反相高效液相色谱法测定冠心_号汤剂中芍药甙和阿魏酸的含量

1、基金项目:国家自然科学基金资助项目(N o.39870932,30070912;高等学校骨干教师计划资助作者简介:王骊丽,女,1960年12月生;高级工程师;研究方向:药物分析及中药临床药理研究反相高效液相色谱法测定冠心号汤剂中芍药甙和阿魏酸的含量王骊丽黄熙任平张莉张航向(1.第四军医大学西京医院,陕西西安710032摘要:采用反相高效液相色谱(RP -HP LC 法,用外标法进行了阿魏酸、芍药甙的定性、定量分析,并测定冠心号汤剂中芍药甙、阿魏酸含量。流动相为甲醇水醋酸=34.8565.00.15,大连依利特ODS 色谱柱C 18(150mm 4.6mm ,5m ,实验结果表明,此方法分离、重

2、现性好,具有快速、价廉、毒性小的优点。关键词:反相高效液相色谱法;芍药甙;阿魏酸;冠心号中图分类号:R286.0;R284.1文献标识码:A 文章编号:100420668(20010120051202川芎、赤芍在临床上被广泛应用1。赤芍的主要化学成分为芍药甙(Paeoniflorin ,阿魏酸(Ferulic acid 川芎的主要成分之一。关于高效液相色谱测定中成药中芍药甙或阿魏酸含量的方法报道很多2,也有文献报道了汤剂不同煎煮条件对含量的影响3,而同时测定方剂汤液中芍药甙和阿魏酸的方法还未见报道。我们采用反相高效液相色谱(RP 2HP LC 法,以甲醇2水2醋酸作为流动相,通过对制剂的定性和

3、定量分析,同时测定了验方冠心号4(由丹参、川芎、赤芍、红花、降香按21111配比组成的汤剂不同煎煮时间对芍药甙、阿魏酸含量的影响,使其可以作为方剂研究的质量控制标准和方剂治疗药物监测5,并在进一步改进的基础上用于方剂治疗药物监测的体内药物动力学研究6,完善在临床中的应用。现将结果报告如下。1材料WatersHP LC 仪,600泵,996二极管阵列检测器,7725手动进样器,M32色谱工作站,Digital 计算机;TG L -16台式离心机,振荡器,0.22m 混合纤维素脂微孔滤膜(上海市新亚净化器件厂。芍药甙、阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号0736-9608,甲醇、醋酸等均为分

4、析纯(购自西安化学试剂厂。冠心号汤:中药材丹参、赤芍、红花、降香(购自于陕西医药大厦,川芎(购自于四川灌县自制饮片,按照21111的比例配伍。采用临床的煎煮方法,共分A 、B 、C 、D4组即煎煮时间各为15min 、30min 、45min 、60min 。将配伍比例的4等份分别第一次加8倍水浸泡30min ,在同样条件下,火上至沸腾后用文火煎煮15min 、30min 、45min 、60min ,3层医用纱布过滤,收集药液;再加6倍水同前操作,两次药液合并作为原药液使用。用冠心号总重量除以所得药液的体积,其浓度分别为A :0.106g/m L (总重量为60g ,药液体积396m L ;

5、依次类推得B :0.1515g/m L ;C :0.2419g/m L ;D :0.3061g/m L 。2方法与结果211色谱条件大连依利特ODS C 18色谱柱(150mm 4.6mm ,5m ;流动相:甲醇水醋酸=34.8565.00.15,流速:F =1.0m L/min ,检测波长:芍药甙=230nm ,阿魏酸=320nm ;室温,进样量为20L 。在此色谱条件下,分离很好(见图1,并且本实验的检测波长范围是220nm 390nm ,芍药甙的检测波长为230nm ,阿魏酸为320nm ,冠心号中所含芍药甙和阿魏酸与对照品光谱行为一致(见图2。212煎液的预处理精确的吸取煎煮好的A 、

6、B 、C 、D 4组冠心号汤剂的原药液10L ,加入于5m L 容量瓶中用水稀释至刻度线,其浓度分别为A :2.1210-4g/m L ;B :3.0310-4g/m L ;C :4.8410-4g/m L ;D :6.1210-4g/m L 。混匀、以9000r/min 离心,取上清液用0.22m 混合纤维素脂微孔滤膜过滤,20L 进样。1.芍药甙和阿魏酸对照品色谱图;2.冠心号中阿魏酸;3.冠心号中芍药甙图1芍药甙和阿魏酸的色谱图152001年3月第24卷第1期成都中医药大学学报Mar.2001,V ol.24,N o.1Journal of Chengdu University of T

7、 C M1.冠心号中阿魏酸(=230nm;2.冠心号中芍药甙(=320nm图2芍药甙和阿魏酸的光谱图213结果21311标准曲线及线性范围法的考察精密称取芍药甙、阿魏酸对照品适量,用甲醇水=82配制成浓度为0.195mg/m L溶液,分别各取芍药甙、阿魏酸对照品1、10、30、90、120、240、360、720、1440L,用甲醇定容于5m L的容量瓶中(绝对进样量范围为39ng-56610ng之间,混匀,取20L进样。以对照品峰面积为纵坐标,进样量(g为横坐标进行回归,芍药甙、阿魏酸回归方程结果见表1。表1标准曲线各项参数的结果样品名称线性范围(g标准曲线方程线性系数(r检测极限(ng芍药

8、甙0.039-56.610Y=15780X+1083.30.99512.60阿魏酸0.039-56.610Y=77612X-430730.9976 1.9521312精密度和回收率日内精密度考察,将样品溶液芍药甙、阿魏酸在0.039 56.610g/m L浓度范围内,20L进样(n=5,计算日内变异系数(见表2;日间精密度考察,取同一批样品,按不同天数(n=5测定表明,日间变异系数(见表2。测定结果本法精密度较好。以标准曲线求得理论Y 值,实际所测芍药甙、阿魏酸的面积测定值,求得其平均相对回收率(见表3。表2精密度和回收率结果样品名称日内精密度CV%日间精密度CV%回收率%芍药甙 3.0 3.

9、499.41.2阿魏酸 5.2 4.299.54.1表3不同煎煮时间冠心号汤剂中芍药甙、阿魏酸含量测定煎煮时间冠心号汤液量芍药甙峰面积(min阿魏酸峰面积(g/m L含量(g/g.m L-1芍药甙阿魏酸15 2.1210-4554526770.7500.361 30 3.0310-41322216940.3940.525 45 4.8410-42579013250.3090.846 60 6.1210-43246010830.3080.1083讨论3.1本方法从二维、三维色谱图观察,与芍药甙、阿魏酸标准品在相同条件下对照,保留时间一致,分别为4.874、6.986 (见图1;准确对其吸收峰定性

10、分析,标准品的最大吸收峰为230.1nm、320.1nm,样品的最大吸收峰在320.1nm、392.0 nm(见图1。采用外标法建立了制剂中阿魏酸、芍药甙测定的RP2HP LC法。本方法能快速、准确地同时测定芍药甙、阿魏酸,在进行8min时间范围内完成测定,且保留时间无干扰。3.2芍药甙为水溶性成分,样品稀释受溶剂的极性有所影响,即所用的稀释溶剂不同,测定的结果不同;并且无论是对照品还是样品随时间的变化,其稳定性变化不大。但冠心号煎液的煎煮时间对各个组分含量有所影响,采用水为稀释溶剂的测定结果显示,随着不同煎煮时间的延长,从色谱图上观察峰面积及计算结果,芍药甙随着煎煮时间的延长而含量降低,15

11、min含量最高;阿魏酸在45min 含量较高,两者都再延长时间则变化不大。在调整流动相的配比中发现,流动相中酸度影响着对阿魏酸的分离。3.3陈可冀教授的验方冠心号1由丹参、川芎、赤芍、红花、降香按21111配比组成,其在临床的疗效已被广泛关注。研究冠心号与血瘀证、冠心病、药动学及药物疗效的相关性,都将阐明冠心号对人体的作用规律5,6。对冠心号的复方的初步研究将可能为冠心病血瘀证药动学的研究打下良好的基础。因此我们这个研究结果将作进一步完善的就可以广泛用于测定动物、人注射制剂或口服含有芍药甙、阿魏酸的中成药,进行中药复方体内药物监测。参考文献1刘超,王静1赤芍总甙活血化瘀作用的研究J.中药材,

12、2000,23(9:5572赵陆华1高效液相色谱法分析中药成分手册M1北京:中国医药科技出版社,199413李淑芝,郭亚健1不同煎煮条件对芍药甙煎出量的影响J1中成药,1999,(3:1434陈可冀,史载祥1实用血瘀证学M1北京:人民卫生出版社,199912015陈可冀1迈向21世纪的中西医结合M1北京:中国医药科技出版社,199112076黄熙,任平1防治高血压病及冠心病的难点与突破口2方剂的治疗药物监测J1中国中西医结合杂志,1997,17(9:515(收稿日期:200020522525成都中医药大学学报2001年第24卷300C ases of Clinical Observation

13、of H ysteromyoma T reated with ”Gong 2liu 2qing ”C apsuleYANG Jia 2lin ,YAN Xiao 2ping et al (杨家林,等(A ffiliated H ospital ,Chengdu University of TC M ,Chengdu ,610072,China ABSTRACT :Objective :T o obserced the curative effect of ”Gong 2liu 2qing ”Capsule to hysteromy oma.Methods :300cases of hyster

14、omy oma were treated with ”Gong 2liu 2qing ”Capsule and other 120cases were treated with ”Gui 2zhi 2fu 2ning ”Capsule ,and the curative effects of tw o groups were compared.Results :the overall effective rates of treated group and control group were 47.67%and 22.50%,and the excellent effective rates

15、 of the tw o groups were 86.67%and 57.50%respectively (P 0.05.Conclusion :”Gong 2liu 2qing ”Capsule had a g ood ef 2fect for hysteromy oma.KE Y WOR DS :”Gong 2liu 2qing ”Capsule ;hysteromy oma(Original article on page 3E ffect of Sodium Ferulate to Left V entricular Diastolic Function of Diabetic Me

16、llitusLI Xiao 2miao ,QIAO Xue 2feng ,LI Yuan ,et al (李晓苗,等(X ijing H ospital ,F ourth Military Medical University ,X i an ,710032,China ABSTRACT :Objective :T o study the evaluation of s odium Ferulate in the tratment of left ventricular diastolic function in dvabets mellitus.Methods :left ventricul

17、ar diastolic function be measured by echocardiography with before treatment &after treatment.Results :C O ,VE andE DT of treatment at 1/2m onth were m ore than that of before treatment ;VA and E AT of treatment at 1/2m onth were lower than that of before treatment.Conclusion :S odium Ferulate can im

18、prove left ventricular diastolic in diabetes mellitus.KE Y WOR DS :S odium ferulate ;diabetes mellitus ;left ventricular diastolic(Original article on page 21Experimental Study on Changes of E nteroendocrine Cells of Somatostain ,Motilin and Cholecystokinin in Splenic Asthenia R at ModelREN Ping ,LI

19、U F ang ,HUANG Xi ,et al (任平,等(X ijing H ospital ,F ourth Military Medical University ,X i an ,710032,China ABSTRACT :Objective :T o investigate the relationship of ”dys function of the spleen in transport ”with gastrointestinal enterocrine cells.Methods :The short -term and long -term rat m odels o

20、f spleen -asthenia syndrome (RMS A I and RMS A II group were treated by reserpine for seven days and fourteen days respectively.S i -jun -zi Decoction was used as a remedy to verify the avilability of the m odel.Immunohisto 2chemical S ABC method was employed to stain D cell of gastric antrum ,I cel

21、l and M o cell of duodenum.The variation of appearance and quan 2tity of endocrine cells were observed by light microscope.Results :In the rat m odels of seven days ,as compared with controls ,the number of D cell increased (P 0.01,the number of M o cell reduced (P 0.01,the percentage of strong posi

22、tive D cell reduced (P 0.01,the percentage of strong positive I cell and M o cell increased (P 0.01,P 0.05.In the rat m odels of fourteen days ,as compared with con 2trols ,the number of the number of cell increased (P 0.01,the percentage of strong positive D cell reduced (P 0.01,the percentage of s

23、trong positive D cell and cell increased (P 0.01,the percentage of strong positive M o cell reduced (P 0.01.Conclusion :The synthetic and secretory function of the enteroendocrinr cells varyed with the development of spleen -asthenia syndrome.KE Y WOR DS :S pleen -asthenia syndrome ;S omatostain ;M otilin ;Cholecystokinin ;enteroendocrinr cell (Origi