恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备及质量评价_图文

1、，（）：李军，等中国兽药杂志恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备及质量评价李军：，邓艳芸，黄庭龙，任芬（教育部热带生物资源重点实验室（海南大学），海口；海南大学制药工程系。海口）【收稿日期】一一【文献标识码】【文章编号】一（）一一【中图分类号】【摘要】研制恩诺沙星肺靶向明胶微球（）并对其进行质量评价。采用乳化一化学交联法制备恩诺沙星肺靶向明胶微球，油镜下观察微球粒径大小及形态，并用显微照相机（）拍照做记录。通过紫外分光光度法检测微球中恩诺沙星（）的含量，进而计算得出其载药量和包封率，并通过溶出度测定法探讨其体外释放规律。制成的恩诺沙星肺靶向明胶微球为淡黄色粉末，油镜下大小较均匀，形态圆整、分散性较好，

2、其内可见被包裹的黄色粉末，平均直径约斗。就粒径分布而言，一炉的微球占，载药量为，包封率为，在的缓冲液中的释药符合缓释特征，。约为，比单纯的延长个多小时。体外释放实验显示前时释药量约，至第之间释药量达，之后逐步释放，至时药物释放累积量占总药量的。结果表明，制备出的恩诺沙星明胶微球符合肺靶向给药系统的要求，具有较好的缓释性和肺靶向性。关键词】恩诺沙星；明胶微球；肺靶向给药系统锄嘣伽吼恤恤。”，舳一”，孑，（匆面伽矿却玉口弑础耐忍鲫（岛西坊渤毋），咖矿叫加，觑溉；叼柳咖洲矿雕册跏叫幻以如跏嘶，妙，眈洳“；踟）：试锄啪嘴唱啪（）舢，唧，锄）鹪蛳鹪眦锄鹪“一锄“阳锄鹊鹅犯珀衍出缸印璐锄幽¨肌弛

3、瑚西¨酗粕鹊讥扼（妇）鹤鹅玛鹅鹊塔，硪出，岫一基金项目：海南省自然基金项目（项目号）作者简介：李军（年一），药学博士，副教授，主要从事药物新剂型新技术的研究工作。一毗：衄中国兽药杂志，（）：李军，等讥秽如：；作为一种新型、安全、高效的药物制剂转运系统，靶向给药系统（或称靶向制剂，）诞生于世纪年代，它是药物传输系统（简称）理念的具体体现。该制剂能将药物定向运送到靶器官、靶组织或靶细胞，而其他正常部位则几乎不受影响。无论是通过局部定向传递还是利用体循环运送至全身各处，临床用药均需达到四个条件：（）没有明显毒副作用；（）在最小剂量范围发挥药效；（）易被患者接受；（）安全、廉价、有效。肺靶向

4、明胶微球是骨架基质型的一种被动靶向制剂。明胶是从动物胶中提炼的一种胶原蛋白，不仅生物相容性好，而且方便易得、价格低廉，在体内又相对易降解，没有明显毒副作用，所以很适合用作药物治疗的靶向载体。同时，明胶骨架的溶蚀作用又可以起到一定的缓释作用，具有给药次数少，峰谷血药浓度波动小，刺激反应轻，疗效持久安全等特点。药物制成微球后，由于微球具有易被肺毛细血管床机械滤阻的性能，因而将肺靶向给药系统与微球技术结合制成的新型药物制剂进入机体后，药物从微球中释放后浓集于靶区啼部，达到提高疗效、降低不良反应的目的。明胶微球具有无免疫原性、可生物降解、靶向性、缓释性等特点，近年来得到广泛关注。将三种技术加以结合，一

5、种经济、安全、有效、方便的药物制剂就会产生。近年来的各项研究已经表明，这种技术将对我国畜禽疫病的控制起到巨大的推动作用，也正是基于以上技术的价值和社会的需要，本试验尝试研究恩诺沙星的一种新型制剂恩诺沙星肺靶向明胶微球，以确定最佳工艺，为社会创造价值。材料与仪器主要试剂型明胶（湖南湘中化学试剂开发中心）；盐酸（，广州市东红化工厂）；司班（一，天津市福晨化学试剂厂）；恩诺沙星（纯度，东北兽药厂）；液体石蜡（，天津市福晨化学试剂厂）；异丙醇（，天津市大茂化学试剂厂）；酸性明胶（等电点为，北京化学试剂公司）；甲醛溶液（，汕头市西陇化工厂有限公司）。主要仪器电子天平（一型，日本岛津）；计（雷磁一，上海精

6、密科学仪器有限公司）；电热恒温水温水浴锅（一一型，天津泰斯特有限公司）；显微镜（一型，南京江南光电集团股份有限公司）；恒温加热磁力搅拌器（一型，巩义市予华仪器有限公司）；匀浆机（一型可调高速匀浆机，常州澳华仪器有限公司）；激光微粒分析仪（，天津天河医疗仪器有限公司）；紫外可见光分光光度计（一型，尤尼柯上海仪器有限公司）；离心机（，德国）；制冰机（，）；超纯水仪（一，吐）；显微镜（）；显微照相机（）。方法与结果空白明胶微球（，）制备工艺筛选本研究采用乳化一化学交联法制备空白明胶微球。由于微球粒径需控制在一定的范围内，故需通过正交试验对各项实验参数进行优化筛选，以得到更加符合要求的微粒。参照相关文

7、献【并根据单因素考察结果，选定对制备明胶微球影响较大的个因素：明胶浓度、搅拌速度、乳化剂用量及油水相比例，每个因素选定个水平，按（）正交设计表（表）设置正交试验步骤，筛选出最佳制备工艺条件。现将正交试验设计如下。：明胶浓度设定为（，）；：匀浆搅拌速度（）；：乳化剂用量（）；：油水相比例（：）。表正交试验设计方案通过型激光微粒分析仪对微球粒径进行测定后，比较、改进最终确定最佳工艺处方。按最终处方制得的粒径分布如图所示。恩诺沙星含量测定标准曲线和回归方程精，（）：李军，等中国兽药杂志密称定恩诺沙星原料药药粉，溶解于稀溶液中，继续稀释并定容于容量瓶中，用超纯水稀释一系列倍数，得到系列梯度浓度的恩诺沙

8、星标准溶液，再用紫外可见光分光光度仪在波长下测其吸光度值。根据测定结果，绘制标准曲线并拟合回归方程，结果如图所示。一圳。；唔冲蝴唿霉徽球粒径范围岬、图空白明胶微粒（）粒径分布图司图恩诺沙星含量测定标准曲线与回归方程最后制备恩诺沙星饱和溶液，稀释一定倍数后，测定其拢。，通过计算可以求得恩诺沙星饱和溶液的浓度。恩诺沙星明胶微球（，）的制备工艺仍然采用 乳化一化学交联法制备恩诺沙星明胶微球，与的区别主要是在明胶的水溶液中加入一定的混匀制成饱和溶液作为分散相。具体步骤为：用电子天平称取适量型明胶于小烧杯中，在一水浴条件下加人超纯水，玻璃棒搅拌下溶解，制得一定浓度的明胶溶液，再加入恩诺沙星药粉，并用溶液

9、调节至一定，继续加入恩诺沙星原料药药粉，直到制成恩诺沙星饱和溶液。再取处方量的恩诺沙星饱和溶液和一，在玻璃棒的搅拌下，加到盛有处方量的液体石蜡的小烧杯中，置水浴恒温至，并继续搅拌制成初乳。在恒温条件下，用高速匀浆机以一定的转速进行高速间歇搅拌，并根据表象适时取样，用光学显微镜高倍镜进行镜检。待镜检粒径合格后，停止匀浆搅拌，在磁力搅拌下于冰浴中降温至后，在其他条件不变的情况下继续加入处方量的化学交联剂交联一定时问。将交联后的载药样品用离心机在一定条件下以一定的离心率高速离心左右，弃去上清液，即得恩诺沙星明胶微球样品。再将其在异丙醇的淋洗下进行抽滤，烘干即得恩诺沙星明胶微球。恩诺沙星明胶微球的质量

10、评价恩诺沙星明胶微球的粒径分布取的液体样品用型激光微粒分析仪分析，结果如图所示。昌，却髯咚一卧惦徽球粒径岬图恩诺沙星明胶微球（）粒径分布图通过计算可以得出，的粒径分布在斗范围内的占，平均粒径（）为斗。，。恩诺沙星明胶微球的外观性状总体来看，大小比较均匀，形态圆整、分散性较好，用显微镜油镜（×）照相的结果如图所示。图显微镜油镜（×）下的照片恩诺沙星明胶微球载药量与包封率的测定根据的标准曲线、回归方程并结合以下公式计算，可以得到的载药量为，包封率为（）。嚣怒黧裟徽。每液中徽球个敷中国兽药杂志，（）：李军，等载药量塑鬻×包封率塑堑紫×恩诺沙星明胶微球体外释药试

11、验精密称定微球样品，装入透析袋中，置入盛有（为的磷酸盐缓冲液）的玻璃烧杯中，接着在（±）的温度下，以（±）的速度进行磁力搅拌，分别于、取样备用，同时补入。之后用紫外可见光分光光度仪对各不同时段所取的样品测定撒。，根据的含量测定回归方程（图），可以计算出浓度、累积释药量和累积释药百分率。为了比较，更明显地突出的缓释效果，同时另取的原料药（作参比试验）于另一透析袋中，同样置于盛有的玻璃烧杯中，同样在（±）、以（±）进行磁力搅拌，分别于、各取样品待用，同时补入。同样用紫外可见光分光光度仪对各不同时段所取的样品测定。，计算出浓度、累积释药量和累积释药百分率。恩诺

12、沙星和恩诺沙星明胶微球体外释放曲线如图所示。通过在体外释放曲线上的对比，能更好地展示出的缓释优势。对比二者的体外释药曲线：的释放药量为，释放药量为；从体外释放曲线（图）计算得出的。以约为，的约为；具有明显的缓释效果，其在最初内有突释效应，之后慢慢转为缓释过程。量耄枷药量百坌三取样时阊（）息诺沙星明胶徽球（陬赆）恩谱沙星（腿）图和体外释放曲线讨论。动物体内的网状内皮系统（，包括肝、脾、肺和骨髓等组织）具有大量的吞噬细胞，能够将一定大小的微粒作为异物而摄取，较大的微粒则由于不能滤过毛细血管床而被机械截留于某些部位。其中斗的微粒可以被动靶向到以肝脏和脾脏为主的，“的微粒可以被动靶向到肺部组织，而小于

13、的微粒则可以靶向到骨髓。所以，微球给药系统的不同靶向性可通过控制颗粒的大小来实现。微球的粒径受搅拌速度、水油相体积比及各自粘度、表面张力大小等的影响。可以固定大部分条件，调节个别条件就可以快捷达到肺靶向粒径的要求，这对微球的载药属性没有影响。微球制剂的特性有靶向性（主要是被动靶向作用）和缓释性。在该试验中制备的恩诺沙星明胶微球的平均粒径为斗，其中粒径大小在斗范围内的占微球总数的，基本符合肺靶向给药系统的要求；载药量为，包封率为，药物利用率基本合格；药物的体外释药试验表明有较明显的缓释作用。至于微球的肺靶向性及相关参数需在动物体内做进一步研究。近年来，兽医药剂学已经由普通的注射剂、片剂、散剂、预

14、混剂等向缓释、控释、靶向制剂发展。肺靶向微球是药剂学研究的一个热点，在兽医药剂学亦有广阔的应用前景。参考文献：陆彬药物新剂型与新技术北京：人民卫生出版社，：，“一卿蝴，叩蛐，：沃德，考茨明胶的科学与工艺学北京：轻工业出版社。崔福德药剂学第版北京：人民卫生出版社，： 恩诺沙星肺靶向明胶微球的制备及质量评价作者：李军， 邓艳芸， 黄庭龙， 任芬， LI Jun， DENG Yan-yun， HUANG Ting-long， REN Fen作者单位：李军,LI Jun(教育部热带生物资源重点实验室,海南大学,海口570228， 邓艳芸,黄庭龙,任芬,DENG Yan-yun,HUANG Ting-l

15、ong,REN Fen(海南大学制药工程系,海口,570228刊名：中国兽药杂志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF VETERINARY DRUG年，卷(期：2008，42(12被引用次数：1次参考文献(4条1. 陆彬 药物新剂型与新技术 19982. B LU. J Q Zhang. H Yang Lung-targeting Microspheres of Carboplatin 20033. 沃德AG. 考茨A 明胶的科学与工艺学 19824. 崔福德 药剂学 2003相似文献(5条1.期刊论文 李锐. 周友中. 肖希龙. LI Rui. ZHOU You-zhong. XI

16、AO Xi-long 恩诺沙星肺靶向微球的制备 -中国兽医学报2008,28(1以天然可生物降解的明胶为载体材料,液体石蜡为油相,Span80为乳化剂,采用正交试验优化空白明胶微球的乳化法制备工艺,并在此基础上制备了恩诺沙星明胶微球.结果显示,含药微球平均粒径为12.35 m,粒径730 m的微球占总数的92.3%,符合肺靶向的要求.恩诺沙星明胶微球载药量为20.67%、包封率为43.62%,动态透析法研究体外释放特性,符合Higuchi规律,释药ti/2比原药延长了约6倍,表明有明显的缓释功能.在37、相对湿度值(RH75%考察3月,几乎无变化.兔体内分布试验表明具有明显的肺靶向性,肺中药代

17、动力学行为符合三室开放模型.2.学位论文 周友中 恩诺沙星肺靶向微球在犬体内分布及药物动力学的研究 2006恩诺沙星(ENR是兽医专用的氟喹诺酮类药物，有广谱杀菌作用，临床上使用广泛。靶向微球可以提高药物的治疗效果，并能改变药物的药动学特征。本研究采用乳化冷凝法制备恩诺沙星明胶微球(ENR-GMS，并改进了微球的制备工艺，提高了载药量；并对微球的外观、粒径分布、含量、体外释药、稳定性等进行了研究。为了进一步研究微球制剂的肺靶向性，建立了在犬血清和各组织中药物浓度的检测方法，并以健康犬为实验动物，研究微球在其体内的分布和药物动力学。本试验改进了ENR-GMS的制备工艺，提高了载药量，用紫外分光光

18、度法测定微球中药物含量，ENR-GMS载药量为38.20、包封率为42.96。ENR-GMS平均粒径为11.71m，粒径在730m范围内的微球占总数的92.8。ENR-GMS体外释药与原药相比t1/2延长了约10倍，符合一级动力学规律，有明显的缓释功能。ENR-GMS稳定性试验结果表明试验期间所有样品的外观色泽、粒径及其分布、载药量等指标均未见明显的变化，稳定性较好。使用高效液相色谱荧光检测(HPLC-FLD血清和各组织中ENR和环丙沙星(CIP的浓度，ENR和CIP的标准曲线在101000ng·mL-1浓度范围内均呈良好线性关系。在30500ng·mL-1的添加范围内，血

19、清和各组织中样品回收率均大于70，变异系数较小，重现性好。在药物动力学研究中，分别给犬静脉注射ENR注射液和ENR-GMS混悬液后定时采样并测定，采用3P97药动学程序处理药-时数据，得出药-时曲线下面积和峰浓度。结果表明ENR-GMS在体内有良好的肺靶向性，肺相对血和其它脏器组织的靶向效率(t。均大于1，靶向效率增强1.396.06倍，并且显著地改变ENR的体内分布，ENR注射液、ENR-GMS混悬液在犬肺部的药动学过程分别符合二室开放模型和三室开放模型，肺内药物达峰时间和分布半衰期有所缩短，消除半衰期延长，肺内药量清除率降低了55.2。3.会议论文 周友中. 牛丽娟. 肖希龙 恩诺沙星肺靶

20、向微球在犬体内分布与药物动力学研究 2006使用高效液相色谱荧光检测(HPLC-FLD血清和组织中恩诺沙星(ENR和环丙沙星(CIP的浓度,ENR的标准曲线在101000 ng·mL-1范围内呈良好线性关系(r=0.9993,n=5.在30500ng·mL-1的添加范围内回收率均大于70,变异系数较小,重现性好.在药物动力学研究中,分别给犬静脉注射ENR注射液和微球(ER-GMS混悬液,采用3P97药动学程序处理药-时数据,得出药-时曲线下面积和峰浓度,结果表明恩诺沙星微球在体内有良好的肺靶向性,肺相对血和其它脏器组织的靶向效率(tc均大于1,靶向效率增加1.396.06倍,且微球显著地改变了ENR的体内分布,ENR注射液、微球混悬液在犬肺部的药动学过程分别符合二室开放性模型和三室开放性模型,肺内药物达峰时间和吸收半衰期有所缩短,消除半衰期延长,肺内药量(