不同寄主植物桑寄生总黄酮含量研究

1、不同寄主植物桑寄生总黄酮含量研究 作者：李永华 陈士林，卢栋，朱开昕，赵明惠，裴河欢，阮金兰【摘要】 目的考察不同寄主植物的桑寄生总黄酮含量。方法采用分光光度法测定寄生在16种不同寄主植物的桑寄生样品的总黄酮含量，并用正交实验的方法研究比较了不同提取条件对桑寄生总黄酮提取率的影响。结果不同寄主植物的桑寄生茎枝的总黄酮含量为4.107.82 mg/g,其中以桑树为寄主的人工种植的桑寄生茎枝的总黄酮含量为最高；桑寄生叶总黄酮含量为18.3332.08 mg/g,其中以夹竹桃为寄主的桑寄生叶的总黄酮含量最高。正交实验结果优选的提取条件茎枝是A1B2C2D3，即桑寄生茎枝0.5 g，乙醇浓度为60%，

2、超声提取时间为30 min,超声提取温度为45，料液比125；叶是A2B1C2D3,即桑寄生叶0.5 g，乙醇浓度为70%，超声提取时间为20 min,超声提取温度为45，料液比125。结论桑寄生总黄酮含量因寄主植物不同，其总黄酮含量表现出一定的差异性。优选的提取方法稳定、可靠、简洁，提取效率高。 【关键词】 桑寄生；寄主；总黄酮Abstract:ObjectiveTo compare the contents of total flavonoids of Herba Taxilli from different host-plants. MethodsThe total flavonoids

3、 of Herba Taxilli from sixteen host-plants were determined by spectrophotometry,and the extraction efficiency of total flavonoids were compared by the orthogonal experimental design with different extraction conditions. ResultsThe contents of the total flavonoids in branches of Herba Taxilli from di

4、fferent host-plants were 4.10 7.82 mg/g, which was the highest in the planted Herba Taxilli parasiticed in Mulberry;and the contents of the total flavonoids in the leaves were 18.3332.08 mg/g,which was the highest in Herba Taxilli parasiticed in Nerium indicum Mill.ConclusionThe contents of the tota

5、l flavonoids of Herba Taxilli from different host-plants are different .Key words:Herba Taxilli; Host; Total flavonoids 桑寄生是中国传统常用中药材，药材原植物为桑寄生科钝果寄生属广寄生Taxillus chinensis (DC.) Danser的干燥带叶茎枝1。由于桑寄生属半寄生性植物，具有广寄性特点，在野生状态下桑寄生的寄主十分复杂2。生长于不同寄主植物的桑寄生药材的化学成分含量研究目前尚未见报道。本文通过对16种不同寄主植物上广寄生总黄酮含量进行检测，考察桑寄生由于其寄

6、主植物不同药材总黄酮含量的变化，为桑寄生药材的科学使用提供理论依据。1 材料1.1 仪器与试剂岛津UV- 265FW 分光光度计；KQ-2200E 超声波清洗仪（江苏昆山超声仪器有限公司）；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为100080- 200306）；所用试剂均为分析纯。1.2 桑寄生样品桑寄生样品分别采自广西南宁、钦州等地，经广西中医学院邓家刚教授鉴定为广寄生Taxillus chinensis (DC.) Danser，寄主植物分别为桑、板栗、山茶等，将采自不同寄主等桑寄生药材样品清洗干燥茎枝、叶分开粉碎（60目）后备用。2 方法与结果2.1 显色方法与检测波长确

7、定参考有关文献采用三氯化铝比色法进行测定3,4。以一定浓度的乙醇为溶剂，以三氯化铝为显色剂，对对照品溶液与样品溶液依法显色后，按紫外-可见分光光度法1在200600 nm波长范围内扫描，测得对照品与样品的最大吸收波长为408 nm左右。 2.2 标准曲线的制备精确称取105干燥至恒重的芦丁对照品5.03 mg，置10 ml 容量瓶中，加少量60%乙醇溶解后定容至刻度。精确吸取5 ml于10 ml 容量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，制成0.25 mg/ml的标准液。精确吸取标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，加60%乙醇稀释至1.0 ml，加0.1 molL-1的三氯

8、化铝溶液2 ml，0.1 molL-1的醋酸钠溶液1 ml，摇匀，室温放置20min，在波长408nm测吸收度。以吸收度A对浓度C作标准曲线，回归方程为A0.246 6C0.004 4，r为0.999 8，表明在0.006 30.063 mg/ml 之间呈良好的线性关系。2.3 总黄酮提取工艺设计根据前期试验结果，选择乙醇浓度（A）、提取时间（B）、提取温度（C）、料液比（D）为实验因素。因素水平见表1。实验结果见表2。通过正交实验和数据处理发现，影响桑寄生茎枝总黄酮提取率的因素主次顺序为ABCD,最佳提取条件为A1B2C2D3，即乙醇浓度为60%，超声提取时间为30 min,超声提取温度为4

9、5，料液比125;影响桑寄生叶总黄酮提取率的因素主次顺序为ADCB,最佳提取条件为A2B1C2D3,即乙醇浓度为70%，超声提取时间为20 min,超声提取温度为45，料液比125。表1 提取工艺参数设计（略）表2 L9(43)提取工艺条件正交实验结果（略）2.4 稳定性实验精确吸取样品溶液2 ml，依法显色20 min后至100 min内，在波长408 nm，每隔10 min 测定1次吸收度。结果表明，显色后室温放置20100 min内，其吸收度稳定，RSD为1.89%。2.5 精密度实验精确吸取样品溶液2 ml，依法显色20 min后，在波长408 nm，重复测定6次，RSD为0.66%，

10、表明仪器的精密度好。2.6 重复性实验精确吸取6份芦丁标准溶液各1.0 ml，依法显色后，测定吸收度，RSD为1.37%，表明本方法的重复性好。2.7 加样回收率实验精确称取已知含量的桑寄生0.5 g，5份，分别加入一定量的芦丁对照品，依法测定含量，平均回收率为98.32%，RSD为1.70%。2.8 样品制备与测定分别称取不同寄主的桑寄生茎枝、叶各0.5 g，按照茎枝、叶的最佳提取条件进行提取，每个样品提取两次，乙醇用量为12.5 ml/次，离心分离，合并两次提取液，提取液用石油醚萃取3次除去其它色素，用相同浓度的乙醇定容至25ml。精密吸取样品液0.5ml,依法显色测吸收度用标准曲线计算样

11、品总黄酮含量，每个样品重复3次实验，取平均值。结果见表3。表3 不同寄主来源的桑寄生总黄酮含量（略）3 讨论 实验结果表明，不同寄主的桑寄生总黄酮含量表现出一定的差异性，在桑寄生茎枝中，不同寄主的桑寄生茎枝总黄酮含量为4.107.82 mg/g,其中来自人工种植以桑树为寄主的桑寄生茎枝的总黄酮含量最高；在桑寄生叶中，不同寄主的桑寄生叶总黄酮含量为18.3332.08 mg/g,其中以夹竹桃为寄主的桑寄生叶黄酮含量最高，桑寄生叶的总黄酮含量比桑寄生茎枝的总黄酮含量要高出4倍左右。 同是以桑树为寄主，人工种植的桑寄生无论茎枝还是叶的总黄酮含量比野生的桑寄生总黄酮含量高，可能是与桑寄生生长年龄不同有关，本实验采集的人工种植桑寄生为一年生样品，总黄酮含量是否与桑寄生生长年龄有