盐酸环丙沙星注射液的高效液相色谱测定-

1、盐酸环丙沙星注射液的高效液相色谱测定-    核心提示：盐酸环丙沙星注射液的高效液相色谱测定摘要：建立测定盐酸环丙沙星注射液中盐酸环丙沙星含量的高效液相色谱检测方法。色谱柱为Gemini C18110A( 250 mm×4.60 mm,5 m)，流动相.盐酸环丙沙星注射液的高效液相色谱测定摘要：建立测定盐酸环丙沙星注射液中盐酸环丙沙星含量的高效液相色谱检测方法。色谱柱为Gemini C18110A( 250 mm×4.60 mm,5 m)，流动相为0.025 mol/L磷酸溶液(用三乙胺调pH至3.0±0.1)-乙腈(752

2、5)，检测波长277 nm，流速1.0 mL/min，进样量10 L。在12.5 g/mL200 g/mL浓度范围内，盐酸环丙沙星的峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.999 4(n5)，平均回收率为99.58%。该方法简便、准确、灵敏，可用于测定盐酸环丙沙星注射液的含量。关键词：盐酸环丙沙星；注射液；高效液相色谱法；含量测定盐酸环丙沙星属于氟喹诺酮类广谱抗菌药，在兽医临床上，用于敏感细菌和支原体所致家畜、禽类及小动物的各种感染性疾病。此药具有抗菌谱广、抗菌活性强、吸收良好、体内分布广泛、抗菌作用独特、无交叉耐药性等特点1-2，医学上已广泛应用3-5。盐酸环丙沙星注射液在兽药质量标准2

3、003年版已有收载，该标准采用紫外分光光度法测定含量6。此法专属性不强，准确性不及高效液相色谱法，作为生产过程中中间产品的质量控制方法较适合。笔者采用高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星注射液的含量6-10，经与紫外分光光度法11比较12-13，结果基本一致，而且准确性高，专属性和可信度强。1材料与方法1.1材料Agilent 1200型高效液相色谱仪，CP225D型电子天平，UV-2450型紫外可见分光光度计，pHS-3C型精密pH计。盐酸环丙沙星对照品，批号为H010105，含量100.0%，中国兽医药品监察所生产；盐酸环丙沙星(原料)，批号为HB070945，浙江新华制药有限公司生产；盐酸环丙

4、沙星注射液，规格为10 mL含0.2 g，批号为20080601,20080602,20080603，广东大华农动物保健品股份有限公司生产；磷酸、盐酸、三乙胺为分析纯；乙腈为色谱纯。1.2方法1.2.1试剂的配备1.2.1.1盐酸溶液(0.1 mol/L)取盐酸9 mL，加水至1 000 mL，摇匀，备用。1.2.1.2磷酸溶液(0.025 mol/L)取磷酸1.71 mL，加水至1 000 mL，摇匀，备用。1.2.2色谱条件色谱柱：填料Gemini 5 m C18110A，尺寸：250 mm×4.60 mm 5 micron；流动相：0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调pH至

5、3.0±0.1)-乙腈(7525)；检测波长277 nm；流速1.0 mL/min；进样量10 L。1.2.3绘制标准曲线取盐酸环丙沙星对照品0.012 5、0.025、0.05、0.1、0.2 g精密称量，分别置100 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；各精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成浓度分别为12.5、25、50、100、200 g/mL的标准溶液，参照高效液相色谱法14测定。1.2.4系统适用性精密量取盐酸环丙沙星注射液(批号20080601)5 mL，按1.2.3方法稀释并测定。1.2.5稳定性试验精密量取盐酸环丙沙星注射液(批号

6、20080601)5 mL，置100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，放置0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h，按1.2.3方法测定。1.2.6空白试验按处方比例称取辅料适量，制备不含盐酸环丙沙星的空白样品，按1.2.3方法测定。1.2.7回收试验取在105 干燥至恒重的盐酸环丙沙星对照品50、100、200 mg各3份，精密称量，分别置于100 mL容量瓶中，按处方量加入其他辅料，加溶剂溶解，摇匀，制成小样，分别精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；按1.2.3方法测定峰面积。1.

7、2.8精密度试验取在105 干燥至恒重的盐酸环丙沙星原料药(批号HB070945)3份，各约100 mg，精密称量，分别置100 mL容量瓶中，按处方量加入其他辅料，加溶剂溶解，摇匀，制成3份注射液小样，分别精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为测定盐酸环丙沙星注射液精密度试验用溶液，另取盐酸环丙沙星对照品适量，按1.2.3项下方法测定，按外标法以峰面积计算。1.2.9高效液相色谱法与紫外分光光度法测定盐酸环丙沙星注射液含量的比较。1.2.9.1高效液相色谱法取批号为20080601、20080602、20080603的盐酸环丙沙星注射液，精密量取5 mL，按1

8、.2.3方法稀释并测定，记录色谱图。另取盐酸环丙沙星对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算含量。1.2.9.2紫外分光光度法参照文献6，取批号20080601,20080602,20080603的盐酸环丙沙星注射液，精密量取5 mL，分别置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，按照紫外分光光度法，在277 nm波长处测定吸光度，按环丙沙星(C17H18FN3O3)的吸收系数为1 266.1计算出含量。1.2.9.3紫外分光光度法参照文献13，取批号20080601,2008

9、0602,20080603的盐酸环丙沙星注射液，精密量取5 mL，分别置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。另取盐酸环丙沙星对照品适量，照紫外分光光度法，在277 nm波长处测定吸光度，并计算出含量13。2结果2.1标准曲线结果见表1。以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标进行线性回归，得到标准曲线方程：A63.765C134.15(r0.999 4，n5，C的单位为g/mL)。结果表明，在12.5 g/mL200 g/mL的浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系(图1

10、)。     表1标准溶液的峰面积  Table 1The peak-area of standard solution 浓度/(g·mL1) Concentration12.52550100200峰面积AUC844.11 683.03 363.26 692.112 797.4图1盐酸环丙沙星标准曲线Fig.1The standard curve ofciprofloxacin hydrochloride2.2系统适用性结果连续进样6次，所得峰面积的RSD为0.14%。按盐酸环丙沙星峰计算，理论板数为10 922，保留时间约为3.5

11、min。2.3稳定性试验结果从表2可见，盐酸环丙沙星注射液在2.5 h内峰面积基本保持不变，稳定性良好。表2盐酸环丙沙星注射液的稳定性试验结果Table 2The stabilitytest of ciprofloxacin hydrochloride injection时间/minTime00.51.01.52.02.5峰面积AUC6 143.46 142.46 156.66 163.26 159.96 149.92.4空白试验结果 结果无吸收，不干扰测定，符合要求。2.5回收试验结果按下式计算含量，并求出回收率，平均回收率为99.58%，RSD为0.38%，结果见表3。式中A为测得的峰面积

12、，N为稀释倍数，V为量取样品的体积(mL)，P为样品规格(10 mL0.2 g)；134.15为标准曲线的截距，15.68×103为标准曲线斜率的倒数。含量%=15.68×10-3×（A-134.15）×NV×P表3盐酸环丙沙星注射液回收率试验结果Table 3The recovery rate of ciprofloxacin hydrochloride injection序号 No.称样量/mg Added quantity测得量/mg Determined quantity回收率/% Recovery rate平均回收率/% Averag

13、erecovery rate变异系数/% RSD150.0349.6199.16250.0649.9899.84350.0249.6299.204100.08100.0499.965100.0199.5399.5299.580.386100.05100.10100.057200.07198.7599.348200.11200.0199.959200.05198.3999.17结果表明，盐酸环丙沙星注射液回收率试验符合要求。 2.6精密度试验结果盐酸环丙沙星注射液含量的RSD为0.18%，结果见表4。结果表明，本法具有良好的精密度。2.7几种测定方法结果的比较结果见表5。表4精密度试验结果Tab

14、le 4Precision test of ciprofloxacin hydrochloride injection测定次数Test times123456含量/%Content100.15100.2199.8799.7399.94100.01变异系数RSD/%0.18表5测得盐酸环丙沙星注射液中盐酸环丙沙星的含量Table 5Determination of ciprofloxacin hydrochloride content ininjection批号 Lot number含量/%Content高效液相色谱法HPLC紫外分光光度法1UV1紫外分光光度法2UV22008060199.9599.9299.8920080602100.1299.9699.942008060399.9199.98100.05结果表明，高效液相色谱法与紫