丹酚酸B和高氧液对兔肢体缺血再灌注氧化应激损伤的影响

1、 丹酚酸B和高氧液对兔肢体缺血再灌注氧化应激损伤的影响 涂泽松陈志维李逸群 广东省佛山市中医院骨科(528000) 摘要】目的探讨高氧液和丹酚酸B对肢体缺血再灌注损伤的影响。方法选用健康新西兰家兔24只，随机分 为4组，在缺血前从耳缘静脉推注等量的生理盐水(A组)、高氧液(B组)、丹酚酸B(C组)或高氧液加丹酚酸B(D组)，夹 队股动、静脉，建立肢体缺血再灌注损伤模型，在缺血前和再灌注4h抽血检浏MDA, SOD，取排肠肌作病理检浏。结果 血清丙二醛浓度较前明显升高，高氧液和丹酚酸B可以抑制其升高(P < 0.01)，两者有协同作用(尸< 0.01);血清超氧 化物歧化酶活性较前明

2、显降低，高氧液和丹酚酸B可以抑制其降低(P<0.01)，两者有协同作用(尸<0.01)。骨骼肌 HE染色见:相对于对照组其他组骨骼肌损伤程度较轻，以联合用药组最轻。结论高氧液和丹酚酸B能抑制肢体缺血 再灌注氧化应激损伤，而且两者有协同作用。 【关键词】高氧液;丹酚酸B;缺血再灌注损伤 Effects of salvianoli acid B and hyperoxic solution on experimental ischemia reperfusion坷ury TU Ze一song, CHEN Zhi一wei, !l Yi一，un . Department of Orthop

3、edics，Foshan Traditional Chinese Medicine Hospital，Foshan 528000, China 【 Abstract) Objective Aim。investigate the elf'eds of salvianoli acid B and hyperoxw solution on mpeamerual ischemia reperfusion ir'uury of extremity. Method Tweet，一four healthy New Zealand rabbitsdivided into four groups

4、 randomly. Equivalent 0. 9%ONaCI (group A )，hyperoxic solution (group B), salvianoli acid B (group C )，Salvianoli acid B and hyperoxic solutioninjected through， 吨e vein before ischemia. The femoral artery and veinblocked and set tip the model of ischemia reperfusion injury of extremity. Before ische

5、rnia and after 4 hoursmperfusion, the blood samplestaken to measure the levels of blood malondialdehyde ( MDA)supermide dismutuse(SOD).The gastrocnemius musclesobseruetl by pathology test. Results Serum eruymatic activity of malondzaMehyde (MDA)obviously. Salvianoli acid B and hyperoxic solution can

6、 precwu the了试P<0.01). They present (P<0. 0l ). Serum Enzymatic activity of superoxide dismutase ( SOD) reduce obviously. Salvianoli acid B and hyperoxic solution can pre- vent the reduction of it ( P<0. 01) . They present interaction ( P<0.01).The test of HE staining show that other grou

7、ps，lighter than the control group at degree of skeletal muscle uyury. The groupDthe lightest of them. Conclusions Salvwrwli acid B and hyperoxw solu- tionprevent the lipid peroxidation in ischernia reperfusion uyruy. They present interaction. 【 Key words I Hyperoxw solution; Salviartoli acid凡Ischemi

8、a reperfusion帅y. 再灌注损伤是指组织器官在缺血一段时间后恢复血液灌实验当日进行充氧。流，缺血组织的损伤不仅没有减轻，反而有所加重。肢体再灌1.3动物的处理:于缺血前0. 5 h一次将20 mV吨的注损伤在骨科临床上甚为常见，如肢体手术中止血带超时应0.9%抓化钠(A组)、20 ml/吨高氧液、溶有10 mg/吨丹酚酸的用、断肢(指)再植、栓塞后的再通等。丹酚酸B是丹参的水溶20 ml/吨的0.9%氯化钠、溶有10 mg/掩丹酚酸B的20 snU吨高性主要成分，既往试验研究表明其有保护心肌和脊髓再灌注损氧液从耳缘静脉推注人血，20 min匀速泵完。伤的作用，但其对肢体再灌注损伤的

9、作用不明。静脉供氧是把1.4缺血再灌注模型制作:模型按照Wang'的方法，试验氧疗和静脉输液相结合的一种全新的给氧治疗方法，对各种缺前兔禁食12 h，让其自由饮水，用2%戊巴比妥钠(首次血缺氧性疾病的治疗，均取得了一定的疗效。本研究旨在探讨40 mg/吨，维持量每2小时20 rng/掩)耳缘静脉注射麻醉后，将联合丹酚酸B和高氧液对兔肢体再灌注损伤过程中脂质过氧家兔仰卧位固定，颈部去毛，常规消毒，行颈外动脉插管，抽取3化的影响。ml血液，冰箱保存。在左侧腹股沟行3 crn的切口，分离股动静 1材料与方法脉，在约大腿中下段平面用血管夹夹住阻断血流，同时在其他 1.1动物及分组:选取新西兰家

10、兔24只，用随机数字表组织用弹性止血带扎于大腿根部，张力以完全阻断动脉血流为法将家兔随机分为A组(对照组),B组(高氧液组),C组(丹酚度。缺血4h后，放松止血带和血管夹，再灌注4h后取材。酸B组),D组(联合组)，各组6只。·1.5指标检测: 1.2主要试剂:丹参单体丹酚酸B购自上海沪云医药开1.5.1血清丙二醛(MDA)/超氧化物歧化酶(SOD):缺血发公司;过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒购自南京前和再灌注4h各在颈外动脉抽取3 em血。根据试剂盒步骤建成生物有限公司。高氧液制备:应用西安高氧医疗设备有限操作。取0.1 ml血清经2次硫酸和磷酸处理，取沉淀物中血

11、清公司研制的高氧医用液体治疗仪制备高氧液，严格按无菌操作脂质过氧化物和硫代巴妥酸溶液在95水浴中反应40 min，生规程进行，基液选择250 ml 0.9%氯化钠，氧气流量3 Vmin,溶成红色硫代巴妥脂质过氧化复合物，经正丁醇萃取，取上层物氧20 min，使液体氧分压迅速上升至80 "- 120 kPa，所有液体于于532 nn处比色，结果和标准品对比计算，最后求出血清MDA的含量，以反映脂质过氧化程度。基金项目:广东省佛山市科技攻关项目(200708065) 1.5.2骨骼肌HE染色:再灌注4h，取膝肠肌肌肉1块，河南外科学杂志2009年11月第15卷第6期1-IENAN JOU

12、RNAL OF SURGERY Jul. 2009, Vol. 15, No. 610%甲醛固定。按照以下步骤染色:脱水，包埋，切片，展片，烤片TO(turpentineoil，松节油)脱蜡15 min下行梯度酒精人水100% - 95% - 80% -70%一流水清洗1 min-.苏木精染色8 min-1%盐酸酒精分化;酒精伊红染色30s一1 min;水洗上行梯度酒精脱水，70%一80%一95%一100%-TO透明;中性树胶封片。 1.6统计学方法:所有血清检测数据采用析因分析设计的方差分析，统一用SPSS13.0进行统计分析绘图。 2结果 2.1血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD

13、)。表1示，缺血再灌注4h各组血清中的MDA含量显著升高，相对于对照组(A组)，高氧液处理组(B组)和丹酚酸B处理组(C组)上述指标明显下降(P<0.01)，两者的联合应用组(D组)表现更加明显(P<0.01)，丹酚酸B和高氧液两者存在协同作用。表2示，缺血再灌注4h各组血清中的SOD活性显著下降，相对于对照组(A组)，高氧液处理组(B组)和丹酚酸B处理组(C组)上述指标明显升高(P<0.01)，两者的联合应用组(D组)表现更加明显(P<0.01)，丹酚酸B和高氧液两者存在协同作用。 表1各组缺血前和再灌注4h前后血清MDA浓度 (nmol/ml,无士，) 组别只数缺血

14、前再灌注4h前后差值 A组6 4.8士0.9 19.2土1.0 14.4士0.7 B组6 4.911.3 12.711.3 7.810.6 c组6 4.8土1.3 12.6上1.7 7.8士0.8 D组6 5.0土1.4 9.3出1.5 4.3士0.4 注:高氧效应F二385. 5, P<0.01;丹酚酸效应F二381.7,P<0.01;协同效应F二34.7, P<0.01 表2各组缺血前和再灌注4h前后血清SOD活性 (u/ml,无土:) 组别只数缺血前再灌注4h前后差值 A组6 183.6士5.4 56.0土4.1 127.7土2.5 8组6 179.0士5.2 77.7

15、土7.9 101.3士4.6 c组6 180.4士 3.9 87.0上6.0 93.4土2.3 D组6 168.8土4.4 124.0土4.2 44.9士3.2 注:高气效应F=790.7, P<0.01;丹酚酸效应F=1157.5, P<0.01;协同效应F =69.4, P<0.01 2.2骨骼肌HE染色:对照组骨骼肌纤维排列紊乱，部分肌束崩解，呈灶性坏死，血管腔堵塞，中性粒细胞附壁、渗出，间资水肿并有纤维素样渗出物。而丹酚酸B和高氧液用药组骨骼肌纤维排列大体整齐，未见明显的肌束溶解，血管腔红细胞淤积程度较轻，中性粒细胞渗出浸润程度较轻，间质水肿轻。两者联合应用后改善作用

16、明显(图1一4)0 3讨论 自由基是在外层电子轨道上含有单个不配对电子的原子、原子团和分子的总称，其中由氧诱发的自由基称为氧自由基，具有高度活性和细胞毒性，可使细胞膜迅速去极化，破坏膜功能，使细胞的完整性及选择性离子渗透功能遭到破坏i21。自由基损伤血管内皮细胞，使内皮层胶原和肌膜中的透明质酸发生不可逆性降解，激活细胞趋化性，使血小板和颗粒细胞聚集，作为炎症反应的一部分，聚集的颗粒细胞又可释放出更多的自由基。自由基与缺血再灌注损伤有着密切关系，缺血再灌注时，产生大量氧自由基，从而使细胞生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，进而加剧细胞的损害(37。脂质过氧化反应可形成丙二醛(MDA),MDA含量的

17、多少反映脂质过氧化的程度并间接反映自由基的多少，是判断脂质过氧化的可靠指标f41。体内对自由基的内源性清除系统主要是SOD; SOD是歧化超氧阴离子的专一性酶，其活性高低可反映体内抗自由基的水平。图I A组(对照组)骨骼肌大片图2 B组(高氧液组)骨骼肌肿溶解，血管红细胞疲积，滋出，毛胀，大部分纤维完整，排列整齐，细血管出血明显，炎性细胞渗出。毛细血管内红细胞疲积，炎性细(HE x 100倍)胞渗出。(HEX 100倍)图3 C组(丹酚酸B组)骨骼肌图4 D组(联合组)骨骼肌肿胀肿胀，大部分纤维完整，排列整轻，纤维完整，排列整齐，毛细血齐，毛细血管内红细胞寮积，炎性管内红细胞轻度痕积，炎性细胞

18、细胞渗出。(HE x 100倍)渗出较少。(HE x 100倍) 既往研究证实高氧液中含10一20呵ml的臭氧。Leons认为治疗剂量的臭氧预处理鼠能增加其抗氧化损害能力。A-jamieh等(6J试验证明臭氧预处理能产生和缺血预处理同样甚至更强的保护作用。丹酚酸B是丹参药理作用的主要成分之一，有研究表明它具有强大抗氧化作用和保护血管内皮细胞L7l，还可增加受累组织的血流灌注和供氧量L810 在本研究中，相对于缺血前，再灌注4h后SOD明显下降，高氧液组或丹酚酸B组SOD水平明显高于对照组，而联合组高于其他三组，证实再灌注损伤过程中机体清除自由基的能力下降，高氧液和丹酚酸B组能抑制SOD的下降，

19、且两者存在协同的效应;同时在研究中见MDA明显升高，证实在缺血再灌注过程中，自由基逐渐累积，从而对机体造成损伤，高氧液和丹酚酸B可以降低MDA，且两者存在协同作用。这与病理结果中所见的情况一致。对照组骨骼肌纤维排列紊乱，部分肌束崩解，呈河南外科学杂志2009年11月第15卷第6期HENAN JOURNAL OF SURGERY Jul. 2009. Vol. 15 . No. 6灶性坏死，血管腔堵塞，中性粒细胞附壁、渗出，间质水肿并有纤维素样渗出物。而丹酚酸B和高氧液用药组骨骼肌纤维排列大体整齐，未见明显的肌束溶解，血管腔红细胞淤积程度较轻，中性粒细胞渗出浸润程度较轻，间质水肿轻。两者联合应用

20、后改善作用明显。总之，高氧液和丹酚酸B能抑制肢体缺血再灌注氧化应激损伤，而且两者有协同作用。 参考文献 1 Wang HG, Li ZY, Liu XL. Addition of tanshinone IIA to UW solution de- skeletal muscle ischerttia一，perfusion坷衅1l.ActaR且 Sin,2006,27(8):991一999.27 Russell RC, Roth AC, Kucan JO, et al. Reperfimion injury and oxygen free radicals: a review J .J Recn

21、natr Micros<rg,1989,5(1):79一84.37鲁力，张俐.骨骼肌缺血再灌注损伤机制研究进展Jl.中国中医骨 伤科杂志，2005,13(6):76一80.47 Soong CV, Young IS, Blair PHB, et al. Iapid peraeidation as“cause“ lower limb swelling following fen一popliteal bypass grafting J 7 . Eur J Vasc Sug,1993,7(5):54。一545.57 Leon OS, Mend S, Merino N, et al. Ozone

22、 oxidative preconditioning: a prow一lion against cellular damage场free radicals J I.Mediators In- flamm,1998,7(4):289一294.67 AjamieJr H, Merino N, Candelario一Jalil E, et al. Similar protective effect of ischaernic and ozone oxidative preconditioning in liver ishaenia/reper- fusion injury Jl.Phatmacol

23、Res,2002,45(4):333一339.7杜嵘，张伯礼，高秀梅，等.丹酚酸B对缺氧损伤心脏微血管内皮 细胞细胞间粘附分子表达的影响【Jl.中国新药与临床杂志，2004, 23(9):616一618.87王保和，傅伟，李竹庭.丹酚酸B对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心 肌保护作用的机制研究J.天津中医学院学报，2004,23(3):132一133. (收稿日期2009 - 06 - 12)术中胆道造影在腹腔镜胆囊切除术中应用价值 李小燕河南省襄城县人民医院放射科(461700) 【摘要】目的探讨术中胆道造影在腹腔镜胆囊切除术中的应用价值。方法腹腔镜胆囊切除术中在切除胆囊 前，常规在C型臂X线下

24、行胆道造影，并及时采集、保存图像，以了解肝外胆管内有无结石存在。若发现结石，继而行中 转开腹胆总管探查取石术。结果施行的76例术中胆道造影中，发现胆总管结石5例，其中胆总管下段多发结石2例， 胆总管内单发结石2例，胆总管内一长柱状结石1例。5例胆总管结石取出术后均放里T型管，随访T管造影复查，未见 结石残留。结论腹腔镜胆t切除术常规行术中胆道造影可有效地防止胆道结石残留，避免了不必要的胆管探查，减少 了胆管损伤和术后并发症的发生，减少了患者的住院费用和住院时间，且术中胆道造影操作简单、迅速、安全，除有禁忌 证外，应常规应用术中胆道造影。 【关键词】术中胆道造影;腹腔镜;胆囊切除术;C型臂X线

25、Value of intraoperative cholangiography in laparoscopic cholecystectoiny Ll Xiaa一yan. Department of Radiology, the People:Hospital of Xiangcheng, Xiangcheng 461700, China (Abstract Objective Discussion the value of intraoperative cholangiography in laparoscopic cholecystctorny. Methods lye make 。of

26、the intraoperatwe cholangiography and timely collection, preservation of images with C一X一ray system before laparoscopic cholecystectomy, in order to know whether the extrahepatic bile duct stones exist.扩it is found stones，and then line conversion technique bile duct exploration. Results Among the 76

27、of intraoperative cholangiography,fiveuwre foundbile duct stones，one of many hairbile duct stones in 2，common bile duct calculi in twoof single，bile dud with a stone pillar in 1 case. Fiveof common bile dud stones urre put out after“T"一tube,follow一叩“T"一ubeangiography. Residu- al stone was found.Conclusions The intravperative cholangiography in laparoscopic choleMtedomy，decrease residual cakm- lus in the bil