ymvkt rna实验技术琼脂糖凝胶电泳_第1页
ymvkt rna实验技术琼脂糖凝胶电泳_第2页
ymvkt rna实验技术琼脂糖凝胶电泳_第3页
ymvkt rna实验技术琼脂糖凝胶电泳_第4页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、RNA 的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤一、实验目的掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和。二、实验原理RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用 1.0%-1.4%的凝胶，不同的 RNA 条带也能 ，但无法 其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA 的泳动率才与分子量的对数呈线性 。因此要测定 RNA 分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总 RNA 样品完整性时，配制普通的 1%琼脂糖凝胶即可。三、实验材料、器具及药品蘑菇的总 RNA 溶液。 电泳仪，电泳槽，天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE 电泳缓冲液，0.5g/ml 溴化乙锭（E

2、B）10X 载样缓冲液。四、实验步骤（1） 用 1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加 1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。（2） 在超净工作台上，用移液器吸取总 RNA 样品 4l 于 膜上。在实验台上再加入 5l 1×TAE 电泳缓冲液及 1l 的 10X 载样缓冲液，混匀后， 加入点样孔。（3）打开电源开关，调节电压至 100V，使 RNA 由负极向正极电泳，约 30min 后将凝胶放入 EB 染液中染色 5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。RNA 的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（1）MOPS 缓冲液（10*）:0.4mol/

3、L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc,10mol/L EDTA。（2）上样：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。（3）甲醛。（4）去离子甲酰胺。v 电泳槽：去污剂洗干净（浸泡过夜）水冲洗乙醇干燥3%H2O2 灌满室温放置 10 分钟0.1%DEPC 水冲洗。操作：（1） 将制胶用具用 70%乙醇冲遍，晾干备用。（2） 配制琼脂糖凝胶。称取 0.5g 琼脂糖，置干净的 100ml 锥形瓶中，加入 40ml 蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至 60-70 ，依次向其中加入 9ml 甲醛、5ml 10X MOPS 缓冲液和 0.5ul 溴化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。（3） 样品准备： 取 DEPC 处理过的 500ul 小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS 缓冲液 2ul，甲醛 3.5ul,甲酰胺（去离子）10ul，RNA 样品 4.5ul,混匀。 将离心管置于 60水浴中保 10 分钟，再置冰上 2 分钟。 向管中加入 3ul 上样，混匀。（4）上样。（5）

人人文库> 全部分类> 应用文书

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论