(完整word版)荧光光度法测定样品中糖精钠含量

1、实验分子荧光光度法测定样品中糖精钠含量一、实验目的1了解分子的电子结构、振动结构和转动结构2. 掌握荧光光谱分析法的基本原理 ,学会利用工作曲线进行荧光定量分析的方法。二、实验原理糖精作为人工合成甜味剂 , 其学名为邻 - 磺酰苯甲酰亚胺 , 分子式为 C7H5 O3NS。糖精为无色到白色结晶或白色晶状粉末 , 在水中溶解度很低 , 易溶于乙醇 , 乙醚 , 氯仿 , 碳酸钠水溶液及氨水中。对热不够稳定 , 无论是在酸性还是在碱性条件下 , 将其水溶液长时间加热则逐渐分解而失去甜味。因糖精难溶于水 , 故常用其钠盐 , 即糖精钠。糖精钠的分子式为 C7H4 O3NSNa· 2HO,它

2、为无色结晶 , 易溶于水 , 不溶于乙醚 , 氯仿等有机溶剂。其热稳定性与糖精类似但较糖精要好 , 其甜度为蔗糖的 200-700 倍。糖精钠已有 80多年的使用历史 , 并广泛用于食品、 医药、日用化工等行业中。 糖精钠被摄入人体后 , 不分解 , 不吸收 , 将随尿排出 , 不供给热能 , 无营养价值。但是近年来国内外一些学者对糖精钠的致癌问题有所争论 , 尤其食用性及安全性越来越引起人们的重视 , 因此我国对糖精钠的使用量做出严格的规定 ( 国标中规定糖精钠用于饮料等食品 , 其最大使用量为 0. 15 5.0g/k g) 。由此看来 , 研究快速、高效的检测糖精钠的方法是十分必要的。目

3、前测定食品中糖精钠的方法很多 , 国标中规定的测定方法有高效液相色谱法、薄层层析法和离子选择电极法。文献报道的测定方法有 : 比色法和紫外吸收分光光度法等。前者中以高效液相色谱法最为理想 , 后者中或需高温反应 , 或需配置大量试剂 , 其分析速度也较慢。1. 荧光产生原理荧光是光致发光。某种物质的分子受到紫外光的激发 , 吸收光能后使电子发生能量跃迁 , 从基态能级跃迁至激发态能级 , 处于激发态的电子很不稳定 , 经过很短的时间后会释放出能量 , 即发出荧光 , 重新回到分子基态。荧光的产生过程 :2. 糖精钠可以用荧光光度法定量测定。 对于稀溶液，在实验条件相同的情况下，同一物质的荧光强

4、度与其浓度成正比。本实验用工作曲线法分析试样中的糖精钠含量。具体方法是：配制一系列不同含量的标准溶液，测其荧光强度，然后以浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制工作曲线。在与标准溶液相同的条件下测未知试样的荧光强度，从工作曲线上即可查出试样中糖精钠的浓度。三、仪器和试剂1. 仪器（ 1） WGY-10型荧光分光光度计 ( 天津港东 )（ 2） 1.00cm石英比色皿（ 3） 10mL 比色管 8个（ 4）吸量管： 1.0ml 1 支 2.0ml 1 支（ 5）洗耳球，烧杯，擦镜纸2. 试剂（ 1）储备标准液 (2.0mg/mL): 精确称取 0.1704g 经120干燥 4h 的糖精钠于小烧杯中

5、, 加去离子水溶解 , 定容至 100mL容量瓶中。（ 2）工作标准液 (0.2mg/mL ): 取上述储备溶液 10.00ml 于一个 100ml容量瓶中，用去离子水稀释定容至刻度摇匀。四、实验步骤1. 糖精钠系列标准溶液及未知试样溶液的配制取 6个 10 mL比色管，用吸量管分别加入 0.0 ，0.4 ， 0.8 ，1.2 ，1.6 ,2.0mL 糖精钠工作标准溶液， 再取 2个10 mL比色管分别加入 1.0mL未知试样溶液， 然后各用去离子水稀释定容至刻度 , 摇匀待测。2 . 启动 WGY-10型荧光分光光度计(1) 将WGY-10型荧光分光光度计度计氙灯置于“ ON”的位置，打开电

6、源开关。(2) 启动连接荧光光度计的计算机后，双击 WGY-10显示图标。静等仪器自检完成，出现喀嚓声音后，显示 WGY-10主窗口后可以测定。3. 发射光谱和激发光谱的绘制在熟悉 WGY-10型荧光分光光度计的性能和操作方法的基础上， 根据本实验所用的标准溶液及未知试样溶液的实际情况，学生自行设计实验参数，测取发射光谱和激发光谱并找出最大发射波长和最大激发波长， 然后打印出光谱图。（其结果是： 最大激发波长为 283nm, 最大发射波长为 410nm, 通带宽 EX1.0nm, 负高压 170, 扫描速度中档。起始波长分别为 250- 350nm 和350- 450nm）4. 合成样品中糖精钠含量的测定根据绘制的发射光谱和激发光谱， 学生自行设计定量分析