化妆品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂

1、附件3:化装品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等 16种紫外线吸收剂及二苯酮的检测方法(征求意见稿)1适用范围本方法规定了化装品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮测定的高效液相色谱法。本方法适用于膏霜类、乳液类、水剂类、唇膏等蜡基类、指甲油类、粉类等化装 品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等16种紫外线吸收剂及二苯酮的含量测定。本方法的检出限、定量下限及取0.1g样品时的最低检出浓度、最低定量浓度见表1 (PBSA和PABA按稀释倍数折算的被测样液总体积为100mL,其它15种目标物按稀释 倍数折算的被测样液总体积为10mL )。表1方法的检出限、定量下限、最低检出浓度和最低定量浓度序号防晒剂名称

2、检出限 (厲/mL)定量下限(pg/mL)检出限g/kg定量限g/kg1苯基苯并咪唑磺酸(PBSA)0.100.300.100.302对氨基苯甲酸(PABA)0.200.600.200.603二苯酮-4和二苯酮-5(Bp4/Bp5)r 0.0300.100.0300.104二苯酮r 0.0300.100.0300.105二苯酮-3 (Bp3)0.0300.100.0300.106p-甲氧基肉桂酸异戊酯(IAMC)r 0.0300.100.0300.1074-甲基苄亚基樟脑(4MBC)0.0300.100.0300.108奥克利林(OC)0.0300.100.0300.109二乙氨基羟苯甲酰基苯

3、甲酸己酯 (DHHB)0.100.300.100.3010甲氧基肉桂酸乙基己酯(EHMC)P 0.0300.100.0300.1011PABA 乙基己酯(OD-PABA)r 0.0300.100.0300.1012水杨酸乙基己酯(EHS)0.0300.100.0300.1013胡莫柳酯(HMS)0.100.300.100.3014丁基甲氧基二苯酰基甲烷(BMDBM)r 0.0300.100.0300.1015乙基己基三嗪酮(EHT)0.0300.100.0300.1016亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚(MBBT)0.0300.100.0300.1017双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 (BEMT

4、)0.0300.100.0300.102方法提要样品经过提取后，用高效液相色谱法测定。以目标物的色谱保存时间和紫外光谱 图与标准物质一致进行定性，以色谱峰的峰面积用标准曲线外标法进行定量计算。必 要时，采用高效液相色谱 -质谱方法 HPLC-MS/MS 进行确证。3. 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。3.1标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、分子量、纯度见附录 A。3.2 甲醇：色谱纯。3.3 甲酸：色谱纯。3.4 异丙醇：色谱纯。3.5标准储藏溶液：分别准确称取各标准物质100 mg 以上质量均精确至0.1 mg于棕 色容量瓶中，苯基苯并咪唑磺酸用1

5、%氨水氨化甲醇溶解后定容至10 mL，其他均用四 氢呋喃溶解后定容至10 mL,配置成浓度为10 mg/mL的标准储藏液于冷藏条件下保存， 保存期限为 6个月。3.6标准溶液的配置：准确移取标准储藏液各 100卩,用甲醇定容至10 mL,配置成100 卩g/m的混合标准溶液，再用甲醇逐级稀释配置 50卩g/mL 20卩g/mL 10卩g/mL 5 卩g/mL 1卩g/m的系列混合标准溶液，用于高效液相色谱法的标准曲线的绘制。系列 标准溶液于冷藏条件下的保存期限为 1个月。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪二极管阵列检测器4.2 高效液相色谱串联四级杆质谱仪 配置 ESI 离子源确证时使用4.

6、3 分析天平：感量 0.0001 g4.4 分析天平：感量 0.00001g。4.5 漩涡混合器。4.6 超声波清洗仪。4.7 离心机。4.8 移液枪或移液器5. 分析步骤5.1 样品预处理称取约0.1 g化装品样品精确至1 mg于15 mL具塞刻度试管中，首先向试管中 参加6 mL四氢呋喃含0.1%氨水，涡旋或超声使样品完全分散。假设不能分散一般适 当超声可解决问题，对超声15 min仍无法分散的样品例如唇膏样品，需用 60 C水 浴，振荡加热约12分钟即可溶解分散。继续向试管中参加甲醇 冰3:1含0.1%氨 水定容至10 mL,涡旋混合。于5000转/别离心5 10 min，取清液，聚丙烯

7、微孔滤 膜过滤，待用。涉及对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸的检测，需取上述待用清液100卩用甲醇稀释至1 mL，用聚丙烯微孔滤膜过滤后，方可上机测试。其他目标化合物的检测视情 况可适当稀释后上机测试，也可无需稀释，将上述待用清液直接上机测试。5.2测定液相色谱分析参考条件色谱条件一：色谱柱：PFP五氟苯基色谱柱，4.6mmX 250 mm I.D., 5 ym柱温：35C 流动相：A 水溶液含0.1%甲酸，B异丙醇：甲醇=1:4 v/v,含0.1%甲酸。流速：1.2 mL/min。检测波长：311 nm和280 nm。进样量：10 yL表2液相色谱别离条件时间，minA，%B，%06832268

8、322.130705158515109015.1010025010025.16832306832色谱条件二：仅水杨酸乙基己酯与胡莫柳酯同时存在时使用色谱柱：C18，4.6mmX250 mm I.D.，5 ym 柱温：35C流动相：A 水溶液含0.1%甲酸，B乙腈含0.1%甲酸。流速：1.5 mL/min。检测波长：311 nm。进样量：10 yL梯度洗脱：020min,线性改变B相比例，从75%增加至100%。校准曲线的制备移取10 y系列标准溶液3.6进行高效液相色谱分析。一般情况下，按照色谱条件一5.2.1 进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积 为纵坐标，制作校准曲

9、线。对水杨酸乙基己酯和胡莫柳酯同时使用的情况，需按照色 谱条件二进行高效液相色谱分析。523样品测定将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱别离谱图与标准物质的 液相色谱别离谱图进行比拟，假设样品谱图中存在保存时间与某标准物质的保存时间一 致的色谱峰，并且其扣除背景后的紫外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致， 那么可确认样品中存在该物质。确证后，样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法 确定。假设待测溶液中目标物的质量浓度超过校准曲线线性范围的上限，须对待测液进 行适当稀释后重新测定。化装品样品中目标物的含量那么按“7项下计算公式计算。6 平行实验按以上步骤操作，对同一样品独立进行

10、测定，获得的两次独立测试结果的绝对差 值不得超过算数平均值的10%。7结果计算W目标物含量， mg/g = -V 10 m式中：打从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度，卩g/mLV样品疋谷积，mL;m称取样品的质量，g。D 稀释倍数不稀释那么取1计算结果保存三位有效数字8. 回收率和精密度加标水平在1.020 mg/g范围内，乙基己基三嗪酮和双乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪的回收率在8090%之间，RSD小于10%n=6。其他15种目标物的回收率在90105% 之间，RSD小于 10 % n=6。9. 色谱图250002500050吸收波长311nm181015202530保存时间(min

11、)图1质谱 图 对应峰 基苯并咪唑60300吸收波长280nm101520保存时间(min)2530(PBSA);苯甲酸(PABA) ; 3、二苯酮-4和二苯酮-5(Bp4/Bp5) ; 4、二苯酮；5、二苯酮-3(Bp3) ; 6、p-甲氧基肉桂酸异戊酯标准物液相色别离谱号：1、苯磺 酸2、对氨基 (IAMC)；7、4-甲基苄亚基樟脑(4MBC) ； 8、奥克利林(OC)； 9、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯 (DHHB) ； 10、甲氧基肉桂 酸乙基己酯(EHMC) ； 11、PABA乙基己酯(OD- PABA) ； 12、水杨酸乙基己酯(EHS) ； 13、胡莫柳酯(HMS) ; 14、

12、丁基甲氧基二苯酰基甲烷 (BMDBM );15、乙基己基三嗪酮(EHT) ; 16、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚(MBBT)；17、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 (BEMT)吸收波长311 nm乙基己酯和胡莫柳酯液相色谱别离谱图对应峰号：1水杨酸乙基己酯EHS ; 2、胡莫柳酯HMS ; 2、胡莫柳酯异构体2水杨酸10. 质谱确证10.1液相色谱别离参考条件色谱柱：PFP五氟苯基色谱柱，4.6 mmx 150 mm I.D., 3叩。流速：0.5 mL/min进样量：2 讥 柱温：25C。流动相：A 水溶液正模式含0.1%甲酸，负模式含0.05%氨水，B甲醇溶液正模式含0.1%甲酸，负模式

13、含0.05%氨水。表3液相色谱别离条件ESI-ESI+时间，minA，%B，%时间，minA，%B，%0554502080355451312883.159513.1010065953001006.1010030.12080901003420809.1554513554510.2质谱参考条件参考质谱谱图见附录 B离子源；电喷雾电离源ESI源检测方式：多反响监测MRM 。雾化气：氮气，35Psi。枯燥气：氮气，流速10 L/min，温度:350 C。碰撞气：氮气。毛细管电压：4000 V。其他质谱参数见表4。表4 17种目标物的质谱分析参考参数碎裂电压、定性离子、定量离子及其碰撞能量序化合物名称母

14、离子子离子碰撞能量碎裂扫描模式号(m/z)(m/z)电压1对氨基苯甲酸138.0120.094.2121090ESI+2苯基苯并咪唑磺酸272.8193.0 80.02256160ESI-3二苯酮-4和二苯酮-5306.8211.080.03448150ESI-4二苯酮183.0105.077.01030100ESI+5二苯酮-3229.0151.0104.91417100ESI+6p-甲氧基肉桂酸异戊酯249.0161.0179.110490ESI+74-甲基苄亚基樟脑255.1171.015100ESI+防晒剂BL-20097.015奥克利林250 02 08362.1232.015100

15、ESI+9二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸 己酯398.1149.014120ESI+120.95410甲氧基肉桂酸乙基己酯291.1178.9285ESI+161.01411PABA乙基己酯278.1166.0 151.00183110ESI+12水杨酸乙基己酯249.0136.892.81020130ESI-13胡莫柳酯261.0136.993.01024120ESI-14丁基甲氧基二苯酰基甲烷311.0161.0135.02020100ESI+15乙基己基二嗪酮823.5486.9711.26550200ESI+16亚甲基双-苯并三唑基四659.4336.030200ESI+甲基丁基酚264.9

16、6017双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪628.4135.960200ESI+403.945附录 A (资料性附录)标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、分子量、纯度序 号化合物名称英文名称CAS号分子式Structure分子量纯度苯基苯并 咪唑磺酸(PBSA)2-Phenylbenzimidazole- 5-sulphonic acid and its potassium, sodium, and triethanolamine salts27503-81-7 C13H10N2O3S忆274.292对氨基苯 甲酸(PABA)4-Aminobenzoic acid150-30-0C7H7

17、NO2OCHH137.14大于95%3二苯酮-4 和二苯酮-5(Bp4/Bp5)2-Hydroxy-4-methoxybe nzophenone-5-sulfonic acid and its sodium salt4065-456C14H 12O6SOHO0O 二 S 二 OOH308.304二苯酮Benzophenone119-61-9C13H 1oOOyO182.225二苯酮-3(Bp3)Oxybenzone (INN)131-577C14H12O3O OH gYio228.246p-甲氧基 肉桂酸异 戊酯(IAMC)Isopentyl-4-methoxycinn amate71617-

18、10-2C15H20O3248.3274-甲基苄 亚基樟脑 防晒剂BL-200(4MBC)3-(4-Methylbenzylidene)- d-l camphor36861-47 - 9C18H 22O254.378奥克利林(OC)2-Cyano-3,3-diphenyl acrylic acid, 2-ethylhexyl ester6197-304C24H27NO 2N广r - s o 0 O361.489二乙氨基 羟苯甲酰 基苯甲酸 己酯(DHHB)Benzoic acid, 2-(4-(diethylamino) -2-hydyoxybenzoyl) -,hexyl ester3027

19、7668-7C24H31NO 4OHH* XOOOHQJ397.51大于95%10甲氧基肉 桂酸乙基 己酯(EHMC)2-Ethylhexyl4-methoxycinnamate5466-773C18H26O3O0 1 s290.4011PABA乙基 己酯(OD-PABA)4-Dimethylaminobenzoate of ethyl-2 -hexyl21245-02-3C17H27NO 2x0H277.412水杨酸乙 基己酯(EHS)2-Ethylhexyl salicylate118-60-5C15H22O3严CH3H3C.QQO250.33813胡莫柳酯(HMS)Homosalate1

20、18-56-9C16H22O32262.34序 号化合物名称英文名称CAS号分子式Structure分子量纯度14丁基甲氧 基二苯酰 基甲烷(BMDBM)1-(4- Tert-butylphenyl)-3 -(4-methoxyphenyl) propane-1,3-dione70356-09-1C20H22O3O O1310.3915乙基己基 三嗪酮(EHT)UVT-15088122-99-0C48H66N6O6宁璋旷r823.0716亚甲基双 -苯并三 唑基四甲 基丁基酚(MBBT)Ultraviolet Absorbent10359745-1C41H50N6O2OO I658.8717双

21、-乙基 己氧苯酚 甲氧苯基三嗪(BEMT)Bis-ethylhexyloxyphenol methoxyphenyl triazine18739300-6C38H49N 3O5oCHOHN N OH 沙hC 2 0丫chHsCCH627.82附录 B (资料性附录)质谱确证参考谱图iWKWkIOxWXlOXWkWmWxWxwKioESI(+) MRM (138.0120.0)JUTESI(+) MRM (183.0105.0)j_ 1 sr229.0151.0)ESI(+) M jrESI(+) MRM (249.0161.0)IESI(+) MRM (255.1171.0)仁丄ESI(+)

22、MRM (362.1250.0)4|5IESI(+) MRM (291.1161.ESI(+) MRM (398.1149.T elJ 34567 S 910111?1314 IS IB U IB 1970J?2151.0)B.1标准物质总离子流质谱图(正模式)和提取离子质谱图对应峰号：1、对氨基苯甲酸(PABA) ； 2、二苯酮；3、二苯酮-3(Bp3) ； 4、p-甲氧基肉桂酸异戊酯(IAMC) ； 5、 4-甲基苄亚基樟脑(4MBC) ； 6、奥克利林(OC) ； 7、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯(DHHB) ； 8、甲氧基肉桂酸乙基己酯(EHMC) ； 9、PABA乙基己酯(OD- P

23、ABA) ； 10、丁基甲氧基二苯酰基甲烷( BMDBM )； 11、乙基己 基三嗪酮(EHT) ； 12、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚 (MBBT) ； 13、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 (BEMT) 胡莫柳酯(HMS)；ESI(-) TIC总离子流质谱图fESI(-) MRM(306.8211.0)代ESI(-) MRM(249.0136.8)ESI(-) MRM(261.0136.9)J24681012ESI(-) MRM (272.8 193.0)B.2标准物质总离子流质谱图(负模式)和提取离子质谱图对应峰号：1、苯基苯并咪唑磺酸(PBSA); 2、二苯酮-4和二苯酮-5(Bp4

24、/Bp5) ; 3、水杨酸乙基己酯(EHS);4、胡莫柳酯(HMS)；化装品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等 16 种紫外线吸收剂及二苯酮的检测方法起草说明为加强化装品中限用物质的监督管理， 国家食品药品监督管理局委托辽宁省食品 药品监督管理局开展化装品中二苯酮和甲氧基肉桂酸乙基己酯两种紫外线吸收剂 的检测方法建立和验证工作。考虑到方法的适用性及对化装品监管的实际意义，我们 根据情况将检测物质的目标范围扩大到 16 种紫外线吸收剂以及二苯酮， 共计 17种目 标物质。现就起草工作有关情况说明如下：1 起草的必要性作为使用频率最高的限用防晒剂之一，二苯甲酮类防晒剂中无论是二苯酮 -3 还是二苯酮 -4

25、或二苯酮 -5，都可能带入二苯甲酮，而虽然二苯甲酮本身也有很好 的防晒效果，但由于其稳定性和平安性的原因不得作为原料使用，因此对化装品中 因其他二苯甲酮类原料带入的二苯甲酮的含量的检测， 也应该成为对化装品质量控 制需要关注的问题之一。?化装品卫生标准? 2007 给出化学防晒剂的检测方法，涉及了 15 种化学防 晒剂的定量检测，成为目前防晒化装品质量控制的重要技术手段。但是该方法在使 用中存在以下两方面的缺乏： 液相色谱别离的流动相中使用了高含量 超过 40% 的四氢呋喃，这样流动相体系由于对于 PEEK 材料的腐蚀性，普通的液相色谱仪需 要进行改造后才能使用。高氯酸作为酸性改性剂，因其强氧

26、化性，也会损害色谱 仪及色谱柱的使用寿命。以上两方面的缺乏，影响了该方法的适用性，对该方法进 行改良并开发新的适用性更好的检测方法对于防晒化装品的质量控制将具有十分 重要的理论和现实意义。同时考虑到液相色谱法用于复杂体系中化合物的检测，在 化合物定性方面存在难以防止的缺乏和缺陷，为应对日益复杂的检测需求，开展质 谱确证方法已显得十分必要。2、起草的原那么方法起草遵循四项原那么： 1检测方法应具备先进性与可操作性强的特点 2 检测方法应尽量覆盖所有防晒类化装品 3应尽量优化样品前处理及分析测试条件，使方法对色谱柱及色谱仪的损害降到最低，方法具有可行性。4检测方法应兼顾日常检测和方法确证的需要。3

27、、起草过程课题承当单位于 2021 年 7 月开始开展化装品中二苯酮和甲氧基肉桂酸乙酸己 酯检测方法的建立和验证工作。经过查阅国内外相关文献资料等调研工作后，开始 了实验研究，并于 2021年 5月份根本完成方法开发工作。2021年10月 17日，国家食品药品监督管理局食品许可司在北京召开专家论证 会，与会专家肯定了方法的可行性。但要求补充与卫生标准方法的比对数据及比拟 其它厂家色谱柱的别离效果，同时修订方法文本的编写体例。会后根据专家意见， 我们补充了与卫生标准方法的比对数据， 同时增加了对瓦里安公司 PFP 色谱柱的分 离效果的考察数据以及菲罗门 PFP色谱柱2个批次的色谱柱的别离效果的考

28、察数 据。结果显示不同厂家相同规格的 PFP色谱柱的在相同色谱条件下对17种目标物 的别离能力稍有差异，但相差不大。菲罗门PFP色谱柱2个批次的别离效果虽也有 些微差异，但对 17种目标物的别离度根本相同。同时针对有专家对原方法与卫生标准方法相比别离时间较长可能影响方法的 适用性问题，我们进一步优化了色谱别离条件将色谱别离时间由原来的 55 分钟缩 短为 30 分钟以内，进一步增强了方法的适用性。我们还补充了水包油体系和油包水体系化装品空白加标回收率的比对试验以 及粉类基质空白加标回收率试验。实验结果显示，无论是水包油体系还是油包水体 系的化装品， 17种目标化合物的空白加标回收率相差不大，

29、均满足试验要求。 粉类 基质中 17 种目标化合物的加标回收情况显示，回收率满意，说明该方法同样适用 于粉类基质的化装品中目标物的检测。2021年11 月16日，国家食品药品监督管理局保健食品化装品监管司在北京召 开专家论证会，与会专家再次对提交的文本进行审定。会议对方法的补充数据给予 了肯定，但同时又提出了新的修改意见。除仍需对方法文本的编写体例及文字表述 的严谨性进行进一步修改和标准外， 主要意见有： 1.对所提供与?化装品卫生标准? 2007版中相应检测方法的比对数据中， 局部检测结果相差较大， 需进一步验证。 2.要求提供相关质谱子离子选择相关质谱图以确证所选质谱条件的科学性。3.建议

30、方法名称由“化装品中二苯酮及甲氧基肉桂酸乙基己酯等 17 种紫外线吸收剂的测 定修改为“化装品中甲氧基肉桂酸已基己酯等 16 种紫外线吸收剂及二苯酮的测 定。方法起草单位认真按照专家意见对文本重新进行了补充和修改。尤其是针对 所提供与?化装品卫生标准? 2007 版中相应检测方法的比对数据中，局部检测 结果相差较大，做了进一步验证。证实原来按照卫生标准方法所测结果偏低的原因 是，样品前处理中样品未能很好的分散造成目标物未能提取充分。在保证样品分散 的条件下，再次按照卫生标准方法进行试验，所测数据与本方法给出的数据一致。4 重点说明的问题1关于体例。本检测方法的体例主要参照?化装品卫生标准? 2

31、007 年版的 卫生化学检验方法的体例，便于化装品检验领域相关人员的阅读和实际操作。2关于检测方法的建立和验证。 通过对色谱别离条件的优化研究，以及样品前处理方法的研究，建立了化装品中 的 1 化装品中甲氧基肉桂酸已基己酯等 16 种紫外线吸收剂及二苯酮的测定方法。方 法简单、实用性较强，有利于方法的推广应用。加标水平在 1.020 mg/g 范围内，乙 基己基三嗪酮和双乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪的回收率在8090%之间， RSD 小于10% n=6,其他15种目标物的回收率在 90105%之间，RSD小于10 % n=6。苯 基苯并咪唑磺酸，二乙氨基羟苯甲酰基甲酸己酯和胡莫柳酯在5卩g/mL

32、100卩g/mL的浓度范围内线性关系良好，其他目标物在1卩g/mL 100卩g/mL的浓度范围内线性关系良好。线性相关系数r均大于0.99,根本满足分析检测要求。化装品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等 16 种紫外线吸收剂及二苯酮的检测方法编制说明1 任务来源为加强化装品中限用物质的监督管理，国家食品药品监督管理局委托辽宁省食品 药品监督管理局开展化装品中二苯酮和甲氧基肉桂酸乙基己酯的检测方法建立和验 证工作。考虑到方法的适用性及对化装品监管的实际意义，我们根据情况将检测物质 的目标范围扩大到 16种紫外线吸收剂以及二苯酮，共计 17种目标物质。2 研究背景化学防晒剂局部用于皮肤， 浓度较高可能引发接

33、触致敏和光接触致敏等不良反 应。目前我国?化装品卫生标准? ( 2007 ) 等同采用了欧盟允许使用的防晒剂的品 种及其限量的相关规定。限用的防晒剂包括甲氧基肉桂酸乙基己酯、二苯-3、二苯酮-4 和二苯酮 -5 等 26 种化学防晒剂以及二氧化钛和氧化锌 2 种物理防晒剂。鉴于 物理防晒剂的相对平安性，人们更关注化学防晒剂的平安限量问题。作为使用频率 最高的限用防晒剂之一，二苯(甲)酮类防晒剂中无论是二苯酮 -3 还是二苯酮 -4 或 二苯酮 -5，都可能带入二苯甲酮，而虽然二苯甲酮本身也有很好的防晒效果，但由 于其稳定性和平安性的原因不得作为原料使用， 因此对化装品中因其他二苯甲酮类 原料带

34、入的二苯甲酮的含量的检测， 也应该成为对化装品质量控制需要关注的问题 之一。防晒化装品中的防晒剂是作为限用原料添加的， 对防晒剂的含量检测是保证防 晒化装品的平安性的重要手段。 ?化装品卫生标准? ( 2007 )给出化学防晒剂的检测 方法，涉及了 15 种化学防晒剂的定量检测，成为目前防晒化装品质量控制的重要 技术手段。但是鉴于该方法存在的一些缺乏，影响了该方法的适用性。同时，新型 防晒剂的使用，也对防晒剂检测方法提出了新的要求。为此，通过优化色谱条件， 开发新的色谱别离方法，以防止使用四氢呋喃和高氯酸这样高腐蚀性的溶剂，在普 通液相色谱上实现多种限用防晒剂目标化合物的定量分析方法显得非常必

35、要。3 研究现状目前，国内外文献中对化装品中防晒剂的检测涉及的检测方法包括：液相色谱 法、薄层色谱法、气相色谱法以及气相色谱质谱联用等方法。其中高效液相色谱法 的使用频率最高。文献中涉及的防晒剂的种类少那么 1 种多那么 10 几种不等，多为限 用防晒剂的定量或定性检测，很少涉及禁用防晒剂的检测。我国的标准体系中涉及化装品中防晒剂的检测的有 QB/T 2333-1997 ?防晒化 妆品中紫外线吸收剂定量测定高效液相色谱法?，标准采用了 3 种液相色谱条件， 覆盖了 14种限用防晒剂和 5 种目前不允许使用禁用的防晒剂的检测，是目前 所见文献中涉及防晒剂种类最多的检测方法。但该标准方法存在如下几

36、点缺乏： 标准采用等度洗脱的方法， 在标准提供的液相色谱条件下多数的化合物未能获得基 线别离，给准确定量带来一定的困难。 液相色谱别离的流动相中使用了高含量 超过 40%的四氢呋喃，这样流动相体系由于对于 PEEK 材料的腐蚀性，普通的 液相色谱仪需要进行改造后才能使用。高氯酸作为酸性改性剂，因其强氧化性， 也会损害色谱仪及色谱柱的使用寿命。化装品卫生标准中规定的限用防晒剂的检测方法， 采用一种液相条件别离了 15 种限用防晒剂。 涉及防晒剂的种类与 QB/T 2333-1997 相比，虽然总数少了 4种，但 是涉及了 4种QB/T 2333-1997未涉及的限用防晒剂。将等度洗脱改良为梯度洗

37、脱， 使得色谱的别离度有了很大的改良， 在方法提供的液相色谱条件下大多数的化合物 可以获得基线别离，有利于化合物的准确定量。但是仍然采用高含量的四氢呋喃为 流动相，而且流动相中仍然使用高氯酸作为酸性改性剂，是该方法的缺乏之处。而 这些缺乏，也影响了方法的适用性。目前，液相色谱因其适用范围宽，逐渐成为定量分析的重要手段。但是普通液 相色谱仅以化合物的色谱保存时间和紫外特征吸收作为定性手段， 用于化装品中防 晒剂的定量检测难免受到复杂化装品体系中其他组分的干扰， 这是液相色谱法用于 复杂体系中化合物的定量检测方面难以防止的缺乏和缺陷。 而质谱作为重要的定性 确证工具，已经在复杂体系的定量分析中发挥

38、着越来越重要的作用。为维护法规的 权威性，有必要进一步加强对目标化合物的定性确证手段。这就使得与质谱尤其是 串联质谱联用成为必然的选择。4、工程完成情况1开展了化装品中甲氧基肉桂酸乙基己酯等 16种紫外线吸收剂及二苯酮测定 的高效液相色谱法。加标水平在1.020 mg/g范围内，乙基己基三嗪酮和双乙基己氧 苯酚甲氧苯基三嗪的回收率在 8090%之间，RSD小于10% (n=6)，其他15种目标 物的回收率在90105%之间，RSD小于10 % (n=6)。苯基苯并咪唑磺酸，二乙氨基 羟苯甲酰基甲酸己酯和胡莫柳酯在 5卩g/mL 100卩g/mL的浓度范围内线性关系良好， 其他目标物在1卩g/m

39、L 100卩g/mL的浓度范围内线性关系良好。线性相关系数(r)均 大于0.99,根本满足分析检测要求。(2)本方法负责起草单位为大连市产品质量监督检验所，参与验证单位分别是 国家环境监测中心，中科院大连化学物理研究所和大连疾病预防控制中心。本方法主 要起草人为毛希琴、边海涛、曲宝成。验证结果满足?化装品及其原料中禁限用物质 检测方法验证技术标准?。5、方法概述5.1仪器Agile nt公司Agile nt1260高效液相色谱仪。超声波清洗器。蜗旋混合器。离心机。5.2试剂标准物质：苯基苯并咪唑磺酸(PBSA)、二苯酮、二苯酮-3(Bp3)、p-甲氧基肉桂酸 异戊酯(IAMC)购自百灵威公司，

40、对氨基苯甲酸(PABA)、4-甲基苄亚基樟脑(4MBC)购 自 Accustandard 公司，二苯酮-4 和二苯酮-5(Bp4/Bp5)、PABA 乙基己酯(OD- PABA)、 水杨酸乙基己酯(EHS)、胡莫柳酯(HMS)购自TCI公司，奥克利林(OC)、二乙氨基羟 苯甲酰基苯甲酸己酯(DHHB)、甲氧基肉桂酸乙基己酯(EHMC)、丁基甲氧基二苯酰基 甲烷(BMDBM )、乙基己基三嗪酮(EHT)、亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚(MBBT)、 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(BEMT)，购自Dr. Ehrenstorefer GmbH公司，标准物质 纯度均大于95%。5.3方法色谱条件一：

41、色谱柱：PFP(五氟苯基)色谱柱，4.6mmX 250 mm (I.D. )，5 ym柱温：35C流动相：A 水溶液(含0.1%甲酸)，B异丙醇：甲醇=1:4 (v/v,含0.1%甲酸)。流速：1.2 mL/min。检测波长:梯度洗脱条件：311 nm和 280 nm。进样量：10 y L时间，minA，%B，%06832268322.130705158515109015.1010025010025.16832306832色谱条件二：(仅水杨酸乙基己酯与胡莫柳酯同时存在时使用)色谱柱：C18, 4.6mmX250 mm (I.D.), 5 m 柱温：35C 流动相：A 水溶液(含0.1%甲酸)

42、，B乙腈(含0.1%甲酸) 流速：1.5 mL/min。检测波长：311 nm。进样量：10 讥 梯度洗脱：020min,线性改变B相比例，从75%增加至100% 色谱别离谱图如图1和图2所示。吸收波长311 nm度吸吸收波长280nm吸图1标准物质液相 色谱别离谱图应峰号：1、苯基苯并咪唑磺酸(PBSA); 2、对氨基苯甲酸(PABA) ; 3、二苯酮-4和二苯酮-5(Bp4/Bp5) ; 4、二苯酮；5、二苯酮-3(Bp3);6、p-甲氧基肉桂酸异戊酯(IAMC) ; 7、4-甲基苄亚基樟脑(4MBC) ; &奥克利林(OC); 9、二乙氨基羟苯甲酰基苯 甲酸己酯(DHHB) ; 10、甲

43、氧基肉桂酸乙基己酯 (EHMC) ; 11、PABA乙基己酯(OD- PABA) ; 12、水杨酸乙基己酯 (EHS); 13、胡莫柳酯(HMS) ; 14、丁基甲氧基二苯酰基甲烷( BMDBM ); 15、乙基己基三嗪酮(EHT) ; 16、亚 甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚 (MBBT) ; 17、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 (BEMT)吸收波长311 nm也光吸051015201图 2 水杨酸乙基己酯和胡莫柳酯液相色谱别离谱图对应峰号： 1、水杨酸乙基己酯 EHS ；2、胡莫柳酯 HMS ；2、胡莫柳酯异构体5.3.2 校准曲线的制备标准储藏溶液：分别准确称取各标准物质 100 mg

44、以上质量均精确至0.1 mg 于棕色容量瓶中，苯基苯并咪唑磺酸用 1%氨水氨化甲醇溶解后定容至10 mL，其 他均用四氢呋喃溶解后定容至10 mL，配置成浓度为10 mg/mL的标准储藏液。系列标准溶液的配置：准确移取标准储藏液各 100 uL用甲醇定容至10 mL, 配置成100卩g/mL的混合标准溶液，再用甲醇逐级稀释配置 50卩g/mL 20卩g/mL 10卩g/mL 5卩g/mL 1卩g/mL的系列混合标准溶液。移取10卩系列标准溶液进行高效液相色谱分析。一般情况下，按照色谱条件一 进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作 校准曲线。对水杨酸乙基己酯和

45、胡莫柳酯同时使用的情况，需按照色谱条件二进行高 效液相色谱分析。5.3.3 样品预处理称取约0.1 g化装品样品精确至1 mg于15 mL具塞刻度试管中，首先向试管中 参加6 mL四氢呋喃含0.1%氨水，涡旋或超声使样品完全分散。假设不能分散一般适 当超声可解决问题，对超声15 min仍无法分散的样品例如唇膏样品，需用 60 C水 浴，振荡加热约 12分钟即可溶解分散。继续向试管中参加甲醇 /水3:1含0.1%氨 水定容至10 mL,涡旋混合。于5000转/别离心5 10 min，取清液，聚丙烯微孔滤 膜过滤，待用。涉及对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸的检测，需取上述待用清液100卩用甲醇稀释至

46、1 mL，用聚丙烯微孔滤膜过滤后，方可上机测试。其他目标化合物的检测视情 况可适当稀释后上机测试，也可无需稀释，将上述待用清液直接上机测试。6 方法研究6.1 研究范围确实定虽然合同仅要求建立化装品中二苯酮和甲氧基肉桂酸乙酸己酯的检测方法， 但考 虑到?化装品卫生标准? 2007版涉及的限用防晒剂为 28种其中化学防晒剂为 26种， 从方法适用的角度考虑， 我们将最初的目标设定为建立 ?化装品卫生标准?2007版 中涉及的除聚硅氧烷外的所有 25种化学防晒剂的检测方法， 但是由于标准物质购置的 原因，只购置到了 16种化学防晒剂包括?化装品卫生标准?中检验方法涉及的 15种 防晒剂，因此将试验

47、范围确定为 16种化学防晒剂。考虑到合同要求以及，对二苯甲 酮类防晒剂中原料平安性的关注，将二苯甲酮也列为研究对象。6.2 样品前处理条件的优化考虑到化装品样品的分散性以及目标物的溶解性， 我们尝试以四氢呋喃作为分散 溶剂首先分散样品并溶解目标成分，然后再参加极性的甲醇水溶液增加体系的极性， 使样品中的非极性成分如唇膏中的蜡基及指甲油中大分子的赋形剂等基质析出， 从而可以防止这些物质对反相色谱柱的伤害， 但极性溶剂的参加有可能引起目标物提 取回收率的降低。为此我们考察了提取溶剂体系中四氢呋喃与75%甲醇水溶液不同体积比体积比为 1:8，1:4，2:3，3:2条件下，对空白加标样品中目标物的回收

48、率的影 响。结果显示，随着四氢呋喃比例的增加，目标物的回收率呈增加的趋势，四氢呋喃 与75%甲醇水溶液体积比为 3:2时所有目标物的回收率最高， 大局部目标物的回收率可 达90%以上，乙基己基三嗪酮和双 -乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪的最大收率低于 90%但 高于 80%，然而二苯酮 -5及对氨基苯甲酸的最大收率仅 60%左右，收率最低的苯基苯 并咪唑磺酸，最大收率仅为 30%左右。考虑到苯基苯并咪唑磺酸，二苯酮 -5及对氨基 苯甲酸这 3种极性目标物，均带有磺酸基，羧基等可酸性解离的基团，并溶于氨化甲 醇的特点，我们尝试向四氢呋喃甲醇水体系中添加体积分数为0.1%，0.5%，1%， 2%的氨水增

49、加这几个目标物的回收率。实验结果显示，添加 0.1%体积分数的氨水即 可使 3种极性目标化合物的提取收率提高到 90%以上，而其他化合物的提取收率根本未 受影响。而再增加氨水的添加比例，对 3种极性目标化合物回收率的影响并不明显。 为此我们确定了四氢呋喃与 75%甲醇水溶液体积比为 3:2，且含体积分数为 0.1%的氨水 的溶剂体系作为提取溶液，此时溶剂体系中四氢呋喃、甲醇、水的最终比例为6:3:1。由于提取溶液中氨水的参加， 影响到对氨基苯甲酸和苯基苯并咪唑磺酸的液相色 谱别离效果，使色谱峰分叉影响定量，而甲醇稀释 10倍后进样，可防止溶剂的干扰效 应。因此涉及到此两种目标物的液相色谱检测，

50、必需要将提取液用甲醇稀释10倍前方可进样，其他目标化合物的别离不受氨水影响，可在过滤后直接进样分析，但是鉴于 液相色谱对此类紫外吸收剂的检测灵敏度也较高，因此一般为减少对色谱柱的污染， 建议稀释 10倍后再进行进样分析。6.3 色谱柱的选择：选择适宜的色谱柱是分析方法的关键。C18色谱柱是实验室最常使用的色谱柱，因此分析方法也优先选择C18色谱柱。但是即使同样是C18色谱填料，因为键合技术， 硅羟基封尾基团的不同，色谱柱的选择性也会有很大的差异。为此我们首先比拟17种目标物在 Agile nt Zorbax XDB-C18 , Zorbax SB-C18，依利特 Hypsil - C18, W

51、aters Symmetry shield C18 柱对目标化合物的别离效果。结果显示，乙基己基三嗪酮，亚甲 基双 -苯并三唑基四甲基丁基酚， 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 3种目标物在以上所有 色谱柱上均保存太强，尤其双 -乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪即使用 100%甲醇洗脱也需 要2h才能洗脱。这也是?化装品卫生标准?2007及QB/T 2333-1997需要使用四氢 呋喃作为流动相的原因。因此此3种目标化合物不适宜用甲醇水为流动相 C18为固定相 的分析体系。考虑到紫外线吸收剂均为带有苯基的化合物， 我们测试了对苯基化合物有特异性 选择的Phenomenex PFP色谱柱，希望可以在甲醇水、

52、乙腈水或异丙醇 /甲醇水为流动 相条件下获得 17种目标物的别离。结果显示，该色谱柱对 17种目标物显示了卓越的分 离能力，在优化的色谱条件下， 17种目标物可获得完全的基线别离。为此我们最终选 择了 Phenomenex PF作为分析用色谱柱。但是在该PFP色谱柱上，胡莫柳酯的同分异构体的色谱峰被水杨酸乙基己酯的色 谱峰所掩盖，很难别离，因此当此两种化合物分别使用时，不影响定量，但两者同时 使用时胡莫柳酯的异构体色谱峰会干扰水杨酸乙基己酯的定量， 使水杨酸乙基己酯的 定量结果偏大。为解决这个问题，我们经过筛选和优化，确定 Dikma Diamonsil C18， 4.6mmx250 mm I.D., 5卩曲勺色谱柱在乙腈和水为流动相，梯度洗脱条件下可以 使胡莫柳酯的同分异构体与水杨酸乙基己酯基线别离， 可以用于胡莫柳酯与水杨酸乙 基己酯同时准确定量。6.4流动相的选择6.4.1 甲醇、乙腈和异丙醇 /甲醇为强洗脱溶剂的色谱别离比拟我们比拟了在水相为流动相 A相弱洗脱溶