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文档简介

1、作物育种技术转化体的筛选教 学 目 标种子生产与经营专业教学资源库植物转化体是指导入了外源基因的植物细胞或植株。在遗传转化过程中，外源目的基因在植物受体细胞中的转化频率是相当低的，在大量的受体细胞中，只有一小部分细胞获得了外源DNA，而其中目的基因已被整合到核基因组并实现表达的转化细胞则更加稀少。标记基因是用来区分目的基因转化细胞和非转化细胞的一类特殊基因。按功能分为选择标记基因和报告基因。种子生产与经营专业教学资源库标记基因必须具备以下四个条件：1.编码一种不存在于正常植物细胞中的酶；2.基因较小，可构成嵌合基因；3.能在转化体中得到充分表达；4.检测容易，并且能定量分析。种子生产与经营专业

2、教学资源库细菌筛选标记基因：产物给予细胞产生一种选择压力，致使未转化细胞不能生长、发育与分化。而转化细胞对该标记产生抗性，不影响其生长等，从而将转化细胞选择出来，例如Cat（氯霉素抗性基因）。植物筛选标记基因：强调给转化细胞带上一种标记，起报告和识别作用，故称报告基因。 种子生产与经营专业教学资源库一、选择标记基因主要是一类编码可使抗菌素或除草剂失活的蛋白酶基因。当标记基因被导入受体细胞之后，就会使转化细胞具有抵抗相应抗生素或除草剂的能力，抑制、杀死非转化细胞，转化细胞则能够存活下来正常生长。常用的选择标记基因有：u 抗生素抗性基因卡那霉素抗性基因NPT和潮霉素抗性基因hpt；u 除草剂抗性基

3、因bar基因和epsps等。 种子生产与经营专业教学资源库二、发光或显色报告基因报告基因指其编码产物能够被快速的测定，其是否表达及表达活性可作为外源基因成功导入受体细胞或DNA片段特定功能的一种测量。常用来判断外源基因是否已经成功地导入寄主细胞（器官或组织）并检测其表达活性的一类特殊用途的基因。常用的报告基因有-葡萄糖苷酸酶基因GUS和荧光素酶基因luc等。种子生产与经营专业教学资源库二、发光或显色报告基因GUS酶活性检测GUS使葡萄糖苷酸酶，能催化裂解一系列的葡萄糖苷，产生一系列具有发色基团或发荧光的物质，可用分光光度计、荧光计或组织化学法对GUS活性进行定量和空间定位分析，检测方法简单灵敏。荧光素酶活性检测荧光素酶催化的底物使6羟基喹啉类似物，在镁离子、ATP及氧的作用下酶使底物脱羧，生成激活态的氧化荧光素，发射光子后，转变成常态的氧化荧光素。种子生产与经营专业教学资源库二、发光或显色报告基因绿色荧光蛋白检

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