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文档简介
1、RNA 的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤一、实验目的掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和。二、实验原理RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用 1.0%-1.4%的凝胶,不同的 RNA 条带也能 ,但无法 其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA 的泳动率才与分子量的对数呈线性 。因此要测定 RNA 分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总 RNA 样品完整性时,配制普通的 1%琼脂糖凝胶即可。三、实验材料、器具及药品蘑菇的总 RNA 溶液。 电泳仪,电泳槽,天平,移液器,枪头,微波炉,紫外透射检测仪等。 琼脂糖,1XTAE 电泳缓冲液,0.5g/ml 溴化乙锭(E
2、B)10X 载样缓冲液。四、实验步骤(1) 用 1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加 1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。(2) 在超净工作台上,用移液器吸取总 RNA 样品 4l 于 膜上。在实验台上再加入 5l 1×TAE 电泳缓冲液及 1l 的 10X 载样缓冲液,混匀后, 加入点样孔。(3)打开电源开关,调节电压至 100V,使 RNA 由负极向正极电泳,约 30min 后将凝胶放入 EB 染液中染色 5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。RNA 的变性琼脂糖凝胶检测试剂:(1)MOPS 缓冲液(10*):0.4mol/
3、L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0),0.1mol/L NaAc,10mol/L EDTA。(2)上样:50%甘油,1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝,0.4%二甲苯蓝。(3)甲醛。(4)去离子甲酰胺。v 电泳槽:去污剂洗干净(浸泡过夜)水冲洗乙醇干燥3%H2O2 灌满室温放置 10 分钟0.1%DEPC 水冲洗。操作:(1) 将制胶用具用 70%乙醇冲遍,晾干备用。(2) 配制琼脂糖凝胶。称取 0.5g 琼脂糖,置干净的 100ml 锥形瓶中,加入 40ml 蒸馏水,微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至 60-70 ,依次向其中加入 9ml 甲醛、5ml 10X MOPS 缓冲液和 0.5ul 溴化乙锭,混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。(3) 样品准备: 取 DEPC 处理过的 500ul 小离心管,依次加入如下试剂: 10x MOPS 缓冲液 2ul,甲醛 3.5ul,甲酰胺(去离子)10ul,RNA 样品 4.5ul,混匀。 将离心管置于 60水浴中保 10 分钟,再置冰上 2 分钟。 向管中加入 3ul 上样,混匀。(4)上样。(5)
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