啉、 -溴荼 和风油精等。 根据不同 的 材 料 选 择 合 适 的 试 剂 , 秋 水 仙 素 毒 性 较 强 , 价 格 较 高 , 处理效果好 , 但处理时间 不 能 过 长 ; 对 二 氯 苯 预 处理的 效果与秋水 仙 素 相 当 , 也 具 有 较 强 的 毒 性 , 价 格 较 低 ; 8-羟 喹 啉 较 适 宜 处 理 较 大 染 色 体 的 植 物 ; -溴荼对禾 本 科 和 水 生 植 物 的 非 离 体 材 料 处 理 效 果 较 好 3; 风 油 精 处 理 的 特 点 是 经 济 、 安 全 , 近 年 来 在 水 稻 4、 烟 草 5、 平 邑 甜 茶 6等 植

10、 物 上 采 用 过 , 效 果 较好 , 但未见用于其它 植物。1.1.3固 定 固 定 是 用 渗 透 力 强 的 固 定 液 将 材 料 迅 速杀死 , 使细胞保持 原有状态 3, 7。常用的固定 液 有 卡 诺 氏 固 定 液 (无 水 乙 醇 :冰 醋 酸 =3:1 , 也 有 少 数 人 用 甲 醇 冰 醋 酸 溶 液 (甲 醇 :冰 醋 酸 =3:1 来 固 定 材料。1.1.4解 离 解 离 的 目 的 是 除 去 细 胞 壁 与 胞 间 层 之 间的果胶 , 软化细胞 壁。 材料固定后应尽快 解离。 研究表明 , 固定后 立 即 解 离 的 材 料 压 片 效 果 要 优 于

11、 固定后保存 的材料 3。固定好的材料 若不能 及 时 解 离应 保存在 70%酒精中。材料解离方法有酶解 法和酸解法。 酶解法是 用 低浓度的果胶酶 (1%2% 和纤 维素酶 (1%5% 的 混合液解离 材料 , 解离时间一般 在室温下 25h 。酸 解 法 一 般 是 将 材 料 放 入 预 热 60 的 1mol/L HCl 中 解 离 , 解 离 时 间 视 不 同 的 材 料 而 定 , 一 般 为 几 分 钟 到 十几分钟或更长 8。1.1.5染色 为方便观察分析 要对染色体染色 , 常 用 的 染 色 剂 有 醋 酸 洋 红 、 铁 矾 -苏 木 精 、 Schiff 试 剂 、

12、 品 红、 改良的卡宝 品 红 等 。染 色 时 根 据 不 同 的 材 料 选择合适的染 色剂 , 但 染 色 时 要 保 证 细 胞 质 不 染 色 或染色 浅 , 以免影响观察效 果。1.1.6制 片 常 用 的 制 片 方 法 有 压 片 和 涂 片 2种 , 常 规 压 片 法 不 固 定 , 只 要 压 片 时 盖 玻 片 保 持 不 动 使 染 色 体 分 散 开 来 即 可 , 此 方 法 容 易 操 作 ; 涂 片 法 要 先 将 材 料 弄 碎 , 使 细 胞 均 匀 分 散 开 , 再 制 片 观 察 , 这 种 方 法 操 作 较 复 杂 , 但 能 使 细 胞 更 好

13、 的 分 散 开 。1.1.7检片、 封片 在低倍镜下 找到分散良 好 的 中 期 相细胞后 , 调 到 高 倍 镜 下 观 察 拍 照 。若 不 能 及 时 对片子进行拍 照 或 想 短 时 间 保 存 较 好 的 片 子 , 可 以 用 石 蜡 、 凡 士 林 、 甘 油 (稀 释 后 加 一 滴 甲 醛 或 无 色 指 甲油把盖玻片的 四 周 密 封 起 来 , 置 于 冰 箱 冷 藏 室 保存 8。1.2核型分析方法1.2.1手 工 核 型 分 析 法 核 型 分 析 时 通 常 按 照 李 懋学 9的标准来确定染色的数目、 形态 ; 按 Stebbins 10的方 法确定核型 类 别

14、 。其 过 程 是 选 取 数 目 完 整 , 分 散良好的染色体 标 本 进 行 显 微 照 相 , 照 片 放 大 后 将 染色体逐条 剪 下 , 以 染 色 体 长 度 和 着 丝 点 2个 参 数 为 依 据 对 染 色 体 进 行 人 工 配 对 , 测 量 出 长 臂 与 短 臂 , 并算出它们的平 均值、 相 对 长 度 及 臂 比 , 绘 制 出 核型模式图。 由于这种 方法是手工进行的 , 费 时、 费 力、 测量误差也比较大 。 因此 , 一定程度上影响 了核 型分析的准确 性。1.2.2染 色 体 图 像 核 型 分 析 系 统 分 析 法 染 色 体 图 像 核 型 分

15、 析 系 统 是 一 以 电 脑 和 手 工 核 型 分 析 步 骤为基础的 染色体核型分析 系 统 , 能 够 准 确 、 快 速 、 方 便 的 将 原 始 染 色 体 显 微 图 像 转 变 为 整 齐 的 染 色 体分类图像 , 并能将结 果分析、 输出及储存 1113。因 此 , 可 以 将 研 究 人 员 从 枯 燥 的 手 工 测 量 中 解 放 出 来 , 提高工作效 率 , 但其缺点是耗资较 大。1.2.3利用 Adobe Photoshop 软件进行核型分析 电 脑系统运用 Adobe Photoshop 软件 , 不仅能够很容易 地完成染色体的 配 对 排 列 , 非 常

16、 精 确 地 测 量 染 色 体 各 臂 的 长 度 及 全 长 , 建 立 核 型 模 式 图 , 而 且 可 以 去 除原 照片中的斑点、 划痕、 调 整 亮 度 对 比 度 、 对 交 叉 重 叠 的 染 色 体 臂 进 行 修 整 等 , 使 分 析 结 果 比 较 完 美。因此当此 软 件 推 出 时 , 国 内 外 许 多 人 就 尝 试 运 用 它 在 教 学 、科 研 及 临 床 实 践 中 进 行 核 型 分 析 14。 另 外 Microsoft Office Excel 可 以 以 Adobe Photoshop 软 件 测 量 的 染 色 体 长 度 数 据 为 基 础

17、 , 绘 制 出 精 确 的 核型模式图 15。 Adobe Photoshop 软件与 Microsoft Office Excel 软 件 的 结 合 使 用 将 会 使 核 型 分 析 结 果 更加完美 , 这与 染 色 体 核 型 分 析 系 统 相 比 较 费 用 大 大降低 , 而且 操作方便。 目前 , 已经广 泛应用在核型闫素丽等 :染色体核型分析及染色体显微分离技术研究进展 71生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2008年第 4期分析研究中。2染色体微切割、 微克隆技术染 色 体 微 切 割 、 微 克 隆 技 术 最 早 是 1981年 Scale

18、nghe 等 16创 立 的 , 它 为 遗 传 学 研 究 提 供 了 有 力 的手段 , 但 当时滞后的扩 增 技 术 限 制 了 该 技 术 的 发 展 。 随 着 1989年 PCR 技 术 与 微 分 离 、 微 克 隆 技 术 的结 合 , 该技术进入了一 个 新 阶 段 并 广 泛 应 用 于 基 因工程研究。其技 术 流 程 为 染 色 体 标 本 的 制 备 、 目 标 染 色 体 的 识 别 、 微 分 离 、 分 离 片 断 的 PCR 扩 增 和 鉴定等 。2.1染色体标本的制备及目标染色体的识别 用 于 显 微 分 离 的 染 色 体 标 本 制 备 方 法 与 常

19、规 制 片 基 本 相 同 , 只 是 固 定 液 中 酸 的 比 率 要 适 当 降 低 , 以 减 少 酸 对 DNA 的 破 坏 , 宋 文 芹 17在 制 片 中 用 70%酒精取代 了传统的固定液。为使 细胞质背景清 楚 , 崔 丽 华 等 18采 用 去 壁 低 渗 法 , 提 高 了 染 色 体 分 离的效率。但无论 用 什 么 方 法 , 都 要 使 染 色 体 尽 量 散开 , 易于 识别目标染色体。目标染色 体 的 识 别 , 早 期 报 道 主 要 是 一 些 染 色 体 容 易 识 别 的 材 料 , 如 田 靫 等 19对 附 加 在 TAI-27中 的 中 间 偃

20、麦 草 染 色 体 进 行 了 分 离 ; 何 聪 芬 等 20成 功的分离了 携带抗病基因的单价 体。 这种方法的优 点 是 所 分 离 的 染 色 体 不 受 伤 害 , 能 够 建 立 完 整 的 DNA 文 库 , 但 其 缺 点 是 只 能 识 别 一 些 容 易 辨 认 的 染色体 , 对于 复杂、 难分辨的染色体 很难操作。 分带 技 术 的 出 现 及 应 用 使 得 任 意 一 条 染 色 体 或 者 染 色 体任意区段 的显微切割成为可能 。 田靫 21将 C-分带 技术运用在小麦 1D 染色 体的微切割上 , 并进行 了 微克隆。2.2目标染色体的显微切割和分离目 前 染

21、 色 体 显 微 分 离 与 切 割 的 方 法 主 要 有 4种 , 即微细玻璃针法 、 激光显微切 割 法 、 流 式 细 胞 仪 法、 微细玻璃 针切割法 和 显 微 激 光 切 割 相 结 合 的 方 法 。2.2.1微 细 玻 璃 针 法 微 细 玻 璃 针 法 是 借 助 倒 置 显 微 镜 用 尖 端 直 径 不 超 过 0.5m 的 细 玻 璃 针 对 目 标染色体进行直接 切割 , 将 切 割 下 来 的 染 色 体 连 同 细 玻 璃 针 的 针 尖 一 同 折 断 于 放 有 蛋 白 酶 K 的 Eppendorf 管 中 , 高 速 离 心 数 秒 后 , 将 得 到

22、的 染 色 体 DNA 用于 PCR 扩增或 者 -20 保存备用。这种方 法 是染色体显微切割的 基 本 方 法 , 其 特 点 是 技 术 要 求 较 高 、 不 容 易 掌 握 , 但 是 其 较 低 的 费 用 使 得 这 项 技 术已经在玉米 22、 花椰菜 23、 石蒜 24和木本植物银杏 25、 欧 洲山杨 26、 柚 27等多种植物 中广泛应用。2.2.2激 光 显 微 切 割 法 激 光 微 束 是 20世 纪 60年 代 激 光 技 术 问 世 后 在 生 物 学 和 医 学 领 域 中 出 现 的 一 项 新 技 术 。 1986年 这 项 技 术 成 功 运 用 于 切

23、 割 动物染色体后 , 1988年 梁宏等 28首 次 尝 试 用 激 光 切 割植物染色体 , 使 激光 显 微 照 射 用 于 植 物 染 色 体 工 程 成 为 可 能 。 之 后 , 王 兰 岚 29, 30等 人 在 国 内 首 次 成 功 采 用 氩 离 子 激 光 微 束 切 割 了 蚕 豆 等 多 种 植 物 的 染 色 体 片 段 , 但 是 由 于 氩 离 子 激 光 能 量 太 大 , 损 伤 了 染 色 体 DNA , 没 能 将 切 割 的 染 色 体 分 离 出 来 。 1992年 日 本 学 者 Fukui 等 开 发 了 激 光 显 微 切 割 植 物染色体的

24、方法 , 其过 程 是 将 染 色 体 标 本 制 作 在 贴 有 特殊薄膜的培养皿底 部 , 在 倒 置 显 微 镜 下 找 到 好 的分裂相后 , 先 用足以 穿 透 薄 膜 的 较 大 功 率 的 激 光 切 出 一 个 以 目 标 染 色 体 为 中 心 的 八 角 膜 或 长 方 形 膜 (此时膜已与底 膜分开 , 再用 较 小 功 率 的 激 光 束 照射 , 以蒸 发掉此范围内 目 标 染 色 体 以 外 的 核 染 色 体 , 最后只留下目标 染 色 体 。运 用 这 一 技 术 马 有 志 等 31用 氩 离 子 切 割 了 普 通 小 麦 与 小 麦 -中 间 偃 麦 草

25、染色体 。 何聪芬等 20利用激光 显微切割技术分离了 小麦遗传背景下携带 黄矮病抗性基因的染 色体。 这 一技术较玻璃针法的 优 点 为 可 以 自 动 操 作 、 容 易 掌 握 , 但是微束 激光切割仪价格昂贵 , 很难广泛应用。 2.2.3微 细 玻 璃 针 和 激 光 显 微 切 割 相 结 合 的 方 法 虽 然 玻 璃 针 法 和 微 束 激 光 法 是 微 切 割 染 色 体 的两种可靠方 法 , 但是 玻 璃 针 法 操 作 复 杂 而 激 光 法 费用 高昂 , 给科研工作带来 了一定困难。 1998年王 槐等 32在王兰岚 29, 30等人 的 基 础 上 综 合 了 微

26、 细 玻 璃 针法和激光显微 切割法 , 探 索 出 了 一 条 简 便 有 效 的 利 用 N d-YAG 激 光 微 束 切 割 植 物 染 色 体 的 方 法 。 这种方法 不仅费用低而 且 切 割 细 致 精 确 , 所 得 到 的 DNA 污 染 率 也 大 幅 度 降 低 , 为 深 入 进 行 染 色 体 特 定 区 域 的 微 切 割 及 微 克 隆 工 作 奠 定 了 基 础 。 2001年 曹 能 等 人 33利 用 这 种 方 法 成 功 分 离 了 黑 麦 染 色 体 , 这必将对 深入开展 细 胞 遗 传 学 及 分 子 生 物 学 的 研 究产生深远影响。2.2.4

27、流 式 细 胞 分 类 器 法 流 式 细 胞 分 类 器 法 的722008年第 4期原 理 是 :染 色 体 能 与 特 异 的 荧 光 染 料 (Hoechst 和 Chromomycin 结 合 , 并 且 由 于 各 条 染 色 体 组 分 的 不 同 以 及 染 色 体 上 DNA 碱 基 序 列 的 非 随 机 分 布 , 使 他 们 吸 收 Hoechst 和 Chromomycin 的 量 及 比 例 也 就 不同 , 激光照射后 , 染 色体呈现出 不 同 的 荧 光 带 , 将 目标染色体 发出的荧光 波 长 输 入 计 算 机 , 用 计 算 机 控 制将发出同一波长的

28、 染 色 体 收 集 到 一 起 , 从 而 得 到要分离的目 标染色体。 这种分离方 法适用于染色 体形态差异较大的材 料 , 能 在 短 时 间 内 分 离 到 大 量 的 同 一 染 色 体 , 但 是 其 设 备 昂 贵 , 在 科 学 研 究 中 难 以普 及。2.3PCR 扩增早期的克 隆 方 法 主 要 是 酶 切 直 接 克 隆 , 这 种 方 法操作精细、 所需 底物较多且工作 量 大 、 效 率 低 , 不 利 于 后 续 研 究 的 需 要 , 因 此 若 将 分 离 到 的 染 色 体 DNA 经 过 PCR 扩 增 后 再 克 隆 到 载 体 上 , 效 率 将 会

29、大 大 提 高 。 1989年 Ludecke 等 将 PCR 技 术 与 染 色 体显微操作技术结 合后 , 先 后 出 现 了 接 头 引 物 PCR (LA-PCR 、 简 并 引 物 PCR (DOP-PCR 、 单 一 引 物 PCR (SUP-PCR 等 , 但 研 究 中 普 遍 采 用 的 是 接 头 引 物 PCR (LA-PCR 和 简 并 引 物 PCR (DOP-PCR 2种 方法。2.3.1连 接 接 头 PCR LA-PCR 是 用 人 工 合 成 的 两 条 互 补 寡 聚 核 苷 酸 链 (Linker 和 adapter 做 连 接 接 头 , 连 接 接 头

30、 互 补 后 产 生 粘 性 末 端 , 选 取 与 Linker 和 adapter 产 生 相 同 末 端 的 内 切 酶 消 化 染 色 体 DNA 后 与 连 接 接 头 相 连 接 , 再 用 其 中 的 接 头 (Linker 作引物 就 可 以 扩 增 任 意 未 知 的 DNA 片 断 。 这 种 方 法 减 少 了 DNA 污 染 的 可 能 , 并 且 不 存 在 选 择 性 的 扩 增 , 极 大 提 高 了 文 库 的 完 整 性 , 是 染 色 体 显 微切割和扩增技术史 上的一次飞跃。 由于 某些限 制 性 内 切 酶 (Sau3AI , Mbo I , Hpa I

31、I 等 对 胞 嘧 啶 甲 基 化 敏 感 , 而 高 等 生 物 的 核 DNA 中 未 甲 基 化 的 胞 嘧 啶 常 常 位 于 富 含 单 /低 拷 贝 的 区 域 34, 因 此 为 防 止 扩 增 产 物 高 频 率 重 复 序 列 的 出 现 , 在 LA-PCR 中 常使用 Sau3AI 、 Mbo I 、 Hpa II 这 3种限制性内切酶。 2.3.2简并引物 PCR DOP-PCR 由 wesley1989年 35首次提 出 , 他 认 为 在 基 因 组 DNA 中 , 存 在 一 种 三 联 核 苷 酸 序 列 (5pGAA 3p , 此 序 列 每 64个 碱 基

32、就 会 出 现 一 次 , 若 以 此 序 列 的 互 补 顺 序 为 起 点 , 后 随 4 个随机核苷酸 , 按克隆 的 需 要 设 计 一 个 带 有 特 定 酶 切位点的核 苷酸片段引 物 , 此 引 物 在 复 性 温 度 低 时 会 与模板产生低严谨性 配 对 。这 样 , 便 可 以 对 片 断 DNA 进 行 扩 增 。 该 技 术 优 先 扩 增 目 标 染 色 体 上 的 单低拷贝序列 , 有利于 筛 选 目 标 染 色 体 的 特 异 性 探 针 , 而 且 无 需 对 所 切 割 的 染 色 体 DNA 进 行 限 制 性 酶 切 , 具 有 快 速 、 高 效 、 工

33、 作 量 小 的 优 点 , 但 是 由 于 它 存 在 选 择 性 扩 增 问 题 , 因 而 不 利 于 构 建 完 整 的 DNA 文库。2.4扩增产物的鉴定鉴 定 扩 增 产 物 的 方 法 有 Southern 杂 交 法 、 原 位 杂 交 法 、 PCR 法 及 STS 微 卫 星 等 序 列 扩 增 法 36等 , 一般常用的 是 Southern 杂交法和原位杂 交法。 2.4.1southern 杂 交 法 Southern 杂 交 分 析 是 目 前 鉴定扩增片段的常 用方 法 , 它 可 以 初 步 确 定 扩 增 片 段 的 来 源 , 也 可 确 定 一 个 克 隆

34、 的 插 入 片 段 是 单 拷 贝 、 低拷贝或是重复序 列。 Southern 杂交时 , 可以用 同 位 素 或 生 物 素 标 记 的 基 因 组 DNA 做 探 针 与 扩 增 产物杂交 , 也可以 用标 记 的 扩 增 产 物 做 探 针 与 基 因 组 DNA 杂交 。 但即使有杂交信号 , 所 扩增的片段也 可能是与目的染色体 同 源 的 序 列 , 因 此 需 要 进 行 下 一步的鉴定 。2.4.2原 位 杂 交 法 Southern 杂 交 鉴 定 法 具 有 很 大局限性 , 它 不能确定 扩 增 产 物 是 来 自 于 哪 一 条 染 色 体 , 而原位杂交的手 段

35、可 以 一 定 程 度 上 确 定 扩 增 片 断 与 目 标 染 色 体 的 同 源 性 , 但 是 该 技 术 操 作 复 杂 , 并且 对基因组复杂的植 物来说难度更大。 因此 , 目前报道很少。3染色体显微切割技术的应用和展望随 着 显 微 切 割 技 术 在 构 建 染 色 体 DNA 文 库 、 研 究 染 色 体 自 身 结 构 、 基 因 绘 图 等 方 面 的 成 功 运 用 , 它必将在更深 层的 基 因 组 研 究 中 发 挥 独 特 的 作 用。 但是 , 目前此项技术还存在 许多不足 , 如良好染 色 体 标 本 的 制 备 、 目 标 染 色 体 的 准 确 辨 认

36、 等 , 相 信 随着分子生物 学技术的 发 展 , 这 些 问 题 都 会 得 以 解 决 , 显 微操作技术也必将有 更广阔的前景。参 考 文 献1朱徵 . 植物染色体及染色体技术 M. 北京 :科学出版社 , 1982, 43. 2赵 振 军 . 阿 拉 伯 茶 组 织 培 养 与 核 型 分 析 硕 士 学 位 论 文 . 南 京 :南 京 农 业 大 学 , 2006.闫素丽等 :染色体核型分析及染色体显微分离技术研究进展 73生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2008年第 4期 (上接第 57页 !M icrobiology , 2007, 30:2392

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