教学课件-培养基的制备与灭菌

1、培养基的制备和灭菌培养基的制备和灭菌 加热灭菌加热灭菌 干热灭菌干热灭菌 湿热灭菌湿热灭菌 过滤除菌过滤除菌 辐射灭菌辐射灭菌 放射线辐照灭菌放射线辐照灭菌 紫外线灭菌紫外线灭菌 化学药品灭菌化学药品灭菌灭菌方法v 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。v 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。v 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160170），时间要长（12h），但干热灭菌温度不能超过但干热灭菌温度不能超过180180，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧

2、，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。干热灭菌干热灭菌v 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100100的温度的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达

3、到灭菌的目的。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 v 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。湿热灭菌湿热灭菌因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨因为空气的膨胀

4、压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。温度低于饱和蒸气的温度。v一般培养基用0.1Mpa0.1Mpa，121.5,15121.5,1530min30min可达到可达到彻底灭菌的目的。彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。湿热灭菌v不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。一般可用细菌过滤器进行除菌。过滤除菌v紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为紫外线灭菌是用

5、紫外线灯进行的。波长为200-200-300nm300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm260nm的杀菌的杀菌力最强力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNADNA链的链的交联，从而交联，从而抑制了抑制了DNADNA的复制的复制。另一方面，由于辐。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成射能使空气中的氧电离成OO，再使，再使O O2 2氧化生成臭氧化生成臭氧

6、（氧（O O3 3）或使水（）或使水（H H2 2O O）氧化生成过氧化氢（）氧化生成过氧化氢（H H2 2O O2 2）。O O3 3和和H H2 2O O2 2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m1.2m为宜。为宜。紫外线灭菌v为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以前；可为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以前；可在无菌室内在无菌室内( (或接种箱内或接种箱内) )喷洒喷洒3%3%5%5%石炭酸溶液，石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用可用2%2%3%3%的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。紫外线灭菌紫外线灭菌v 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、