大豆异黄酮对前列腺增生大鼠细胞凋亡与增殖的影响

1、大豆异黄酮对前列腺增生大鼠细胞凋亡与增殖的影响Death when it comes will have no denial. Make the night night, and the day day, and you will have a pleasant time of it. 作者：任国峰杨爱青汤凌姜伟伟黄忆明【摘要】目的探讨补充不同剂量大豆异黄酮对前列腺增生大鼠细胞凋亡与增殖的影响。方法应用丙酸睾酮诱导大鼠前列腺增生，对正常对照组、模型组、低剂量(60mgkg-1d-1)、中剂量(120mgkg-1d-1)及高剂量(240mgkg-1d-1)大豆异黄酮组采用免疫组化和原位末端标记技

2、术方法检测bcl2、bax、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞凋亡。结果低、中、高剂量大豆异黄酮组大鼠前列腺湿重及前列腺指数均显著低于模型组;中剂量大豆异黄酮组大鼠前列腺湿重及前列腺指数均显著低于低剂量组，与正常对照组无显著性差异。与模型组相比，中、高剂量大豆异黄酮组大鼠bcl2表达显著降低，bax表达升高，细胞增殖指数显著性降低，而细胞凋亡指数显著性升高，尤以中剂量组效果最为明显()。结论前列腺增生大鼠前列腺组织bcl2和bax的表达调控失衡，大豆异黄酮可能通过调节前列腺组织凋亡基因与抗凋亡基因的表达而抑制前列腺增生。【关键词】大豆异黄酮;前列腺增生;细胞凋亡;免疫组化None but a w

3、ise man can employ leisure well. 【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofsoybeanisoflavoneoncellapoptosisandproliferationofratswithbenignprostatichyperplasia.MethodsRatswithprostatichyperplasiawereinducedbysubcutaneouslyinjectingtestosteronepropionate,immunohistochemicalanalysisandinsituendlabelingw

4、ereusedtoexaminetheexpressionofbax,bcl2,andPCNAinratprostatetissueinthecontrol,themodel,thelow(60mgkg-1d-1),moderate(120mgkg-1d-1)andhighdose(240mgkg-1d-1)ofsoybeanisoflavonegroups.ResultsTheprostatewetweightandprostaticindexinalldosegroupsweresignificantlylowerthanthatofmodelsandthemoderategroupwas

5、thelowestinalldosegroups.Therewerenosignificantdifferencesbetweenthemoderategroupandcontrolgroup.Theexpressionofbcl2andcellproliferationindexinmoderateandhighgroupweresignificantlylowerthanthoseofmodelgroup.Theexpressionofbaxandapoptosisindexinmoderateandhighgroupweresignificantlyhigherthanthoseofmo

6、delgroup.Theeffectofthemoderategroupwasthemostsignificantinalldosegroups.ConclusionsTheexpressionsofbcl2andbaxinprostatictissueofbenignprostatichyperplasiaratsareimbalanced.Soybeanisoflavonemightinhibitprostatichyperplasiabyregulatingtheexpressionsofbcl2andbaxinrats.【Keywords】Soybeanisoflavone;Prost

7、atichyperplasia;Cellapoptosis;ImmunohistochemistryWhen love puts in, friendship is gone. 良性前列腺增生(BPH)的发病机制尚不清楚，近年研究发现前列腺细胞凋亡减少可导致BPH的发生1。目前已知细胞凋亡受多种基因的调控，其中bcl2、bax基因家族备受关注。而饮食成分也与BPH的发病有关。流行病学调查显示2日本人的前列腺体积明显小于美国人，这与东方膳食中含有大量的异黄酮类植物雌激素有关。大豆异黄酮是存在于大豆及其制品中的一类多酚类化合物，是典型的植物雌激素。研究表明3，大豆异黄酮可显著降低正常成年大鼠的前列

8、腺重量，但机制尚不明确(医药学/临床医学论文 )。本研究通过给予BPH模型大鼠不同剂量的大豆异黄酮，探讨其对大鼠前列腺细胞凋亡与增殖的影响，为人们合理摄入大豆异黄酮、防治BPH提供实验依据。Self-confidence is the first requisite to human greatness. 1材料与方法Money is the root of all evil. 1.1实验动物由中国科学院上海实验动物中心提供的斯莱克SPF级健康成年SD雄性大鼠80只，体重180220g。实验期间大鼠喂食无大豆饲料，屏障环境中饲养。实验动物许可证：SCXK(沪)20070005。1.2材料大豆异

9、黄酮：山东三维长润生物有限公司，规格40%，其主要成分含量为：染料木苷32.0%、染料木素0.6%、大豆苷6.2%、大豆黄素0.2%、黄豆苷0.3%、黄豆素苷元0.2%;丙酸睾酮：上海通用药业公司。1.3试剂一抗为兔抗鼠bax(sc526)、兔抗鼠bcl2(sc492)，效价均为1100，美国SantaCruz公司，鼠抗人增殖细胞核抗原(PCNA)单克隆抗体，效价为1200，北京中杉金桥公司;二抗为即用型羊抗鼠IgG、生物素化山羊抗兔IgG及SP试剂盒，北京中杉金桥公司;即用型SABC、细胞凋亡试剂盒、DAB显色剂，武汉博士德公司。1.4方法按内容性质和研究方法的不同可以把论文分为理论性论文、

10、实验性论文、描述性论文和设计性论文. 1.4.1动物分组及实验过程80只大鼠按体重随机分为5组：正常对照组，模型组，低、中、高剂量大豆异黄酮组。除正常对照组外，其余4组大鼠腹部皮下注射丙酸睾酮3mgkg-1d-1，正常对照组注射麻油，连续注射1w。1w后低、中、高剂量组分别按大豆异黄酮60、120、240mgkg-1d-1灌胃，正常对照组和模型组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMCNa)，连续28d后，颈椎脱臼处死大鼠，取出前列腺，用电子天平称取前列腺湿重，并计算前列腺指数前列腺腹叶湿重(mg)/大鼠体重(g)。右侧前列腺腹叶用中性福尔马林固定，石蜡包埋连续切片，分别用于免疫组化检测和原位细胞凋

11、亡标记。北航CMIAS多功能真彩色病理图像分析管理系统进行图像采集。1.4.2免疫组化SABC法检测bax、bcl2切片常规脱蜡至水，灭活内源性酶及修复抗原;滴加正常山羊血清后滴加一抗、二抗，DAB室温显色，苏木素轻度复染。PBS代替一抗作为阴性对照，用bcl2阳性片(鳞状细胞癌)作为bcl2阳性对照，用bax阳性片(增生扁桃体组织)作为bax阳性对照。1.4.3免疫组化SP法检测PCNA根据试剂盒说明书进行操作步骤，PBS代替一抗作为阴性对照，用PCNA阳性片(乳腺癌)作为PCNA阳性对照。增殖指数(PI)：计数PCNA阳性细胞所占细胞总数比例。论文既是探讨问题进行科学研究的一种手段，又是描

12、述科研成果进行学术交流的一种工具. 1.4.4原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡根据试剂盒说明书进行操作步骤，用TBS代替TdT作阴性对照，用已知阳性片作阳性对照。结果判定：细胞核上有棕色颗粒着色为阳性标记。光镜下随机观察510个视野，计数每高倍视野(400)中凋亡细胞平均阳性个数。凋亡指数(AI)：计数凋亡阳性细胞所占细胞总数比例。1.5统计学分析采用SPSS11.0统计软件包建立数据库，以xs表示各定量指标的平均值和分散程度。多个样本均数的比较采用单因素方差分析(ANOVA)检验，两两比较采用LSD检验及2检验Fisher精确概率法进行统计学处理。If you run after

13、 two heares, you will ca. 2结果One ploughs, another sow; who will reap 2.1大鼠前列腺湿重及前列腺指数由表1可见，模型组大鼠前列腺湿重及指数均显著高于正常对照组(P0.05)，低、中、高剂量组大鼠前列腺湿重及指数均显著低于模型组(P0.05)，中剂量组显著低于低剂量组(P0.05)，与正常对照组比较无显著性差异，高剂量组与低剂量组比较，差异无显著性。论文教育信息网 2.2大鼠前列腺组织bcl2和bax的表达由表2可见，模型组bcl2表达显著高于正常对照组(P0.05);中、高剂量组bcl2表达较模型组显著降低(P0.05)，与

14、正常对照组无显著性差异。模型组bax表达显著低于正常对照组(P0.05);中、高剂量组bax表达显著高于模型组(P0.05)，与正常对照组无显著性差异。2.3大豆异黄酮对大鼠前列腺组织细胞PI和AI的影响由表3可知，中、高剂量组AI均显著高于模型组(P0.05)，PI显著低于模型组(P0.05);与正常对照组相比，各剂量组AI均显著降低(P0.05);而中、高剂量组PI与正常对照组已无显著性差异。A man cannot whistle and drink at he same time. 2.4各组大鼠前列腺组织细胞凋亡观察如图1所示，TUNEL检测凋亡阳性细胞的细胞核呈棕黄色，形态上表现为

15、整个细胞和细胞核缩小，但细胞界限尚可区分。正常对照组的阳性细胞与其他各组相比较，数目最多;模型组阳性细胞数目最少;各剂量组之间，中剂量组阳性细胞数目最多，且腺体形态与正常组相似。表1各组大鼠前列腺湿重及前列腺指数与正常组比较：1)P0.05;与模型组比较：2)P0.05;与低剂量组比较：3)P0.05，下表同表2各组大鼠前列腺组织bcl2和bax的表达表3各组大鼠前列腺AI与3讨论A man cannot whistle and drink at he same time. bcl2基因家族是公认的与细胞凋亡密切相关的调控基因，该基因家族包含两类功能相反的基因，一类是抑制细胞凋亡的基因如bcl

16、2，另一类为包含bax等在内的促进细胞凋亡的基因4。BPH组织中bcl2阳性表达高于正常的前列腺5，提示细胞凋亡减少在BPH的发生过程中起到重要的作用。梁江6等认为bcl2和bax的表达比率失衡可造成细胞凋亡调节系统失控，而大豆异黄酮可通过对bcl2和bax表达的影响调节细胞凋亡。本研究说明大豆异黄酮促进细胞凋亡的作用是呈剂量依赖关系的。而更低的剂量，大豆异黄酮则可能发挥相反的作用，如抑制去卵巢大鼠子宫细胞凋亡7。PCNA又称周期蛋白(cyclin)，是一种分子量为36kD的蛋白质，其表达与细胞分化过程有关，近年来它已成为细胞增殖状态的标志物8。本研究结果证实，BPH不仅与细胞凋亡减少有关9，

17、而且与细胞分裂增殖的关系比较密切，即细胞凋亡减少和细胞增殖增加均参与了BPH的发生。正常的前列腺由于增殖的细胞数目和凋亡的细胞数目能够保持动态平衡，存在一定的凋亡率和增殖率，借以维持前列腺的正常形态。We are here to add what we can to life, not to get what we can from it. 给予大豆异黄酮后，前列腺细胞凋亡率明显升高、增殖下降，说明大豆异黄酮可不同程度起到抑制前列腺增生的作用。通过介导bcl2的表达下调和上调bax的表达使bcl2/bax比值降低，可能是大豆异黄酮诱导前列腺增生细胞凋亡的分子机制之一10。大豆异黄酮促进细胞凋亡

18、的机制研究主要集中在抑制酪氨酸激酶和扑异构酶活性、诱导Caspase3的激活等方面11，12。近来研究显示，大豆异黄酮可能通过激活p21cyclinE1/CDK2信号通路，诱导细胞凋亡13。为了明确大豆异黄酮诱导前列腺增生细胞凋亡的机制，尚需要作进一步研究。总之，大豆异黄酮可诱导模型组大鼠前列腺细胞增殖减少，促进大鼠前列腺增生细胞凋亡，使前列腺细胞内环境趋于正常平衡状态，达到抑制大鼠前列腺增生的目的。 【参考文献】1ShariatSF，AshfaqR，RoehrbornCG,etal.Expressionofsurvivinandapoptoticbiomarkersinbenignprost

19、atichyperplasiaJ.JUrol，2005;174(5)：204650.2MasumoriN，TsukamotoT，KumamotoY,etal.JapanesemenhavesmallerprostatevolumesbutcomparableurinaryflowratesrelativetoAmericanmen：resultsofcommunitybasedstudiesin2countriesJ.JUrol，1996;155(4)：13247.3LundTD，RheesRW，SetchellKD,etal.Alteredsexuallydimorphicnucleusof

20、thepreopticarea(SDNPOA)volumeinadultLongEvansratsbydietarysoyphytoestrogensJ.BrainRes，2001;914(12)：929.4WongWW，PuthalakathH.Bcl2familyproteins：thesentinelsofthemitochondrialapoptosispathwayJ.IubmbLife，2008;60(6)：3907.5王龙，杨金瑞，杨罗艳，等.合并前列腺炎的良性前列腺增生组织中Ki67，Bcl2，Bax和caspase3表达及意义J.中南大学学报(医学版)，2008;33(3)：2226.6梁江,肖荣，赵海峰，等.大豆异黄酮配伍叶酸对神经管畸形胎鼠神经细胞中凋亡基因表达的影响J.现代预防医学，2004;31(5)：6713.7薛晓鸥，牛建昭，