热盐水致大鼠萎缩性胃炎血清和胃黏膜组织SOD和TAC的变化(一)

1、热盐水致大鼠萎缩性胃炎血清和胃黏膜组织SOD和TAC的变化(一)    作者：江梅，张沥，海春旭，秦绪军，陶梅，张玲霞，曹广州 【关键词】 萎缩性胃炎Alterations of SOD and TAC in serum and gastric mucosa of atrophic gastritis rat caused by highsalt hot water【Abstract】 AIM: To investigate the dynamic variation of superoxide dismutase (SOD) and total ant

2、ioxidant capacity (TAC) in the process of atrophic gastritis formation caused by over salty hot diet. METHODS: The atrophic gastritis rat model was made by feeding 150 g/L salty water of 55 for 12 weeks. The normal control was fed with pure water of 25. The rats were killed group by group every 4 we

3、eks and the serum and gastric mucosa were kept to test SOD and TAC. Tissue slice of gastric mucosa was observed under optic microscope. The SOD was tested by improved muriatic acid hydroxylamine method, the total albumen content of stomach homogenate was tested by Lowrys method and TAC was tested by

4、 TAC kits. RESULTS: In the 12th week, the gastric mucosa in rats fed with highsalt hot water presented with typical pathological change as atrophic gastritis, but this pathological change was absent in control group. SOD and TAC in serum and gastric mucosa had a perfect timeeffect relation in hotsal

5、t water group. With the time prolonged, the SOD and TAC decreased significantly in hotsalt water group. CONCLUSION: Active oxygen damnification plays an important precursory role in the formation and evolution of atrophic gastritis.【Keywords】 atrophic gastritis; highsalt hot diet; SOD; TAC【摘要】 目的: 观

6、察过热、过咸饮食引起胃黏膜损伤以致造成胃黏膜萎缩的过程中超氧化物歧化酶（SOD）及总抗氧化力（TAC）的动态变化. 方法: 采用55，150 g/L NaCl连续灌胃12 wk，制成大鼠萎缩性胃炎模型，对照组采用等量的25水灌胃,在此期间每隔4 wk处死一批大鼠. 将大鼠麻醉后腹主动脉取血分离血清，同时摘取胃组织，制成组织匀浆，分别测定血清及胃黏膜组织中SOD和TAC含量. SOD测定采用改良的盐酸羟胺法， TAC采用南京建成生物公司的试剂盒，总蛋白测定采用Lowrys法. 结果：与对照组相比较，经热盐水灌饲大鼠的血清和胃黏膜组织中SOD活性及TAC水平显著降低（P0.05，P0.05），并且

7、随处理时间延长，SOD活性和TAC降低愈显著. 结论：SOD和TAC的显著改变说明活性氧损伤在萎缩性胃炎发生发展过程中起着重要的先导作用，也提示有效的抗氧化干预很可能对于预防萎缩性胃炎具有很好的防治作用.【关键词】 萎缩性胃炎；热盐水；超氧化物歧化酶；总抗氧化力0引言慢性萎缩性胃炎是临床常见的胃部疾病，由于其与胃癌尤其是肠型胃癌的发生呈显著正相关，1978年世界卫生组织将其定为胃癌前状态1. 我们以人类饮食中不可缺少的两大因素食物的热度与咸度，创建了快速建立慢性萎缩性胃炎动物模型的方法，并观察从正常胃黏膜发展到萎缩性胃炎的演变过程中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SO

8、D）和总抗氧化力（total antioxidant capacity,TAC）的动态变化，以探讨活性氧损伤与萎缩性胃炎发生的关系.1材料和方法健康、性成熟的雄性SD大鼠44只7 wk龄，体质量200250 g，由第四军医大学动物实验中心提供. 盐酸羟胺、Triton X100及NBT购自华美生物公司，福林酚购自鼎国生物公司，其余试剂均为国产分析纯. TAC试剂盒购自南京建成生物研究所. 722型光栅分光光度计为上海分析仪器总厂产品，SHZ881台式水浴恒温震荡器为江苏太仓鹿河生化仪器厂产品. 采用55, 150 g/L NaCl连续灌胃12 wk，制成大鼠萎缩性胃炎模型2，对照组采用等量25

9、水灌胃12 wk.实验开始随机宰杀只作为空白“0 wk”对照. 其余大鼠分成对照组（control）20只、热盐水组（CAG）20只. 分别于4，8，12，24和32 wk各随机取只，10 g/L戊巴比妥钠溶液0.5 mL/kg ip麻醉，腹主动脉取血分离血清，同时摘取全胃组织，制成组织匀浆，分别测定血清和组织中SOD, TAC和总蛋白的含量. SOD测定采用改良的盐酸羟胺法，样品管取样品20 L，非酶管用三蒸水代替，依次加入75 mmol/L，pH=10.2碳酸盐缓冲液2.0 mL，3 mL/L Triton X100 0.3 mL，1.2 mmol/L 盐酸羟胺0.5 mL，0.98 mm

10、ol/L NBT 0.1 mL，37水浴20 min，2.0 mL甲酸终止反应，560 nm比色. 总蛋白测定采用Lowrys法. TAC按照试剂盒中的步骤严格操作. 另取胃窦黏膜组织，从胃大弯至胃小弯连续切片，组织切片进行HE染色. 参照1994年美国休斯顿胃炎诊断分类标准及井冈山会议胃炎诊断分类标准对胃窦、胃体黏膜组织学各项指标进行评定，组织切片由专人采取盲法阅片.统计学处理：结果采用x±s表示，用SPSS 11.0统计软件进行分析，对照组与热盐水组比较，方差齐性采用t检验，方差不齐采用wilcoxon秩和检验.2结果2.1大鼠萎缩性胃炎病理改变热盐水灌胃4 wk和8 wk无萎缩

11、性胃炎表现. 灌胃12 wk光镜下见正常组黏膜表面光滑，无糜烂，无炎细胞浸润. 而模型组胃黏膜腺体明显缩小，腺上皮萎缩，腺管腔变大，炎细胞浸润等萎缩性胃炎表现（Fig 1）.2.2血清SOD随着动物周龄增加有逐渐降低趋势；除4 wk外，处理组动物血清含量低于对照组（P0.05，Tab 1）. 处理组胃组织SOD活性低于对照组（P0.05）. 血清与胃组织中TAC的变化与SOD类似，正常对照组的TAC随大鼠周龄的增加有下降趋势，经过热盐水处理后的大鼠血清和胃组织中的TAC下降迅速，经热盐水灌饲大鼠的胃组织中SOD活性和TAC随处理时间延长有逐渐降低的趋势.表1热盐水致大鼠萎缩性胃炎过程中血清和胃

12、组织中TAC和SOD的动态变化（略）3讨论近年来流行病学研究表明，长期高盐饮食可导致慢性萎缩性胃炎，甚至诱发癌变2. 本研究以与人类饮食密切相关的热盐水为造模因素，短期内成功制成大鼠慢性萎缩性胃炎模型，并通过检测萎缩性胃炎大鼠血清和胃组织SOD活性和TAC含量变化，进一步探讨热、咸饮食引起慢性萎缩性胃炎的内在机制.氧化损伤常导致机体抗氧化防御系统功能降低，SOD能清除超氧阴离子自由基（O-?2），是一种具有细胞保护作用的重要抗氧化酶. 自1969年McCord和Fridovich发现以来，迄今，已发现的SOD有三种类型，即铜锌SOD（CuZnSOD）、锰SOD（MnSOD）、铁SOD（FeSO

13、D）. CuZnSOD存在于真核细胞细胞质中，MnSOD一般存在于原核细胞、真核细胞的线粒体中，FeSOD主要存在于原核细胞中. SOD能将超氧阴离子自由基歧化生成过氧化氢，而过氧化氢在过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶催化下生成水，使有害的自由基变成无害的物质. 人们常把SOD看作是机体抗氧化损伤防御体系中的第一道防线3-5. TAC是在一定条件下机体所具有的抗氧化能力，同样包括酶促和非酶促的生物与化学性的抗氧化活性，甚至包括一些机制尚未清楚物质的总抗氧化能力. 目前总抗氧化力的测定主要通过将Fe3+还原成Fe2+后与菲啉类物质形成有色的络合物，采用比色法进行测定，其在一定程度上能反映机体的抗氧

14、化能力6.本结果表明，随着时间延长，动物体内SOD活性在逐渐降低，而在同一时间点，对照组与热盐水组动物血清和胃组织SOD均有不同程度下降，热盐水组SOD降低更显著，同时也反映了在热盐水诱导大鼠胃黏膜萎缩过程中，能够诱导大量自由基生成，从而导致SOD消耗过度和总活性显著下降. 同时测得TAC随着时间的延长与对照组相比也有显著降低，提示在萎缩性胃炎的发生过程中，机体的抗氧化损伤防御体系受到破坏，活性氧损伤在热盐水诱导胃黏膜萎缩过程中可能具有不可忽视的重要作用. 本结果表明，在热盐水导致慢性萎缩性胃炎形成早期已出现胃黏膜组织细胞的活性氧损伤，说明活性氧损伤在萎缩性胃炎发生发展过程中起着重要的先导作用

15、.【参考文献】1 姒健敏.开展对萎缩性胃炎癌变干预阻断的研究J中华消化杂志,2003;23（11）：645-646Si JM. The interdiction study on the carcinogenesis of atrophic gastritisJ. Chin J Dig, 2003;23（11）：645-6462 张沥,张玲霞,徐俊荣,等. 热盐水致大鼠萎缩性胃炎动物模型建立J.世界华人消化杂志,2002;10(5): 571-574.Zhang L,Zhang LX,Xu JR,et al. Rat model of atrophic gastritis induced by

16、 highsalt hot waterJ. World Chin J Digestol,2002;10(5):571-574.3 Fattman CL, Schaefer LM, Oury TD. Extracellular superoxide dismutase in biology and medicineJ. Free Radic Biol Med, 2003;35(3):236-256.4 Fubini B, Hubbard A. Reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species (RNS) generation by silica in inflammation