纯化AmFcBmFc 新版本

1、一、 过滤先将细胞发酵液通过3-0.8m和0.45-0.2m的过滤组合：1、 将3+0.8m和0.45+0.2m的滤芯分别装入滤壳。3+0.8m,sartoclean CA,5622504E1, 10英寸代替上面的CA可以用SartopurePP2,10英寸更好,0.45+0.2m ,sartopore2,5442507H1,10英寸2、 将滤壳串联，用蒸汽在线灭菌。3、 将入口与上清液相连，出口与无菌袋相连。4、 用蠕动泵作为动力进行过滤。每步纯化都需要过滤二、 A-Mabselect SuRe柱（美国GE Healthcare）亲和层析1、 用缓冲液1平衡，直至pH（7.3-7.5）和电导

2、值平衡（15-20ms/cm）2、 上样3. 缓冲液1平衡4、 用缓冲液2洗脱，直至pH（7.3-7.5）和电导值平衡（40-60ms/cm）5、 用缓冲液1平衡，直至pH（7.3-7.5）和电导值平衡（15-20ms/cm）6、 用缓冲液3洗脱，收集吸收峰7、 水8、 用溶液12清洗9、 缓冲液1平衡10、用溶液2保存，直至电导值平衡三、 pH3.5条件下灭活病毒 将收集液立即用Tris(1M)调PH到7.6-8.0，静置1小时调电导至下一步用缓冲液4平衡时一样，过滤。四Mustang Q: XT5MSTGQPM6(5ml XT CAPSULE MUSTANG Q) 5ml 囊式膜层析过滤器

3、 PALL公司，可重复使用，百泰测试结果：5ml，处理8g，适用于实验室规模140ml处理20g，适用于中试，Mustang Q: XT140，货号：XT140MSTGQP05)1. S8洗，25ml/min，流速小些2. 1M NaCL+0.1M NaOH再生，流速小些3. 缓冲液4平衡，流速可大些4. 上样，流速可大些5. 缓冲液4平衡5S8清洗,20-30min6. S17清洗收集后，过滤备注：Q阴离子交换这步也可以用sartorius 公司的sartobind Q ，这两个是阴离子交换膜，样子和滤器差不多，省时省力，很好用，可重复使用，回收效率也很高。使用时可以用咱们阴离子缓冲及洗脱液

4、。我会列出相关订货信息和使用说明（附件中）：1. Srtorius：Sartobind Q75 订货货号信息：93IEXQ42DB-12V 2. Pall: Mustang Q 5ml 订货货号信息：XT5MSTGQPM6 3. Pall Mustang Q: XT140，货号：XT140MSTGQP05五、 SP阳离子交换（美国GE）1、用缓冲液5调节pH至52、用缓冲液6平衡，直至pH（PH5.0-5.5）和电导值（3.0-5.0）平衡，电导特别重要一定要调好调准。3、上样4、用缓冲液6平衡，直至pH和电导值平衡5、用缓冲液7洗脱，收集吸收峰，收集后，过滤6、用溶液10清洗 (2 M Na

5、Cl)7、用溶液6/8清洗 (0.5 M 或1M NaOH)8、用溶液7保存，直至电导值平衡六、 sephadex G-25脱盐处理1、用CD20保存液平衡，直至pH和电导值平衡2、上样1/3，暂停，换CD20保存液，收集紫外吸收峰，收集后，过滤3、用溶液6清洗4、用溶液7保存，直至电导值平衡sephadex G-25脱盐处理；如果浓度不够，可以超滤，可以选用：Centricon Plus-70 离心超滤管，millipore,货号：UFC703008；如量少，可选用millipore,货号：UFC903008。第六步的全部过程也可以直接用超滤代替。超滤装置可以用pall,sartorius等

6、公司，如pall公司的超滤装置：FS010K10（未带泵，商谈后可以送膜包），价钱3万左右，超滤缓冲液可以用制剂溶液(配方液)或缓冲液15。附表，各缓冲液组成溶液名称药品名称pH电导缓冲液1 (50 mM Tris, 150 mM NaCl)Tris-HCL 氯化钠7.37.515 20mS/cm缓冲液2 (50 mM Tris, 500 mM NaCl)Tris-HCL氯化钠7.37.540 60mS/cm缓冲液3 (0.1 M 柠檬酸)无水柠檬酸3.23.83 6mS/cm缓冲液4 (20 mM Tris)Tris，Hcl7.6-8.00.9 1. 5mS/cm缓冲液5 (2 M 醋酸钠)

7、无水醋酸钠5.0 5.155 65mS/cm缓冲液6 (50 mM 醋酸钠)无水醋酸钠5.0 5.53 5mS/cm缓冲液7 ( 75 mM Sodium Phosphate, 0.2 M NaCL)可否考虑0.5-1M NaOH二水磷酸氢二钠（10.27g/L即0.057mol）、二水磷酸二氢钠（2.7g/L即0.018mol）,氯化钠(11.68g/L)6.57.0可否考虑略微增加？22 27mS/cm缓冲液10Tris 20Mm, NaCl 100 mM, pH1017 mS/cm缓冲液11Tris 20Mm, NaCl 500 mM, pH4060mS/cm缓冲液1

8、2Glycine （甘氨酸）0.1 M PH3.0 0.54mS/cm缓冲液13Sodium citrate dehydrate（柠檬酸钠） 28mM;1.05.0mS/cm缓冲液14Sodium citrate dehydrate 28mM; NaCl 0.2M,7.08.02030mS/cm缓冲液15（CD20保存液）150 mM NaCl, 0.07% Tween 80，citrate dehydrate（柠檬酸） 28mM标准版：柠檬酸 0.1g/L柠檬酸钠 8.1 g/L氯化钠 8.76 g/L吐温80 0.6482 g/L1520mS/cm溶液2 (20 %乙醇)95乙醇

9、NP溶液4 (0.1M NaOH) 氯化钠-氢氧化钠NP溶液5(20 %乙醇, 100 mM acetic acid)95乙醇、冰醋酸NP溶液6 (0.5 M NaOH)氢氧化钠NP溶液7 (0.01 M NaOH)氢氧化钠NP溶液8 (1M NaOH)氢氧化钠NP溶液9 (3 M NaCl)氯化钠NP溶液10 (2 M NaCl)氯化钠NP溶液12(0.1M NaOH)氢氧化钠NP制剂溶液(15 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, 0.02 % Tween 80)二水磷酸二氢钠、氯化钠、聚山梨醇酯（吐温80）6.8 7.3泰欣生配方液1L磷酸二氢钠 0.45g磷酸氢二钠 1.8g氯化钠 8.6g聚山梨醇酯80 0.2gPH