大肠癌组织微血管密度和血管内皮生长因子表达的研究

1、    大肠癌组织微血管密度和血管内皮生长因子表达的研究        【摘要】目的研究大肠癌组织的微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达及其与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组织化学链酶亲和素-生物素-酶复合物(SABC)法对36例手术切除的大肠癌标本的癌灶中心、癌旁、切缘进行血管标记和染色。结果癌灶中心MVD计数、VEGF表达分别为97.20±16.80、2.60±0.70，极显著高于癌旁组织74.60±13.60、1.35&#

2、177;0.95和切缘组织67.20±12.60、0.92±0.90(P0.01)；淋巴结转移组MVD计数、VEGF表达分别为96.60±17.90、2.40±0.72极显著高于无淋巴结转移组72.05±13.60、1.30±0.90(P0.01)。 结论大肠癌癌灶中心MVD、VEGF呈高表达，MVD、VEGF表达高低可能成为判断大肠癌淋巴结转移、预后的指标。【关键词】微血管密度；血管内皮生长因子；大肠；癌 Study on the microvessel density and expression of vascular endo

3、thelial growth factor in human colerectal cancerGAO Peng*, WU Aiguo, WANG Yu, et al.*Department of General Surgery, No. 177th Hospital of PLA, Guangzhou 510317, China【Abstract】 Objective To study the relationship between microvessel density (MVD) and expression of vascular endothelial growth factor

4、(VEGF) in colorectal cancer tissues and lymphatic node metastasis. Methods Using immunohistochemistry SABC method the vessels at the cancer center, proximal cancer lateral and proximal incisal margin in 36 samples cut from the patients with colorectal cancer were marked and stained. Results The MVD

5、count and VEGF expression at the cancer center 97.20±16.80, 2.60±0.70 were significantly higher than at proximal cancer lateral 74.60±13.60, 1.35±0.95 and proximal incisal margin in 67.20±12.60, 0.92±0.90 (P0.01), and in lymphatic metastatic group 96.60±17.90, 2.40

6、±0.72 were obviously higher than in non-lymphatic metastatic group 72.05±13.60, 1.30±0.90 (P0.01). Conclusions The MVD and VEGF expression were higher at the center of colorectal cancer. MVD and VEGF might be used to evaluate lymphatic metastasis and prognosis of colorectal cancer.【Ke

7、y words】 Microvessel density; Vascular endothelial growth factor; Intestine, large; Carcinoma     为了探讨微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达与肿瘤浸润、转移的相关性，我们对36例大肠癌癌灶中心粘膜、近端癌旁粘膜、近端切缘粘膜的MVD和VEGF的表达进行研究，现将结果报道如下。 材料和方法1.材料：1998年8月1999年5月未经抗肿瘤治疗的手术切除并经病理诊断证实大肠癌标本36例，其中男26例，女10例；年龄2674岁，平均年龄52.5岁

8、。Dukes分期：A期7例、B期12例、C期13例、D期4例。36例中，发生淋巴结转移者17例，无淋巴结转移者19例。2.方法：(1)标本的收集和处理：术中分别取癌灶中心、近端癌旁和近端切缘粘膜0.5cm×0.5cm，标本均经福马林固定，常规石蜡包埋，4m厚连续切片。(2)试剂：鼠抗人因子、链酶亲和素-生物素-酶复合物(SABC)试剂盒、VEGF免疫组织化学试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。采用新一代SABC法，选用即用型试剂。阳性对照：为已知的大肠癌阳性切片，阴性对照用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。(3)步骤：用防脱片剂多聚赖氨酸涂载玻片60烤箱3h，石蜡切片常规脱蜡至水，

9、体积分数为3%H2O2灭活内源性酶10min，微波修复抗原后，依次滴加抗原修复液室温10min，滴加正常山羊血清封闭液室温20min，滴加适当的一抗(小鼠IgG)2min，滴加生物素化山羊抗小鼠IgG 20min，滴加SABC 20min，上述步骤均以0.01mol/L PBS振洗3次，2min/次，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，常规脱水、透明、封片。3.MVD和VEGF表达判断标准：MVD按照Weidner等1的评判标准，计算肿瘤内着色的毛细血管和微小血管，凡呈现棕色单个内皮细胞或内皮细胞群者均作为1个血管计数，但肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径的血管不计数。计数方法为，每张染

10、色切片选择3个血管最多的癌间质区，在200倍视野下进行血管计数，每例标本分别计数5个视野，取其平均值。VEGF以肿瘤细胞及其附近的血管内皮细胞浆出现黄色的为阳性表达，按其染色强度进行记分。4.统计学方法：数据以均数±标准差(<"30701 (84 字节)" src="/med/cano/201003/20100322173109313" 11 15>±s)表示。应用SPSS统计软件进行处理。结果1.3种不同部位粘膜MVD和VEGF表达：见表1。表1大肠癌标本不同部位的MVD和VEGF表达(<"30701 (

11、84 字节)" src="/med/cano/201003/20100322173109313" 11 15>±s)部位例数MVD计数VEGF表达强度癌灶中心3697.20±16.80*2.60±0.70近端癌旁3674.60±13.60#1.35±0.95近端切缘3667.20±12.600.92±0.90     注：癌灶中心与近端癌旁、近端切缘计数比较，*P0.01；近端癌旁与近端切缘计数比较，#P0.01；癌灶中心与近端癌旁、近端切缘表达比较

12、，P0.01；近端癌旁与近端切缘表达比较，P0.01 2.Dukes分期的MVD和VEGF表达：A、B、C、D期MVD和VEGF分别为73.70±12.60、76.60±15.10、90.50±18.80、92.50±16.70和1.26±0.86、1.40±0.84、2.48±0.76、2.36±0.60。各组两两比较差异均无显著性(P0.05)。3.MVD和VEGF表达与淋巴结转移的关系：淋巴结转移组、非转移组MVD计数和VEGF表达强度分别为 96.60±17.90 、72.05±13.6

13、0 和2.40±0.72、1.30±0.90。两组比较差异均有极显著性(P0.01)。讨论近年来，有关肿瘤组织内微血管数量与肿瘤发生淋巴结转移及预后的关系研究表明，微血管与肿瘤的生长、转移、生存期等关系密切。肿瘤血管是肿瘤生长和转移的形态学基础，它不仅向肿瘤提供充足的营养，同时还不断向宿主输注肿瘤细胞，促进肿瘤的恶性生长和转移，影响患者的预后2。我们采用Weidner等1的标准进行血管计数，结果表明大肠癌癌灶中心的MVD极显著高于近端癌旁、近端切缘(P0.01)。自大肠癌组织-近端癌旁粘膜-近端切缘粘膜，MVD计数存在梯度减少改变。本实验结果还显示，转移组的MVD极显著高于

14、非转移组，虽然MVD和VEGF表达与Dukes分期差异无显著性，但C、D期两者表达仍呈增高趋势，提示MVD表达增高与癌细胞淋巴转移相关。VEGF是一种糖蛋白二聚体，其相对分子质量为(3.44.5)×104。它能够增加血管通透性，导致血浆蛋白、纤维蛋白质及液体经血管外渗，引起细胞外基质改变。同时能促进血管和新基质形成，从而为肿瘤生长、侵袭和转移提供基础2。有作者报道，结肠癌伴肝转移的VEGF蛋白表达比不转移的要高3。本组中结肠癌淋巴结转移VEGF表达极显著高于非淋巴结转移(P0.01)，提示VEGF有可能成为判断肿瘤恶性程度、预后及预测转移的指标。作者单位：高鹏(510317广州，解放军第177医院普外科)吴爱国(第一军医大学附属珠江医院普外科)王宇(第一军医大学附属珠江医院普外科)杨继震(第一军医大学附属珠江医院普外科)参考文献1，Weidner N, Semple JP, Welch WR, et al. Tumor angiogenesis and meiastasis correlation in invasive breast carcinoma. N Engl J I Med, 1991,324:1-325.2，武利存，朱芳.微血管密度对乳腺癌预后的意义