蛙心灌流实验报告

1、文档实验二离体蛀心灌流实验专业：学号：姓名:一、 实验目的1 .学习离体器官（蛙心）灌流的方法。2 .观察理化因素对蛙心活动的影响。二、实验原理蛙心的灌流：蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新 陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间，心肌的营养是通 过心脏内膜液体的直接渗透而得。心肌：受体受体激动剂效应储肾上腺素去甲肾上腺素心率增快、房室传导 加速、心肌收缩力加 强。M乙酰胆碱心率减慢、房室传导 减慢、心肌收缩力减 弱。1.任氏液：正常对照含有 NaCl、CaCl2、KCl、NaH2P。4、Na2HPO4和蒸储水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相

2、近。2.0.65%NaCl 灌流：0_ 65%N aClM 流细胞4液Ca25心肌细胞动作电匕期间Ca3+内流H心肌细胞胞浆Ca"浓度H心肌收缩力*3.2%CaCl2 灌流:细胞外液Ca%浓度显著升高膜内-外CF浓度梯度增大一_ 慢反应细胞4期*工作细胞动相藁期间Ca2t内流件自动去加速看I肌浆C7港度抬肌浆Ca浓度持续升高自律性4CF与肌钙蛋白结合数量料心率+C与肌钙蛋白 只结合不解离心肌收缩力林心肌持续收缩4.1%KCl 灌流:明胞外微K%度轻度并高K聊制C&*内流燃佛k械梯期小康的兴奋-螂 糊海用豺射电位与触位水平的电位差就小wmn心唧麟雒相细胞外液K*浓度显著升高蟆内

3、-外试浓度梯度减小静息电位绝对值减小至65 mVNa通道失活心肌细胞兴奋性丧失心脏停搏于舒张状态5.1:10000 E 灌流肾上腺素(E)心肌细胞膜瓦受体结合Ca智肌钙蛋白亲细胞膜对Ca3+通透性+ 和力 dII ；1 、肌浆网摄CB速度十4期自动去极化速度+肌浆网对A C於通透性I复极期肌浆Ca： 浓度降低速度自律性十心肌舒张,心率4动作电位期竹间C/内流1*心肌收缩力外1.1: 10000 Ach 灌流乙酰胆喊(Ach)心肌细胞膜M受体结合抑制铸通道对Ca*通透性J /动作电击期间C，内流长心肌收缩力-细胞膜对K，通透性+窦房结细胞最大复极电位绝 对值增大. 4期K*外流增加自律性+ I心

4、7 .心得安8受体阻断剂，抑制肾上腺素与 8受体结合，使E不能发挥作用8 .阿托品M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力文档三、实验器材离体蛙心任氏7取、l%KCl溶液、2%CaCl2溶液、0.65%NaCl溶液、1:10000肾上腺素、 1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品四、实验步骤1 .离子试剂任氏液清洗任氏液清洗任氏齐Ik 0.65%NaCl 2 2%CaCl2 1%KClk任氏液2 .药物试剂任氏液清洗任氏液清洗任氏液清洗E心得安+Ek Ach阿托品+Ach k 任氏液Ca2+减少，心肌收分析：细胞外液中Ca2+浓度降低，2期Ca2+内流减少，胞浆中 缩力降

5、低。心率：38次/min最大收缩力：3.5g 最小收缩力：1.1g图5肾上腺素灌流脉搏曲线图3 2% CaCl2灌流脉搏曲线分析：心肌的舒缩活动与心肌肌浆中的钙离子浓度的高低有关。心肌肌浆网不发达，储钙能力差，易受细胞外钙离子浓度高低影响。细胞外液中Na+与Ca2+有竞争性抑制，细胞外液Ca2+浓度升高，细胞兴奋时内流 Ca2+增加，心肌收缩力增 强。慢反应细胞4期去极速度加快，心率增快。分析：K+与Ca2+在细胞膜上有竞争性才制，细胞外液中 K+浓度升高，K+抑制细胞 膜对C4+转运，因此进入细胞内Cef+Wffi,心肌的兴奋一收缩耦联作用减小，心文档分析：肾上腺素与心肌细胞膜上的 例受体结

6、合，心肌细胞和肌浆网膜C4+通透性 增强，肌浆中Ca2+浓度升高，心肌收缩力增强。而且肾上腺素使肌钙蛋白与钙离 子亲和力下降，肌钙蛋白对钙离子的释放增强，肌浆网膜摄取钙离子的速度加快， 钠-钙离子的交换增加，复极期向细胞外排出钙离子增多，心肌舒张速度增快， 整个舒张过程明显加强。分析：心得安是B 1受体阻断剂，能够抑制肾上腺素与B 1受体结合，使E不能 发挥作用，因此心率及心肌收缩力保持不变。图8 阿托品+Ach灌流脉搏曲线心率：34次/min最大收缩力：2.5g 最小收缩力：1.1g心率：33次/min最大收缩力：2.5g最小收缩力:1.1g图7 乙酰胆碱灌流脉搏曲线分析：乙酰胆碱与心肌细胞

7、膜上的 M受体结合，心肌细胞膜K1道的通透性增强， 促进K+外流，动作电位期间Ca2+内流减少，心肌收缩力降低。同时乙酰胆碱可直 接抑制Cf通道，导致Ca2+内流减少，心肌收缩力降低。文档分析：阿托品是M受体阻断剂，能够抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力，因此心率及心肌收缩力保持不变。六、 讨论1. 为何常用离体蛙心，而不常用离体哺乳类动物心脏做心脏灌流实验？蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，它的离体组织、器官的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源丰富且价格低廉。离体蛙心不需要恒温和特殊的供氧设备，因此常被选作心脏灌流实验。而哺乳类心脏生活条件要求高，离体

8、心脏灌流需要恒温环境，恒压或恒流灌流、供氧。实验影响因素多、 设备多， 心脏离体后存活时间较短。因此一般学生实验较少用哺乳类动物心脏做离体心脏灌流实验。2. 离体蛙心为什么会节律性跳动？把离体和脱离神经支配、体液因素影响的动物心脏保持在适宜的环境中，在一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动，这是由于心脏的静脉窦能自动按一定的兴奋节律产生兴奋，并传导到心房和心室，引起整个心脏又节律的兴奋和收缩。 静脉窦能产生节律性兴奋是由于其自律细胞在复极完毕后，立即开始自动的缓慢的去极化，使膜电位逐渐减小，当达到阈电位水平时，便爆发动作电位。3. 蛙心插管插入心室时，是在心脏舒张期插入还是在心脏收缩期插入？为

9、什么？蛙心插管插入心室时，应在心缩期插入。这是因为主动脉开口处有半月瓣，当心室收缩时，半月瓣正好打开，此时主动脉与心室腔相通，插管容易顺势插入心室。而在心室舒张期，半月瓣处于关闭状态，对插管产生阻力，不利于插入，强行插入易损伤心肌组织。4. 实验过程中，为什么必须保持蛙心插管内液面高度的恒定？液面过高过低会产生什么影响？在实验中，蛙心插管内液面的高度发生变化，心脏收缩曲线会发生相应的变化。 心肌缩短幅度和速度即受前负荷的影响，也受后负荷的制约。插管内液面高度所产生的压力，在心室舒张末期是作用于心肌的前负荷，这个前负荷决定了心肌在收缩之前的初长度。因此根据心肌Starling 心肌定律，液面高度

10、的变化将导致心肌收缩强度的改变。心室开始收缩时，插管内液体产生的压力又成为心肌收缩时承受的后负荷，后负荷改变会使心肌收缩的幅度和速度发生变化。液面过高，心缩曲线幅度降低。过高的液面使心室前负荷超过最适前负荷，心肌收缩强度不在增加或下降。而过高的后负荷却使心肌缩短幅度和速度大大下降。液面过低，心室收缩曲线幅度也会降低，前负荷过小，导致心肌收缩强减小的效应比后负荷减小的效应要强。因此试验中选取一最适液面高度，并保持这一液面高度，以便取得较好的实验结果。5. 任氏液为何能维持离体蛙心较长时间的跳动？怎样才能使离体蛙心存活时间长？因为任氏液是常规的生理代用液。它的组成与体液相近，具有能维持生物体的正常生命活动的功能。它与体液等渗具有相同的PH值，并含有能量、营养物, 而且含有生物体心肌波动所需要的离子，如：K+、Na-K Ca2将，并且等浓度，故能维持蛙心较长时间的跳动。可以通过用与蛙体液相近的生理代用液来使蛙心长时间存活。6. 蛙心灌流时，蛙心心