大鼠部分胃切除对残肝再生影响的实验研究

1、大鼠部分胃切除对残肝再生影响的实验研究王华a，鄢业鸿b（a.江西中寰医院普外科；b. 南昌大学第一附属医院移植科 南昌 330038）摘要：目的用实验动物模型同时切除肝脏、胃，以探讨部分胃切除对残肝再生的影响。方法选用雄性SD大鼠54只，随机分成68肝叶切除组（A组：n=18），70%胃体部切除并68肝叶切除组（B组：n=18），胃窦部切除并68肝叶切除组（C组：n=18）。各组分别于术后24h，48h，72h分批处死,取肝后称肝重，测肝再生指数，10%福尔马林溶液固定肝脏，HE染色后测肝细胞分裂指数、免疫组化法测肝细胞PCNA（增殖细胞核蛋白抗原）指数。结果 24 h 、48 h B组术后肝

2、再生率增加较慢,与A 组相比，差异有非常显著性意义（P）；两组72 h肝再生率差异有显著性意义（P）。而C组术后肝再生率在不同时间点明显偏低，和A、B组比较，差异均有非常显著性意义（P）。B组术后24h肝细胞分裂指数、残余肝组织 PCNA 标记指数较低，与A组相比，差异有非常显著性意义（P）；两组分别在48h、72h比较，差异无显著性意义（P）。而C组术后肝细胞分裂指数、残余肝组织 PCNA 标记指数在不同时间明显降低，差异均有非常显著性意义（P）。结论 70%胃体部切除后大鼠残肝再生延迟，胃窦部切除后大鼠残肝再生明显受抑。关键词胃切除 肝切除 胃泌素 肝再生Experimental stud

3、y of the affection of partial gastrectomy on remanant hepatic regeneration in ratsWang huaa，yan ye hongb(a. Department of general Surgery ,the Zhonghuan Hospital ,jianxi b.Department of Plantation Surgery ,the First Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang 330038,china）Abstract Objective:

4、 To explore the hepatic regeneration following partial hepatic resection combined with different type of gastriectomy.Methods: Fifty-four male Sprague-Dawley rats were randomized into three groups of eighteen animals each: in each group,68% of the hepatic was resected . Additionally,20% of the gastr

5、ic was resected in group B with 70% of the gastric body and group C with the gastric antrum .Six rats in each group were sacrified for heptic tissue samples on the 24th ,48th , 72nd postoperative hour respectively ; residual liver was weighed ,fixed with 10% formalin, stained with H-E. Liver regener

6、ation rate (LRR) and MI(mitotic index) of liver were examined and PCNA (proliferating cell nuclear antigen) labeling index of hepatocyte was investigated immunohistochemically .Results: LRR increase at 24thh ,48th h in group B was obviously slower than that of group A respectively(P<0.01), differ

7、ence at the values of 72nd h between them was statistically（P）.The values in group C at various time points was quite low，Compared with group A and group B ,the differences were significant (P < 0.01).The level of MI and PCNA labeling index in group B was lower than that in group A significantly

8、(P<0.01);And there was no statistical difference at 48th h, 72nd h respectively between the two groups(P>0.05).The level of MI and PCNA labeling index in group C at various time points postoperatively was lowest compared with the other two groups respectively（P）. Conclusion: The regeneration o

9、f liver is inhibited by resection of the gastric antrum combined with 68 % PH in rats, retarded in the rats by 70% of the gastric body resected combined with 68 % PH. Keywords: gastrectomy hepatectomy gastrin hepatic regeneration胃癌血行转移主要是转移至肝脏，胃癌肝转移的发生率较高，可达4451，目前肝转移的非手术治疗包括全身及局部化疗的效果仍不令人满意，因此手术切除的

10、方法治疗胃癌肝转移仍然得到临床关注。但是在提高肝转移癌手术切除率的同时，不可避免要考虑肝切除后残肝再生问题。本研究通过随机选择三组大鼠动物模型（胃窦部切除并68肝脏切除组、70%胃体切除并68%肝脏切除组、68肝脏切除组）来观测分析比较各组肝再生指数、肝细胞分裂指数、及肝细胞增殖细胞核蛋白抗原(PCNA)指数。通过本实验指导临床上胃癌肝转移时行胃癌根治术联合肝转移癌切除术时的肝脏切除范围。1 材料与方法1.1 实验动物 1.雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠54只，体重为180240g，由南昌大学医学院实验动物中心提供。2环境熟悉1周，术前3天开始建立大鼠TPN模型。3. 营养液组

11、成：50葡萄糖注射液，30脂肪乳剂，7复方氨基酸注射液，微量元素、维生素，每1000 ml营养液中各加一瓶 。按每天175 kca1kg 即 152 mlkg的标准均匀输人营养液。术前3天输入全量，术后第1天输入标准量的13，第 2天输 12，第 3天起输全量。 主要试剂与仪器10%中性福尔马林固定液，大鼠Polymer kit（PV-6004）(福州迈新生物公司)，即用型二步法(非生物素)HRP检测试剂盒(福州迈新生物公司)，彩色病理图像分析系统-日本NIKON，LEICA-RM 2235切片机(德国)，医用微波炉:ID-II(上海中达医学应用仪器厂)，切片漂烘温控仪(上海)，OLYMPUS

12、-Bx60型显微镜(日本)。1.3 方法 A组：68肝脏切除组（n=18），单纯结扎法切除68大鼠肝脏（左外叶、左中叶、右中叶）。B组：70%胃体部切除并68%肝脏切除（n=18），切除70%胃体部(约占全胃25%),再单纯结扎法切除68%大鼠肝脏（左外叶、左中叶、右中叶）。C组：胃窦部切除并68肝脏切除组（n=18），切除胃窦部(约占全胃25%),再单纯结扎法切除68%大鼠肝脏（左外叶、左中叶、右中叶）。术后24h，48h，72h分批处死,取肝后称肝重，测肝再生指数，并将肝标本用10%中性福尔马林溶液固定；HE染色后测肝细胞分裂指数、免疫组化法测肝细胞PCNA（DNA增殖抗原）。察指标与检测

13、方法：肝再生反应活性用肝再生率、肝细胞有丝分裂指数及肝细胞增殖细胞核蛋白抗原(PCNA)指数进行评估。a肝再生率按照Child公式计算确定，即（尸检时的肝重量手术时预计的残肝重量）/切肝的肝重量×100%。bPCNA检测采用免疫组化PV二步法。C肝细胞有丝分裂指数(MI)。肝组织标本石蜡切片行HE 染色, 由不参与实验分组的南昌大学第一附属医院病理科医生在40×10倍显微镜视野下计数30个视野中的肝细胞数及核分裂肝细胞数，最后表示为1000个肝细胞中处于有丝分裂前、中期的肝细胞数, 并以百分数表示。统计学方法：数据用均数±标准差（x±s）表示。采用 SP

14、SS 软件包（11.5 版），应用方差分析SNK-q检验，以 P<0.05、P<0.01 分别表示对比组之间差异具有显著性和非常显著性意义。2 结果 2.1 残余肝组织再生率变化 24 h 、48 h B组术后肝再生率增加较慢,与A 组相比，差异有非常显著性意义（P）；两组72 h肝再生率差异有显著性意义（P）。而C组术后肝再生率在不同时间点明显偏低，和A、B组比较，差异均有非常显著性意义（P）。表2.1 术后不同时间的肝脏再生率 （%）（n=6, x±s）组别 24h 48h 72h A±3.86 B* C*#*#*#注* 与A组相比：P<0.01 ，#

15、与B组相比：P<0.01，与A组相比：P2.2 肝细胞有丝分裂指数 A组术后肝细胞增殖明显，24h即达高峰，而B组、C组术后肝细胞增殖较缓慢，均于术后48h达高峰；B组术后24h肝细胞分裂指数较低，与A组相比，差异有非常显著性意义（P）；两组分别在48h、72h比较，差异无显著性意义（P）。而C组术后肝细胞分裂指数在不同时间明显降低，差异均有非常显著性意义（P）。表2.2 术后不同时间的肝细胞有丝分裂指数（%）（n=6, x±s）组别24h48h72h A B* C*#*#*#注* 与A组相比：P<0.01 ，#与B组相比：P2.3 残余肝组织 PCNA 标记指数变化同肝

16、细胞有丝分裂指数变化表2.3 术后不同时间的肝脏PCNA标记指数（%）（n=6,x±s）组别24h48h72h A± B* C*#*#*#注* 与A组相比：P<0.01 ，#与B组相比：P3 讨论大鼠分泌胃酸的壁细胞主要位于胃体部；胃窦部主要由G细胞及D细胞构成，不分泌胃酸，主要分泌胃泌素及生长抑素。B组实验保留了胃窦部，切除了约70%的胃体部，所以胃酸分泌下降。而胃泌素分泌主要受胃酸的负反馈调节，所以胃泌素分泌会升高。近年来有研究表明2奥美拉唑可以促进正常大鼠肝脏部分切除后肝脏的再生，对肝硬化肝切除后的肝脏亦有促进再生作用，可使肝细胞DNA合成增加、有丝分裂指数提高

17、、肝脏相对重量增加。这种促进肝脏再生的机理，可能是奥美拉唑抑制了胃酸的分泌，反馈刺激内源性胃泌素增加的结果。另外，危重症时机体对应激反应大量释放应激激素3，如促肾上腺皮质激素、糖皮质激素、肾上腺素等，而应激激素的释放又会引起胃肠肽水平的变化。研究表明，肾上腺素能促进GAS、胰高血糖素、生长抑素的释放，同时应激状态下也可引起GAs分泌增加。肝脏受损时自身迷走神经兴奋性增高刺激Gas分泌，而Gas的持续增高使幽门括约肌张力下降，十二指肠液及胆汁返流入胃，使胃窦部的pH值升高，pH值增高又刺激G细胞进一步分泌Gas4。部分胃切除后残胃动力下降，胃排空减缓、胃内压增高的物理性刺激亦促进胃泌素的分泌。B

18、组实验在离断结扎胃左血管时，不可避免地切断了胃迷走神经。迷走神经对胃泌素分泌的影响甚为复杂，陈剑英等5大鼠实验结果表明胃选择性迷走神经切断后血清胃泌素浓度上升了1倍。因此，理论上，70%胃体部切除后胃泌素的分泌是升高的，从而导致本组大鼠术后残肝再生是促进的。实验结果显示： B组与A 组相比,24 h 、48 h B组术后肝再生率有减低,差异有非常显著性意义（P）；两组72 h再生率差异有显著性意义（P）。 B组术后24h肝细胞分裂指数、残余肝组织 PCNA 标记指数与A组相比，差异有非常显著性意义（P），两组分别在48h、72h比较，差异无显著性意义（P）。结果提示，70%胃体切除后可延迟肝切

19、除残肝再生反应、残肝细胞有丝分裂及残肝细胞DNA合成。分析原因：1、该组术后24h肝细胞分裂指数、残余肝组织 PCNA 标记指数较低，肝再生率24 h后升高幅度才开始加快，推测70%胃体部切除的手术打击是肝再生的抑制因素之一；2、Grider等6报导大鼠后胃可以分泌血管活性肠肽，它可通过AMP依赖的蛋白激酶途径在细胞增殖、分化中起着重要的作用；通过鸟氨酸脱羧酶途径使DNA合成加快，促进了细胞的增殖。血管活性肠肽还能促进胰岛素的分泌，间接促进肝再生。大鼠70%胃体切除后血管活性肠肽的分泌是下降的，从而削弱了这一促进肝再生的因素。3、抑胃肽是由小肠上部的K细胞分泌，是生理性的促胰岛素因子，可通过G

20、蛋白耦联受体增加AMP，使Ca2浓度增加，从而促进胰岛素、胰高血糖素分泌进而间接促进肝再生7。胃酸可以通过刺激抑胃肽分泌进而促进胰岛素分泌而间接促进肝再生。而大鼠70%胃体切除后术后胃酸分泌是下降的，从而削弱了这一促进肝再生的因素；4、大鼠生长素主要合成于胃,它的表达和分布在胃内呈梯度变化,胃窦部最低。它是全面促进机体合成代谢的关键激素，调节细胞增殖抑制细胞凋亡，其靶细胞主要是肝及肌细胞8。有实验证明9,胃切除术后血浆生长素水平减少65%。所以70%胃体切除后生长素的分泌是减少的，从而也削弱了这一促进肝再生的因素。很明显，胃窦部切除后胃泌素的分泌是大大下降的。最近有研究表明13，在大鼠肝脏切除

21、后的肝细胞再生中，胃泌素有重要的影响。肝脏部分切除后门脉血中胃泌素浓度明显提高，术后12h达高峰，以后逐渐回落，48h可再出现一个小高峰。胃泌素水平升高后，肝脏重量逐渐增加。有研究认为10外源性胃泌素可提高血清胃泌素浓度，促进肝脏细胞DNA的合成并增加肝脏的重量。因此，C组与A组相比，理论上不同时间点的肝再生指标差异会有显著性；当然C组也不可避免的会有部分胃切除的手术打击、生长素分泌的减少以及血管活性肠肽的减少这些不利于肝再生的因素，另外胃窦部切除后十二指肠液的返流降低了胃液的酸度，亦可能是该组肝再生受抑制的一个因素。C组与B组相比，在手术打击方面是相近的，可比性更强；理论上，C组与B组术后胃

22、泌素的分泌走势是相反的，所以不同时间点的肝再生指标差异也会有显著性。实验结果显示： C组术后肝再生率在不同时间点明显降低,和A、B组比较，差异均有非常显著性意义（P）。 C组术后肝细胞分裂指数、残余肝组织 PCNA 标记指数在不同时间点明显降低,和A、B组比较，差异均有非常显著性意义（P）。实验结果与理论分析是一致的。据此推测胃泌素对肝再生是起促进作用的，也就说明了胃窦部切除后会抑制残肝的再生。胃泌素对肝再生的促进作用是胃泌素的直接作用还是通过胰岛素、胰高血糖素或表皮生长因子间接作用的结果还在进一步研究。参考文献1Miyazaki M, Itoh H，Nakagawa K, et al Hepatation resection of liver metastases from gastric carcinoma. AmY Gastroenterol,1997,92（3）：4904932Rasmussen TN，Jorgensen PE，Almdal et,aleffect of gastrin on liver regeneration after p