免疫增殖病及检测

1、免疫增殖病及检测免疫增殖病及检测 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科 彭奕冰彭奕冰 免疫增殖性疾病的免疫损伤机制免疫增殖性疾病的免疫损伤机制 免疫球蛋白异常升高的临床疾患免疫球蛋白异常升高的临床疾患 免疫球蛋白异常升高的常用的免疫检测方法免疫球蛋白异常升高的常用的免疫检测方法 概述概述 免疫增殖病免疫增殖病( (immunoproliferativeimmunoproliferative disease): disease):是指淋巴系统异常增殖所引起的疾病。是指淋巴系统异常增殖所引起的疾病。 按细胞表面标志分类的免疫增殖性疾病按细胞表面标志分类的免疫增殖

2、性疾病细胞标志细胞标志 疾病疾病 T 细胞细胞 急淋急淋 淋巴母细胞淋巴瘤淋巴母细胞淋巴瘤 部分非霍奇金淋巴瘤部分非霍奇金淋巴瘤 B 细胞细胞 浆细胞病浆细胞病 大多数淋巴细胞淋巴瘤大多数淋巴细胞淋巴瘤 组织组织-单核细胞单核细胞 急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病 裸细胞裸细胞 急淋急淋 其他其他 霍奇金病霍奇金病 毛细胞白血病毛细胞白血病 免疫增殖性疾病的免疫损伤机制免疫增殖性疾病的免疫损伤机制 一、浆细胞异常增殖一、浆细胞异常增殖骨髓瘤患者的骨髓体外培养骨髓瘤患者的骨髓体外培养瘤细胞自发性瘤细胞自发性增殖，培养上清液瘤细胞所分泌的增殖，培养上清液瘤细胞所分泌的IL-6IL-6明显明显。

3、抗抗IL-6IL-6抗体能消除瘤细胞的自发增殖，抗体能消除瘤细胞的自发增殖，IL-6IL-6为骨髓瘤自分泌增殖因子为骨髓瘤自分泌增殖因子 。IL-6IL-6 IL-4IL-4二、正常体液免疫抑制二、正常体液免疫抑制 三、异常免疫球蛋白增生所造成的病理三、异常免疫球蛋白增生所造成的病理 损伤损伤 四、溶骨性病变四、溶骨性病变免疫球蛋白异常升高的临床疾患：免疫球蛋白异常升高的临床疾患： 恶性单克隆丙种球蛋白病恶性单克隆丙种球蛋白病 多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤 巨球蛋白血症巨球蛋白血症 重链病重链病 轻链病轻链病 良性单克隆丙种球蛋白病良性单克隆丙种球蛋白病 非特异性免疫球蛋白增殖症非特异性免疫球蛋白

4、增殖症单克隆丙种球蛋白病的突出特点是患者血单克隆丙种球蛋白病的突出特点是患者血清存在异常增多的单克隆蛋白清存在异常增多的单克隆蛋白( (monoclonalprotein,Mmonoclonalprotein,M蛋白蛋白) )，其理化性质，其理化性质十分均一，但是多无免疫活性，所以又称十分均一，但是多无免疫活性，所以又称副蛋白副蛋白( (paraproteinparaprotein) )。常见免疫球蛋白增殖病常见免疫球蛋白增殖病一、多发性骨髓瘤一、多发性骨髓瘤免疫球蛋白免疫球蛋白: : IgMIgM IgGIgG IgAIgA IgEIgE IgDIgD 重链重链 轻链轻链 (kappa) (

5、kappa) (lamda(lamda) ) “轻链失衡理论轻链失衡理论”的提出的提出 浆细胞产生浆细胞产生IgIg模式图模式图轻链轻链 214 214aaaa 10 10重链重链 450-570 450-570aaaa 18 18 轻链的代谢轻链的代谢 肾脏肾脏10% 10% 排出排出90%90%肾小管降解、重吸收肾小管降解、重吸收游离轻链等电点游离轻链等电点PH5.9PH5.9与肾小管与肾小管PHPH接近接近肾小管损害肾小管损害18731873年年 RutzkyRutzky首先报道多发性骨髓瘤首先报道多发性骨髓瘤并命名。并命名。 1900 1900年年 WrightWright证实其瘤细胞

6、为浆证实其瘤细胞为浆细胞，故又称为浆细胞骨髓瘤。细胞，故又称为浆细胞骨髓瘤。在免疫增殖病中较常见，发病率（在免疫增殖病中较常见，发病率（2 24 4）例）例/10/10万人。万人。 临床表现临床表现 骨骼表现骨骼表现 肾脏表现肾脏表现 血液学表现血液学表现 高粘滞度综合征高粘滞度综合征 易感染性易感染性 淀粉样变淀粉样变 其他其他 多发性骨髓瘤临床分型多发性骨髓瘤临床分型 IgGIgG：多见，占多见，占50%50%60%60%，又分，又分IgG1IgG1、IgG2IgG2、IgG3IgG3、 IgG4 IgG4型。典型症状。型。典型症状。 IgAIgA：占占25%25%，又分，又分IgA1Ig

7、A1、IgA2IgA2型。高黏综合征多见。型。高黏综合征多见。 IgDIgD：很少见，仅占很少见，仅占1.5%1.5%，瘤细胞分化较差，几乎，瘤细胞分化较差，几乎100%100% 生存期短。生存期短。 IgM(7S)IgM(7S)：少见，易发生高粘滞血症或雷诺氏现象少见，易发生高粘滞血症或雷诺氏现象 IgEIgE：很罕见。很罕见。 非分泌型：溶骨病变较少，神经系统症状多见非分泌型：溶骨病变较少，神经系统症状多见检验项目检验项目 一、血清免疫球蛋白定量一、血清免疫球蛋白定量 IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM二、血、尿轻链的定量二、血、尿轻链的定量 、链链免疫浊度测定分类免疫浊度测定分类透

8、射浊度法透射浊度法散射浊度法散射浊度法透射浊度法和散射浊度法的光路透射浊度法和散射浊度法的光路检测器检测器A(透射浊度法)检测器检测器B( (散射浊度法散射浊度法) ) I0I浑浊浑浊样品样品光源光源免疫浊度测定分类免疫浊度测定分类终终 点点 法法速速 率率 法法321TimeScatter抗体加入后测定速率速率散射法1. 加入缓冲液 2. 加入样本 3. 加入抗体Rate抗原浓度抗原浓度测定范围测定范围抗体抗体过剩过剩抗原抗原过剩过剩Ag * Ab抗原抗体的平衡抗原抗体的平衡平衡点平衡点 三、血清区带电泳三、血清区带电泳HYDRASYS电泳电泳 点样舱点样舱控制面板控制面板染脱色舱染脱色舱全

9、自动电泳仪主要特点全自动电泳仪主要特点 1.1.琼脂糖凝胶作为电泳介质琼脂糖凝胶作为电泳介质 2.2.采用国际专利的一次性加样梳采用国际专利的一次性加样梳 3.3.电泳速度快电泳速度快 4.4.自动进行点样、孵育、染色、脱色、干燥自动进行点样、孵育、染色、脱色、干燥 5.5.所有胶片可长期保存所有胶片可长期保存 6.6.可做项目丰富，达可做项目丰富，达1616项项phoresis一次性加样梳 一次性加样梳是法国SEBIA公司独创的国际专利产品, 具有加样量准确、均匀、样品使用量少，每次(10l）。绝对没有样品间交叉污染。 （一次性加样梳在试剂盒中配备）。 电泳介质为琼脂糖凝胶。 注意每次使用时

10、胶片的正面永远面对自己 操作中,不要碰触胶片的正面.肝肝 硬硬 化化胃胃 肠肠 道道 蛋蛋 白白 缺失缺失肾肾 病病 综综 合合 症症急急 性性 炎炎 症症 期期升高：各类急性炎症、感染、组织损伤、升高：各类急性炎症、感染、组织损伤、坏死、恶性肿瘤、口服避孕药时坏死、恶性肿瘤、口服避孕药时慢慢 性性 炎炎 症期症期升高：升高：各类急性炎症、感染、组织损伤、各类急性炎症、感染、组织损伤、坏死、恶性肿瘤、口服避孕药时坏死、恶性肿瘤、口服避孕药时多多 克克 隆隆 抗抗 体体 增增 生生 症症 四、免疫电泳四、免疫电泳 五、免疫固定电泳五、免疫固定电泳六、冷球蛋白检测巨球蛋白血症巨球蛋白血症( (ma

11、croglobulinemiamacroglobulinemia) ) 不同于浆细胞瘤和其他浆细胞恶性增不同于浆细胞瘤和其他浆细胞恶性增殖的临床疾病，与淋巴瘤疾病相似，表现殖的临床疾病，与淋巴瘤疾病相似，表现为淋巴结、肝脾肿大。为淋巴结、肝脾肿大。 本病骨髓侵润、骨质破坏、骨痛骨折本病骨髓侵润、骨质破坏、骨痛骨折表现少，主要表现为骨髓外侵润（淋巴结表现少，主要表现为骨髓外侵润（淋巴结、肝脾肿大）。五聚体的、肝脾肿大）。五聚体的IgM(19S)IgM(19S)异常增异常增高高 血粘滞度过高综合征。血粘滞度过高综合征。起病隐匿，进展缓慢起病隐匿，进展缓慢 细胞异常增殖所致症状：细胞异常增殖所致症状

12、：最常见的症状最常见的症状-疲劳、乏力、体重减轻疲劳、乏力、体重减轻M M蛋白所致症状蛋白所致症状 10%10%30%30%患者出现本周蛋白，但发生肾损患者出现本周蛋白，但发生肾损害者较少仅害者较少仅20%20%。免疫学检查免疫学检查 血清免疫电泳示单克隆血清免疫电泳示单克隆IgMIgM增高，一般增高，一般1010g/Lg/L，是该病的特点。是该病的特点。 其他其他可能存在冷球蛋白，类风湿因子或冷凝集可能存在冷球蛋白，类风湿因子或冷凝集素。素。发病年龄大、血清中单克隆发病年龄大、血清中单克隆IgMIgM10g/L10g/L和和骨髓中淋巴细胞样浆细胞浸润是该病诊骨髓中淋巴细胞样浆细胞浸润是该病诊

13、断的必要依据。断的必要依据。 轻链病轻链病 是突变的单克隆浆细胞产生的大量轻链是突变的单克隆浆细胞产生的大量轻链，血浆及尿中轻链含量异常增加。，血浆及尿中轻链含量异常增加。部分过多的轻链蛋白沉积于肾脏和其他内部分过多的轻链蛋白沉积于肾脏和其他内脏组织引起淀粉样变性。脏组织引起淀粉样变性。本病发病年龄较轻，常以发热、贫血、严本病发病年龄较轻，常以发热、贫血、严重的肾功能损害为主要症状。重的肾功能损害为主要症状。免疫学检测：血清中免疫学检测：血清中IgIg水平可明显降低或水平可明显降低或处于正常低限，但有异常的轻链水平升高处于正常低限，但有异常的轻链水平升高，/型比值明显异常，血清及尿中往型比值明

14、显异常，血清及尿中往往可同时检测出相同类型的往可同时检测出相同类型的IgIg轻链片段。轻链片段。重链病重链病根据重链的类别分类，目前已报道了根据重链的类别分类，目前已报道了 、 、 、 四种重链病，但四种重链病，但 型极为罕见。型极为罕见。 3种重链病的特征特点 HCD HCDHCD好发年龄（岁）平均50岁1030岁成年（中老年）临床特点淋巴结肿大、肝脾肿大、腭（悬雍）垂红肿、细菌感染贫血等吸收不良征候群、散腹部淋巴结肿大、呼吸道炎症等。内脏淋巴结肿大组织特征易变，多形态淋巴样细胞在淋巴结和骨髓中浸润小肠和肠系膜淋巴结有淋巴样细胞浸润骨髓浆细胞有空泡，常以淋巴样细胞出现乙酸纤维膜电泳不均一的小

15、M峰M带可有，多数不明显正常或低丙种球蛋白血症血清免疫电泳自由链80%有自由链自由 链本周蛋白无无多数有，属链骨质破坏罕见无约1/3有预后不良，死于细菌感染良好慢性淋巴细胞型较好疗效评价及预后监测疗效评价及预后监测IgGIgG重链病预后较差，患者死于细菌感染，重链病预后较差，患者死于细菌感染，通常在几个月至通常在几个月至5 5年之内病情进行性恶化。年之内病情进行性恶化。IgAIgA重链病预后较好。重链病预后较好。IgMIgM重链病至今仅发现重链病至今仅发现1919例。例。IgDIgD重链病仅见重链病仅见1 1例。例。 四种浆细胞疾病的比较疾病多发性骨髓瘤巨球蛋白血症重链病轻链病性别男60%男8

16、0%男100%男50%视力障碍+-+淋巴结肿大少见多见多见多见肝脾肿大少见多见多见少见溶骨性改变多见少见不见少见肾功能损害+-+M蛋白种类IgG，IgA，IgD 或EIgM重链（，或）轻链（，）诊断后平均生存期2年4年1年型：2年型：1年良性单克隆丙球蛋白病良性单克隆丙球蛋白病-又名原因不明的单克隆丙球蛋白又名原因不明的单克隆丙球蛋白病，血中出现单克隆丙球蛋白，但不伴有病，血中出现单克隆丙球蛋白，但不伴有浆细胞恶性增殖。浆细胞恶性增殖。 此病发病率明显与年龄有关：此病发病率明显与年龄有关：KochwaKochwa报道报道 2121岁以上献血员发病率岁以上献血员发病率0.10.10.3%0.3%

17、 70 70岁以上发病率岁以上发病率3%3% 90 90岁以上发病率岁以上发病率14% 14% 241241例例BMG 20BMG 203535年跟踪年跟踪结果：稳定者结果：稳定者4646例（例（19%19%）；）； 死亡者死亡者113113例（例（47%47%）；）； M M蛋白增高（蛋白增高（3030g/Lg/L），），但未发但未发 生其他疾病者生其他疾病者2323例（例（9.5%9.5%）；）； 发展为恶性疾病者发展为恶性疾病者5959例（例（24.5%24.5%）：）： 多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤3939例、巨球蛋白血症例、巨球蛋白血症7 7 例、恶性淋巴增殖性疾病例、恶性淋巴增殖性疾病

18、5 5例、系统例、系统 性淀粉样变性淀粉样变8 8例例 此病无恶变时无需特殊治疗此病无恶变时无需特殊治疗恶性与良性单克隆丙种球蛋白病的鉴别诊断恶性单克隆丙种球蛋白病恶性单克隆丙种球蛋白病良性单克隆丙种良性单克隆丙种球蛋白病球蛋白病症状症状骨髓瘤或淋巴瘤的症状骨髓瘤或淋巴瘤的症状无症状无症状贫血贫血几乎都出现几乎都出现一般无一般无骨损害骨损害溶骨性损害很普遍溶骨性损害很普遍不常见不常见骨髓象骨髓象浆细胞浆细胞10%10%，形态正常，形态正常或异常或异常浆细胞浆细胞10%10%，形，形态一般正常态一般正常M M蛋白蛋白常高于常高于2020g/dlg/dl低于低于2020g/dlg/dl正常正常IgIg降低降低增高或正常增高或正常游离轻链游离轻链 常出现常出现阴性阴性病人病人 IgGIgG IgAIgA IgMIgM KAP LAM K/L KAP LAM K/L（g/l)g/l)姓名姓名 8 815 0.8515 0.853.0 0.53.0 0.52.5 2.5 1.721.723.83 0.813.83 0.811.92 1.471.92 1.472.952.95 顾佩佩顾佩佩46.246.2 0.23 0.17 0.26 16.80 0.23 0.17 0.26 16.80 0.020.02 陈国良陈国良7.36 0.31 7.36 0.31 26.9026