药物的鉴别试验课程课件(最终修改)

1、第二章第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验分析检测教研室分析检测教研室2第一节第一节 概述概述 药物鉴别试验的意义与目的 问题：鉴别的定义是什么？3药物的鉴别试验（identification test) 是根据药物的分子结构、理化性质,采用化学、物理化学或生物学方法来证明已知药物的真伪。 是药检工作的首要任务，杂质检查、含量测定的前提。4注意： 药物鉴别试验是用来证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而不是对未知物进行定性分析，因为这些鉴别试验虽有一定的专属性，但不具备进行未知无确证的条件，故不能鉴别未知物5第二节第二节 鉴别试验的项目鉴别试验的项目 性状性状 一般鉴别试验一般鉴

2、别试验 专属鉴别试验专属鉴别试验6一、性状一、性状 外观外观：感观规定，一般性的描述。：感观规定，一般性的描述。 如二巯基丁二钠的描述为如二巯基丁二钠的描述为“本品为白色至微黄色的粉末；有本品为白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭类似蒜的特臭”。 溶解度溶解度：反映了在某种溶剂中的溶解性能。：反映了在某种溶剂中的溶解性能。 物理常数物理常数: 评价药品质量的重要指标，反映评价药品质量的重要指标，反映药品的纯净程度。药品的纯净程度。 熔点、熔点、 比旋度、吸收系数、凝点、折光率、相对密度、馏程、比旋度、吸收系数、凝点、折光率、相对密度、馏程、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值等黏度、酸值、皂化值、羟值

3、、碘值等71.外观：外观：指药品的外表感观和色泽，指药品的外表感观和色泽， 包括聚集状态、晶型、色泽以及臭、味包括聚集状态、晶型、色泽以及臭、味如：如：维生素维生素B1“本品为白色本品为白色 结晶或结晶粉末；结晶或结晶粉末； 有微弱的特臭，味苦；有微弱的特臭，味苦； 干燥品在空气中迅即吸收约干燥品在空气中迅即吸收约4%的水分的水分”（色泽（色泽（聚集状态）（聚集状态）（臭）（臭）（味）（味）8极易溶解极易溶解 系指溶质系指溶质1g(ml)能在溶剂不到能在溶剂不到1ml中溶解；中溶解；易溶易溶 系指溶质系指溶质1g(ml)能在溶剂能在溶剂1不到不到10ml中溶解；中溶解；溶解溶解 系指溶质系指溶

4、质1g(ml)能在溶剂能在溶剂10不到不到30ml中溶解；中溶解；略溶略溶 系指溶质系指溶质1g(ml)能在溶剂能在溶剂30不到不到100ml中溶解；中溶解；微溶微溶 系指溶质系指溶质1g(ml)能在溶剂能在溶剂100不到不到1000ml中溶解中溶解;极微溶解极微溶解 系指溶质系指溶质1g(ml)能在溶剂能在溶剂1000不到不到10000ml中溶解；中溶解；几乎不溶或不溶系指溶质几乎不溶或不溶系指溶质1g(ml)在溶剂在溶剂10000ml中不能完全溶解。中不能完全溶解。 2.2.溶解度溶解度试验法：试验法：供试品准确称取研成细粉供试品准确称取研成细粉 在在252 ，加溶剂，加溶剂 每隔每隔5m

5、in振摇振摇30s 无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解 9（1 1）熔点）熔点 1 1）定义：）定义：Ch.P Ch.P 规定规定, ,熔点系指一种物质由熔点系指一种物质由固体熔化成液体固体熔化成液体的温度的温度、熔融同时分解的温度熔融同时分解的温度，或在熔化时自初熔至全熔或在熔化时自初熔至全熔的一段温度。的一段温度。如：如：雌二醇：雌二醇：175180醋酸地塞米松醋酸地塞米松：223 233 3.物理常数样品样品发毛发毛收缩收缩 液滴液滴（初熔）（初熔） 澄清澄清（全熔）（全熔）10 2 2）测定方法）测定方法 分三法：第一法：测定易粉碎

6、的固体药品分三法：第一法：测定易粉碎的固体药品 如各种结晶型药物 第二法：测定不易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品 如脂肪、石蜡、羊毛脂 第三法：测定凡士林或其他类似物质第三法：测定凡士林或其他类似物质 （详见：（详见：Ch.P 2010Ch.P 2010年版二部年版二部 附录附录 C C ）11温度计温度计 分浸型，具有分浸型，具有0.5刻刻 度，度， 须先经校正须先经校正传温液传温液 m.p 80 水水 m.p 80 硅油或液状石蜡硅油或液状石蜡注意事项：注意事项：12（2）相对密度）相对密度1)1)基本原理基本原理 相对密度系指在共同的特定条件相对密度系指在共同的特定条件下下

7、( (如同一温度等如同一温度等) )，某物质的密度与，某物质的密度与另一参考物质的密度之比。另一参考物质的密度之比。 3.物理常数13 中国药典要求在相同条件下，液体药中国药典要求在相同条件下，液体药物比纯化水重的倍数，除另有规定外，温物比纯化水重的倍数，除另有规定外，温度均指度均指2020时的比值。时的比值。 纯药物的相对密度在特定条件下为不变的纯药物的相对密度在特定条件下为不变的常数，药物的纯度改变，相对密度也随之常数，药物的纯度改变，相对密度也随之改变，所以测定相对密度，可以区别或检改变，所以测定相对密度，可以区别或检查药物的纯杂程度。查药物的纯杂程度。14比重瓶法比重瓶法韦氏比重秤法韦

8、氏比重秤法20 20 液体药物密度液体药物密度/ /水密度水密度供试品用供试品用量少量少 较常用较常用仅用于仅用于 易挥发液易挥发液体体1516新沸约新沸约 20的水的水 精密称定重量精密称定重量 20水浴水浴 放置放置 1020min 迅速精密称定迅速精密称定 比重瓶比重瓶 洗净、干燥洗净、干燥 带塞带塞 精密称定精密称定比重瓶比重瓶重量重量供试品供试品重量重量水重量水重量结果计算结果计算1718应用举例：191.我国药典规定我国药典规定“熔点熔点”的含义系指固的含义系指固体体 A. 自熔化开始点到液化点自熔化开始点到液化点 B. 自熔化开始点到崩坍点自熔化开始点到崩坍点 C. 自收缩点到液

9、化点自收缩点到液化点 D. 自崩坍点到液化点自崩坍点到液化点 E. 自熔化开始点到熔化澄明点自熔化开始点到熔化澄明点练练 习习20 中国药典规定中国药典规定“熔点熔点”系指系指 A. 固体初熔时的温度固体初熔时的温度 B. 固体全熔时的温度固体全熔时的温度 C. 供试品在毛细管内收缩时的温度供试品在毛细管内收缩时的温度 D. 固体熔化时自初熔至全熔的一段固体熔化时自初熔至全熔的一段 温度温度 E. 供试品在毛细管内开始局部液化时的温度供试品在毛细管内开始局部液化时的温度211 1）基本原理）基本原理 反映手性药物特性及其纯度的主要指标。反映手性药物特性及其纯度的主要指标。（3）旋光度）旋光度不

10、对称碳原子不对称碳原子 H RCR CH3手性碳原子手性碳原子具有光学活性具有光学活性3.物理常数22COHHCHOHCHOHCHCHOHCH2OHO葡萄糖葡萄糖23旋光度旋光度 直线偏振光通过含有某些光学活性的药物液体时，直线偏振光通过含有某些光学活性的药物液体时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转，旋能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转，旋转的度数称为旋光度。转的度数称为旋光度。偏振光向右旋转者（顺时针方向）为偏振光向右旋转者（顺时针方向）为右旋右旋，以，以“”符符号表示；号表示；使偏振光向左旋转者使偏振光向左旋转者(反时针方向反时针方向) 为为左旋左旋，以，以“”符符号

11、表示号表示 24钠光谱钠光谱D线线（589.3nm） 比旋度比旋度 测定管长为测定管长为1dm1dm、浓度为、浓度为1g/ml1g/ml 时测得的旋光度时测得的旋光度 20D lctD 25计算计算 液体供试品液体供试品ld20D液体的液体的相对密度相对密度26 lctD lml/gctD lctD 100%固体供试品固体供试品272 2）旋光仪的检定）旋光仪的检定 旋光管旋光管 标准石英旋光管标准石英旋光管基准物基准物 蔗糖蔗糖 28A A、比旋度的测定、比旋度的测定 中国药典许多药物（如硫酸奎中国药典许多药物（如硫酸奎宁、肾上腺素、葡萄糖等）的性状宁、肾上腺素、葡萄糖等）的性状项下规定了比

12、旋度的测定，既判别项下规定了比旋度的测定，既判别了药物的真伪，又检查了药物的纯了药物的真伪，又检查了药物的纯度度应用举例应用举例29B B、在杂质检查中的应用、在杂质检查中的应用 如硫酸阿托品中莨菪碱的检查如硫酸阿托品中莨菪碱的检查C C、在含量测定中的应用、在含量测定中的应用 如葡萄糖注射液的含量测定如葡萄糖注射液的含量测定 301：旋光计的检定，中国药典：旋光计的检定，中国药典 （2000年版）规定用年版）规定用 A、葡萄糖作基准物、葡萄糖作基准物 B、水杨醛作基准物、水杨醛作基准物 C、半乳糖作基准物、半乳糖作基准物 D、水合氯醛作基准物、水合氯醛作基准物 E、蔗糖作基准物、蔗糖作基准物

13、练练 习习312.测定盐酸土霉素的比旋度时，若称取供试测定盐酸土霉素的比旋度时，若称取供试品品0.5050g，置，置50ml量瓶中，加盐酸液量瓶中，加盐酸液（91000）稀释至刻度，用）稀释至刻度，用2dm长的样品管长的样品管测定，要求比旋度为测定，要求比旋度为188 200 。则测得。则测得的旋光度的范围应为的旋光度的范围应为 A、3.804.04 B、380404 C、1.902.02 D、190202 E、1.882.00 lctD 322505050. 0188 2505050. 0200 80. 3 04. 4333.测定某药物的比旋度，配制的供试品溶液浓度为50.0mg/ml，样品

14、溶液宽2dm，测得旋光度为+3.25，则比旋度为 A. +6.50 B. +32.5 C. +60.0 D. +16.25 E. +325 lctD 344. 旋光度测定法可检测的药物是旋光度测定法可检测的药物是 A. 具有立体结构的药物具有立体结构的药物 B. 含有共轭系统结构的药物含有共轭系统结构的药物 C. 脂肪族药物脂肪族药物 D. 结构中含手性碳原子的药物结构中含手性碳原子的药物 E. 结构中含氢键的药物结构中含氢键的药物355. 比旋度的符号应是比旋度的符号应是 A. B. C D. Pa E. dm 20D.C 366. 旋光计的检定，中国药典（旋光计的检定，中国药典（2010年

15、版）规定用年版）规定用 A. 葡萄糖作基准物葡萄糖作基准物 B. 水杨醛作基准物水杨醛作基准物 C. 半乳糖作基准物半乳糖作基准物 D. 水合氯醛作基准物水合氯醛作基准物 E. 标准石英旋光管标准石英旋光管377.可用旋光度法测定的药物是可用旋光度法测定的药物是 A、对氨基水杨酸、对氨基水杨酸 B、氯丙嗪、氯丙嗪 C、氯氮卓、氯氮卓 D、葡萄糖注射液、葡萄糖注射液 E、盐酸利多卡因、盐酸利多卡因38 （4）吸收系数： 在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。 表示方法：摩尔吸收系数 百分吸收系数 用 途： 检查纯度 测定制剂含量%1cm1E3.

16、物理常数39二、一般鉴别试验二、一般鉴别试验 （general identification test） Ch.P附录附录中有：中有：40一般鉴别试验一般鉴别试验 （general identification test） 是指依据是指依据某一类某一类药物的共同的化学结构或药物的共同的化学结构或 相同的理化特性，来鉴别药物的真伪。相同的理化特性，来鉴别药物的真伪。 有机药物有机药物-官能团官能团 无机药物无机药物-阴离子、阳离子阴离子、阳离子 一般鉴别试验用于证实药物是哪一类，一般鉴别试验用于证实药物是哪一类，要进一步证实是哪一种药物，还需要结合要进一步证实是哪一种药物，还需要结合专属鉴别试验

17、专属鉴别试验 411.1.有机氟化物有机氟化物有机氟有机氟氧瓶燃烧氧瓶燃烧无机氟离子无机氟离子pH4.3 茜素氟蓝茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸亚铈蓝紫色蓝紫色络合物络合物碱液吸收碱液吸收42药典原文药典原文432. 有机酸盐有机酸盐(1)(1) 水杨酸盐水杨酸盐P65水杨酸水杨酸 + FeCl3中性条件中性条件弱酸性条件弱酸性条件红色配位化合物红色配位化合物紫色配位化合物紫色配位化合物6 + 4FeCl3+ 12HCl水杨酸盐水杨酸盐+稀盐酸稀盐酸水杨酸（白色沉淀）水杨酸（白色沉淀）溶于醋酸铵溶于醋酸铵 44碱式苯甲酸铁盐（碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀赭色沉淀）COOH稀盐酸 白色45供试品供试品+ 稀盐

18、酸稀盐酸0.1mol/L亚硝酸钠亚硝酸钠碱性碱性 - -萘酚试液萘酚试液橙黄色橙黄色到到猩红色猩红色沉淀沉淀3.3.芳香第一胺类芳香第一胺类 46反应原理：-奈酚试液要现奈酚试液要现用现配用现配 不同的供试品，不同的供试品，会生成橙黄色到会生成橙黄色到猩红色沉淀猩红色沉淀 47药典原文 鉴别方法：取供试品约取供试品约50mg50mg，加稀盐酸，加稀盐酸1ml1ml，必，必要时缓缓煮沸使溶，放冷，加要时缓缓煮沸使溶，放冷，加亚硝酸钠亚硝酸钠溶液溶液（0.1mol/L0.1mol/L）数滴，滴加）数滴，滴加碱性碱性-萘酚萘酚试液数滴，视试液数滴，视供试品不同，生成供试品不同，生成橙黄色到猩红色沉淀

19、橙黄色到猩红色沉淀。484.4.无机金属盐无机金属盐（Na, K, Ca, NH4+)P1112 焰色反应：焰色反应：Na显鲜黄色显鲜黄色；K显紫色显紫色；CaCa显砖红色显砖红色 铵盐：铵盐： 供试品供试品 + NaOH 氨气氨气使湿润的使湿润的红色红色石蕊石蕊试纸变试纸变蓝蓝使硝酸亚汞试液湿使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显润的滤纸显黑色黑色49505. 无机酸根无机酸根 氯化物：氯化物：Cl- + Ag+ AgCl 白色乳状白色乳状 Cl- + MnO2 Mn2+ + Cl2 硫酸盐：硫酸盐： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色白色 SO42- + Pb2+ PbSO4 白色白色 加盐酸

20、，无白色沉淀加盐酸，无白色沉淀 H2SO4使湿润的使湿润的KI_ _淀淀粉试纸粉试纸变蓝变蓝51三、专属鉴别试验 （specific identification test） 是证实是证实某一种某一种药物的依据。药物的依据。 根据根据同同类药物中类药物中每一种每一种药物化学结构的差异理化特性，药物化学结构的差异理化特性，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。 方法收载于方法收载于药典药典正文或国家药品标准各药品质量标准正文或国家药品标准各药品质量标准鉴别项下。鉴别项下。52共性丙二酰脲-CONHCONHCO- 可与某些金属离子（Ag+、

21、Cu2+、Hg2+等）反应呈色或产生沉淀巴比妥类药物巴比妥类药物R+2AgNO3+2HNO3一般鉴别试验一般鉴别试验53与Pb2+反应生成黑色PbS甲醛硫酸反应碘取代反应 专属鉴别试验 硫喷妥钠硫喷妥钠司可巴司可巴比妥比妥苯巴苯巴比妥比妥 5455第三节 鉴别方法一、化学鉴别法一、化学鉴别法二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法 三、色谱鉴别法三、色谱鉴别法56一、化学鉴别法 供试品加入适当的试剂，在一定条件下，发生化学反应，通过产生可观测到的明显现象，来鉴别药物真伪的方法。 化学鉴别法特点 操作简便、反应快速、实验成本低、应用广 但专属性比仪器分析法差分为：1.呈色反应鉴别法2.沉淀生成反应鉴别法3.

22、荧光反应鉴别法4.气体生成反应鉴别法5.试剂褪色的鉴别法 57一、化学鉴别法1.呈色反应鉴别法 供试品加入适当的试剂，在一定条件下，反应生成有色产物三氯化铁三氯化铁呈色反应（酚羟基）呈色反应（酚羟基） 有机氟化物的茜素氟蓝法有机氟化物的茜素氟蓝法 芳香第一胺类重氮化芳香第一胺类重氮化-偶合反应偶合反应582.沉淀生成反应鉴别法 供试品加入适当的试剂，在一定条件下，反应生成沉淀还原性基团的银镜反应还原性基团的银镜反应丙二酰脲类的硝酸银反应丙二酰脲类的硝酸银反应氯化物的银盐沉淀氯化物的银盐沉淀苯甲酸盐类的三氯化铁反应苯甲酸盐类的三氯化铁反应生成氧化亚铜红色沉淀反应生成氧化亚铜红色沉淀反应与重金属离

23、子的沉淀反应与重金属离子的沉淀反应一、化学鉴别法一、化学鉴别法59 3.荧光反应鉴别法药物本身在可见光下发射荧光如：维生素B2溶液显蓝色荧光药物与适当试剂反应后发射荧光如： VB1硫色素（蓝色荧光）硫色素（蓝色荧光）碱性碱性K3Fe(CN)6一、化学鉴别法一、化学鉴别法604.气体生成反应鉴别法大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后加热产生氨气。红色石蕊试纸变蓝硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色一、化学鉴别法一、化学鉴别法61化学结构含硫药物，可经强酸处理后加热产生硫化氢气体硫鸟嘌呤硫鸟嘌呤7H2O强酸强酸H2S（臭鸡蛋气味）（臭鸡蛋气味）使醋酸铅试纸变黑使醋酸铅试纸变黑6

24、2含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸汽含醋酸酯和乙酰胺类的药物，经硫酸水解后，含醋酸酯和乙酰胺类的药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。63一、化学鉴别法5.5.试剂退色试剂退色 维生素维生素C C与二氯靛酚反应与二氯靛酚反应64（6 6）测定生成物熔点法）测定生成物熔点法 制备衍生物测定熔点法制备衍生物测定熔点法 药物试剂药物试剂 新化合物有一新化合物有一定定mp;mp; 药物酸化或碱化生成游离酸或碱。药物酸化或碱化生成游离酸或碱。 操作繁琐费时间，应用较少。操作繁琐费时间，应用较少。一、化学鉴别法651.紫外光谱紫外光谱（UV）2.红外光谱红外光谱（

25、IR）二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法66二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法1.紫外光谱紫外光谱 是通过测定药物在紫处-可见光区（200760nm）的吸收光谱特征对药物进行鉴别的方法。用紫外光源测定无色物质的方法-紫外分光光度法；紫外光的波长范围是200400nm 用可见光光源测定有色物质的方法-可见光光度法。可见光400760nm 671）测定原理： 含有共轭体系的有机药物在紫外-可见光区有特征吸收，可根据药物的吸收光谱特征，如吸收光谱的形状、最大吸收波长、吸收峰数目、各吸收峰的位置、强度和相应的吸收系数等进行分析，最大吸收波长和吸收系数是鉴别药物的常用参数。 紫外光谱法操作简便、快速。 用作鉴别的专

26、属性远不如红外光谱法。 紫外光谱相同的物质不一定是同一种物质。682）紫外光谱法紫外光谱法鉴别鉴别常常用用的方法的方法 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长； 规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度；规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度； 规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸收系数法； 规定吸收波长和吸光度比值法；规定吸收波长和吸光度比值法； 经化学处理后经化学处理后, 测定其反应产物吸收光谱特性测定其反应产物吸收光谱特性以上方法可单用，也可几个结合起来使用，以提高专属性以上方法可单用，也可几个结合起来使用，以提高专属性 69测定最大吸

27、收波长测定最大吸收波长, ,或同时测定最小吸收波长或同时测定最小吸收波长布洛芬全波长扫描图布洛芬全波长扫描图70 规定吸收波长和吸光度比值法规定吸收波长和吸光度比值法两性霉素在两性霉素在362nm362nm、381nm381nm、405nm405nm波长处有最大吸收波长处有最大吸收. . 规定规定362nm362nm/ /381nm381nm处吸光度比值不大于处吸光度比值不大于0.60.6 381nm381nm/ /405nm405nm波长比值不大于波长比值不大于0.90.9VBVB1212 361nm/278nm 1.70 361nm/278nm 1.701.881.88 361nm/550

28、nm 3.15 361nm/550nm 3.15 3.453.45 71 与对照品比较与对照品比较, ,对比吸收光谱的一致性对比吸收光谱的一致性72规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度；规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度；Ch.P示例示例一一 盐酸布比卡因的鉴别试验盐酸布比卡因的鉴别试验0.40mg/ml ：max: 263nm、271nm A: 0.530.58;0.430.48规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度示例二示例二 地蒽酚的鉴别试验地蒽酚的鉴别试验max: 257nm、289nm、 356nmA257/ A289=1.

29、061.10A356/ A289=0.900.94规定最大吸收波长和吸光度比值法规定最大吸收波长和吸光度比值法73示例示例 氯贝丁酯的鉴别试验氯贝丁酯的鉴别试验 0.10mg/ml max: 280nm、288nm 10g/ml max: 226nm规定一定浓度下的供试液的最大吸收波长规定一定浓度下的供试液的最大吸收波长74USP USP 采用对照品法采用对照品法 供试药与其对照品按同一方法处理，在同样条件下供试药与其对照品按同一方法处理，在同样条件下紫外光谱图一致。紫外光谱图一致。BP BP 规定一定波长范围内，仅有一个最大或最小吸规定一定波长范围内，仅有一个最大或最小吸收收 JP JP 与

30、与Ch.PCh.P相似相似 3）各国紫外鉴别法比较）各国紫外鉴别法比较752.红外光谱法1）原理IR光谱法是有机药物分子的振动-转动光谱，能反映药物分子的 结构特点，分子中每个基团一般都由相应的吸收峰，且特征性强，（除光学异构体及长链烷烃同系物外）几乎没有两种化合物具有完 全相同的红外吸收光谱，即红外吸收光谱具有“指纹性” ，被广泛地应用于化合物的鉴别。 专属性强、准确度高的特点，应用广（固、液、气） 主要用于组分单一、结构明确的原料药以及结构相近的同类物质。二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法76特征区 4000 1300cm-1疏，易辨认指纹区 1300400cm-1密，高度敏感77 标准图谱法：

31、Ch.P要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与药品红外光谱集中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。 对照品法：将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，彼此对比是否一致的方法。可消除不同仪器和操作条件造成的误差。2）红红外光谱法外光谱法鉴别鉴别常常用用的方法的方法783）试样的制备方法试样的制备方法 压片法压片法供试品（约供试品（约1mg) + 干燥干燥KBr/KCl (约约200mg) 研磨均匀研磨均匀 （玛瑙研钵）（玛瑙研钵） 置压膜中置压膜中真空真空加压至加压至0.8-1GPa2-3min均匀透明片均匀透明片无明显颗粒无明显颗粒供试片供试片同法制

32、空白同法制空白KBr/KCl片，做空白校正，扣除背景干扰片，做空白校正，扣除背景干扰79 糊法糊法供试品（约供试品（约5mg ）,滴加少量液体石蜡或其他液体滴加少量液体石蜡或其他液体制成糊状物制成糊状物玛瑙研钵玛瑙研钵 取适量取适量 夹于两个夹于两个KBr片片（150mg/片）片）之间之间供试片供试片KBr（约（约300mg）制成空白片，作背景校正）制成空白片，作背景校正80 4 4）各国红外光谱法比较各国红外光谱法比较Ch.P Ch.P 采用标准图谱对照法采用标准图谱对照法BP BP 采用标准图谱对照法、对照品法采用标准图谱对照法、对照品法USP USP 采用对照品法采用对照品法JP JP

33、规定条件下测定一定波长处特征吸收峰。规定条件下测定一定波长处特征吸收峰。81三、色谱鉴别法三、色谱鉴别法 利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自的特利用不同物质在不同的色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（保留时间，比移值）进行的鉴别试验。征色谱行为（保留时间，比移值）进行的鉴别试验。 常采用对比法常采用对比法 与对照品、已知药品，在相同条件下进行色谱分离与对照品、已知药品，在相同条件下进行色谱分离并比较。并比较。lTLClHPLClGC82三、色谱鉴别法三、色谱鉴别法 1 1. .薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法(TLC) (TLC) 1)1)原理原理 薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本

34、低等优点。薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。 在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法。在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法。Ch.pCh.p（20201010）一部，）一部，40004000项左右。项左右。 通过通过R Rf f值，斑点颜色进行定性。值，斑点颜色进行定性。832 2）薄层色谱鉴别基本操作薄层色谱鉴别基本操作薄层板的制备：薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起的凹坑和龟裂。薄层板活化：不同薄层活化条件略有不同，如：硅胶 110 1h氧化铝 110 30min点样：药典规定：点样基线距底边2.0cm，样点直径24mm，点间距离约为1.

35、5-2.0cm。要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 饱和及展开：点样并将样品点晾或吹干后，先将板放入展开室内，但不要浸入展开剂，预先饱和一段时间，再放入展开剂展开（一般上行），薄层板水平角度以75为最佳。展开距离一般为10-15cm。（5）检视：物理方法紫外光下显示荧光或荧光淬灭 化学方法加化学试剂显色，要求显色稳定、持久、专属、灵敏、线性良好。84三、色谱鉴别法三、色谱鉴别法2 2. .HPLCHPLC、GCGC色谱分析法色谱分析法 供试品和对照色谱峰保留时间一致。供试品和对照色谱峰保留时间一致。在鉴别试验中，通常含量测定同时用于鉴别的一种方法。在鉴别试验中，通常

36、含量测定同时用于鉴别的一种方法。85色谱谱鉴别法小结色谱谱鉴别法小结 适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别, ,具具有分离、分析同时进行的特点有分离、分析同时进行的特点. . 高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(HPLC)、气相色谱法、气相色谱法(GC)(GC)供试品和对照品色谱峰保留时间一致供试品和对照品色谱峰保留时间一致. . 薄层扫描法薄层扫描法(TLC)(TLC)对照品比较法，供试品对照品比较法，供试品斑点与对照品的斑点与对照品的R Rf f值及斑点的颜色应一致值及斑点的颜色应一致. .色谱法（色谱法（ HPLC GC TLC)HPLC G

37、C TLC)86四、四、药物鉴别方法新动向药物鉴别方法新动向1 1、仪器方法用于药物鉴别的数量大大增加，、仪器方法用于药物鉴别的数量大大增加， USP USP、BP BP 仪器鉴别法：化学鉴别法（仪器鉴别法：化学鉴别法（2:12:1） BP BP ：主要用：主要用TLCTLC USP USP：HPLCHPLC2 2、原料原料广泛采用广泛采用IRIR法鉴别法鉴别87第四节第四节 鉴别试验条件鉴别试验条件一、溶液的浓度一、溶液的浓度 溶液的浓度溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；（如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中法中max, A, E1%1cm)二、溶液的温度二、溶液的温度 温度温度过高过高可使产物分解，导致颜色变浅，沉淀溶解，甚至观察可使产物分解，导致颜色变浅，沉淀溶解，甚至观察 不到结果，故试验中应注意温度的控制。不到结果，故试验中应注意温度的控制。88 三、溶液的酸碱度三、溶液的酸碱度 许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下进行，溶液的酸许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下进行，溶液的酸碱度能够使各反应物有足够的浓度处于活化状态、使反应产物处碱度能够使各反应物有足够的浓度处于活化状态、使反应