卷柏穗花杉双黄酮的舒张血管作用实验研究

1、    卷柏穗花杉双黄酮的舒张血管作用实验研究作者：许兰，尹明浩 作者单位：(延边大学中医学院,吉林 延吉 133000)【摘要】 目的探讨卷柏乙酸乙酯提取物穗花杉双黄酮对血管紧张性的影响及其可能的机制.方法利用多道生理记录仪对大鼠离体主动脉环进行观察，了解卷柏己烷、乙酸乙酯和正丁醇提取物对血管的作用，并从血管内皮细胞、一氧化氮和受体角度探讨其机制.结果卷柏的3种提取液均有明显的舒张血管作用，其中以乙酸乙酯提取物穗花杉双黄酮的作用最强，且在0.110.0mol/L范围内具有剂量依赖性.损伤大鼠胸主动脉环内皮后，穗花杉双黄酮的舒张血管作用被抑制;在内皮完整

2、的动脉血管环使用一氧化氮抑制剂LNAME后，穗花杉双黄酮的作用亦被抑制;使用1.0mol/L盐酸普萘洛尔或阿托品对穗花杉双黄酮的舒张血管作用无影响.结论卷柏乙酸乙酯提取物穗花杉双黄酮的舒张血管作用存在内皮依赖性，且有一氧化氮参与.【关键词】 穗花杉双黄酮;主动脉;血管舒张;一氧化氮;大鼠Experiment study on vasodilative effects of amentoflavone ethyl acetate extract of selaginella tamariscinaXU Lan, YIN Minghao*(Yanbian University College of

3、 Traditional Chinese Medical, Yanji 133000, Jilin， China)ABSTRACT:OBJECTIVETo investigate the effects of ethyl acetate extract of the selaginella tamariscina (ST) on vasotonia and its underlying mechanisms.METHODSUsing the polygraph, the effects of hexane, ethyl acetate and nbulanol extracts of the

4、ST for the vasotonia were evaluated with the model of isolated rat thoracic aorta rings in organ bath, and the mechanisms were studied by the point of vascular endothelial cell, nitric oxide (NO) and receptor.RESULTSAll of three extracts of the ST had the effects of vasodilation, in which the ethyl

5、acetate extract of the ST had the strongest effects with the dosedependent at the concentrations of 0.110.0mol/L. But this effect was almost inhibited after removal of rat thoracic aorta rings and pretreating the endothelium intact aorta rings with NG nitroLarginine methyl ester at the concentration

6、 of 1.0mol/L, respectively. Thepropranolol (1.0mol/L) or atropine (1.0mol/L) did not affect vasodilation with ethyl acetate extract of the ST.CONCLUSIONThe ethyl acetate extract of the ST has the effect of vasodilation with endothelium dependent and engaging in NO.Key words:Amentoflavone;aorta;vasod

7、ilation;nitric oxide;rats卷柏科植物卷柏(Selaginella tamariscina)具有活血通经之功效，用于经闭痛经、癓瘕痞块及跌打损伤的治疗，炒炭后可化瘀止血，用于治疗吐血、崩漏、便血及脱肛等疾病1.卷柏的主要化学成分为黄酮类、生物碱、酚类、有机酸类、氨基酸及多糖类等2.研究结果表明，卷柏除具有调节免疫、抗肿瘤、抑菌、抗炎、镇痛及镇静作用外，尚有抑制正常离体兔肠平滑肌的蠕动及张力的作用.本实验观察了卷柏乙酸乙酯提取物对大鼠离体胸主动脉环的作用，并初步探讨了其机制.1 材料与方法1.1 实验动物与试剂 取体重为250300g的SD雄性大鼠，由韩国Samtako实验

8、动物中心提供.苯肾上腺素、乙酰胆碱、阿托品、盐酸普萘洛尔及LNAME均购自美国SIGMA公司.1.2 卷柏提取物的制备 取卷柏1.2kg浸泡于5L甲醇中，3周后用回旋式减压浓缩机浓缩，再将浓缩物溶解于水后，用己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水依次萃取成分.在预实验中发现，乙酸乙酯提取物对血管的舒张作用最为明显，故采用C18柱色谱分离法和硅胶柱色谱分离法进行分离，通过改变样品混合物处理条件及流动相极性，得到分离物DH 110211.通过血管舒张实验证明其为有效活性成分，并经HNMR波谱和13CNMR光谱分析，最终确定其为双黄酮类化合物穗花杉双黄酮(Amentoflavone).1.3 血管环的制备 参照

9、Kim等3的方法，将大鼠断头处死，迅速开胸取胸主动脉，在4的Krebs液中去除血管周围脂肪及结缔组织，制作成约3mm长的血管环.血管环悬挂于含有5mLKrebs液(118.0mmol/L氯化钠,4.7mmol/L氯化钾,1.1mmol/L硫酸镁,1.2mmol/L磷酸二氢钾,1.5mmol/L氯化钙,25.0mmol/L碳酸氢钠,10.0mmol/L葡萄糖)的浴槽中恒温37，持续通入950mL/L氧50mL/L二氧化碳混合气体.将血管环两端分别连接于张力传感器和浴槽底部的不锈钢丝，使用PowerLab生物信号采集系统(美国GRASS公司)进行记录.最适前负荷为1g，每隔10min换液1次，平衡

10、1h后开始进行实验.1.4 统计学处理 所有数据均以均数±标准偏差(±SD)表示，采用t检验及oneway ANOVA进行显著性检验.2 结果2.1 卷柏提取物对主动脉环张力的影响 动脉环在灌流稳定1h后，向灌流槽内加入1.0mol/L苯肾上腺素，使动脉环收缩达到稳定.分别加入卷柏己烷、乙酸乙酯和正丁醇提取物，观察动脉对苯肾上腺素导致的收缩血管作用的影响.发现卷柏的上述提取物均有显著的舒张血管作用，其中以100g/L卷柏乙酸乙酯提取物的舒张血管作用最强，见图1.2.2 损伤血管内皮对穗花杉双黄酮舒张血管作用的影响 向灌流槽内加入0.1mol/L苯肾上腺素，待血管环收缩达到稳

11、定后，逐渐增加穗花杉双黄酮的浓度(0.0110.00mol/L)，发现对血管的舒张作用呈剂量依赖性.但当使用外科方法剥去动脉血管内皮后，穗花杉双黄酮的舒张血管作用明显减弱，甚至完全消失(图2A).2.3 LNAME对穗花杉双黄酮舒张血管作用的影响 用非特异性一氧化氮抑制剂LNAME(0.1，1.0mol/L)预处理血管后，再观察穗花杉双黄酮的舒张血管作用，发现LNAME几乎可完全阻断穗花杉双黄酮的舒张血管作用(图2B)，提示穗花杉双黄酮可能通过一氧化氮发挥舒张血管作用.2.4 普萘洛尔和阿托品对穗花杉双黄酮舒张血管作用的影响 应用1.0mol/L普萘洛尔及0.110.0mol/L阿托品分别对血

12、管进行预处理后发现均不影响穗花杉双黄酮的舒张血管作用,与对照组相比较均无显著性差异(P>0.05,图3).3 讨论本实验结果表明，卷柏的己烷、乙酸乙酯和正丁醇等3种提取物均有一定的降低由苯肾上腺素引起的动脉血管收缩的作用，而其中以乙酸乙脂提取物穗花杉双黄酮的作用最强.穗花杉双黄酮的舒张血管作用可能与胆碱能M受体及肾上腺素能受体无关，但在剥去血管内皮后作用完全被阻断，提示穗花杉双黄酮的舒张血管作用依赖血管内皮.血管内皮细胞可分泌内皮源性血管舒张因子，而其化学本质为一氧化氮4.一氧化氮是由一氧化氮合酶催化其底物L精氨酸产生的，一氧化氮的舒张血管作用是通过增加平滑肌内cGMP水平来介导5.本实

13、验结果表明，用非特异性一氧化氮抑制剂LNAME预先处理后，穗花杉双黄酮的舒张血管作用完全被阻断，提示卷柏的乙酸乙脂提取物穗花杉双黄酮可能是通过激活血管内皮细胞中的一氧化氮/c GMP信号转导系统发挥作用，其详细机制有待于进一步研究阐明.【参考文献】1 徐宏峰，陈科力.卷柏属药用植物化学和药理研究进展J.中华实用医药杂志,2004,12(4):609.2 何薇，曾祖平，王永红.药用卷柏的研究概况J.中草药,2000,31(12):954.3 Kim SH, Kang KW, Kim KW, et al.Procyanidins in crataegus extract evoke endotheliumdependent vasorelaxation in rat aortaJ.Life Sci,2000,67:121.4 Zhang H， Cook D.Cerebral smooth muscle potassium channel and their possible role