止痛化癥分散片质量标准研究

1、止痛化癥分散片质量标准研究    【摘要】  ：目的 建立止痛化癥分散片的质量标准。方法 采用薄层色谱法对止痛化癥分散片中的延胡索、黄芪、川楝子进行了鉴别研究；同时采用HPLC法测定止痛化癥分散片丹参中丹参素的含量。结果 定性鉴别分离度好,专属性强；以HPLC法测定止痛化癥分散片丹参中丹参素的含量,方法精密度、稳定性、重现性良好,平均回收率为99.66%, RSD1.60%(n9)。结论 本试验所确定的质量分析方法稳定可靠,可作为止痛化癥分散片的质量控制标准。 【关键词】  止痛化癥分散片丹参素薄层色谱法高效液相色谱法

2、60;Abstract：Objective To establish the quality standard for Zhitong Huazheng Dispersed Tablets. Methods Rhizoma corydalis, Radix astragali, Fructus toosendan in Zhitong Huazheng Dispersed Tablets were identified by TLC. The content of Danshensu was determined by HPLC. Results The spots on the TLC co

3、uld be well separated and the method had strong specificity. The method for determinating the content of Dispersed tablets by HPLC was suitable for the quality standard with sufficient accuracy, stability and reappearance. The average recovery of Danshensu was 99.61%, RSD1.60% (n9). Conclusion The q

4、ualitative and quantitative analytic methods are stable and reliable. It can be used for quality control of Zhitong Huazheng Dispersed Tablets. Key words：Zhitong Huazheng Dispersed Tablets；Danshensu；TLC；HPLC     止痛化癥分散片是在止痛化癥胶囊1的基础上,通过改变剂型制得的分散片。本制剂由党参、黄芪(炙)、白术、丹参、当归、鸡血藤、三棱等

5、19味中药经提取加工制成。为保证临床用药安全有效,严格控制本品的质量,我们参考文献2-3,采用薄层色谱法对延胡索、黄芪、川楝子进行了定性鉴别,应用HPLC法测定丹参中丹参素的含量。 1  仪器与药品     高效液相色谱仪(UV200 ,大连依利特科学仪器有限公司)；电子天平(AL204,梅特勒-托利多上海称重设备公司)；硅胶G薄层板(自制,硅胶G由青岛海洋化工有限公司制造,为化学纯)。丹参素钠对照品(批号855-200202,为含量测定用)、黄芪甲苷对照品、延胡索乙素对照品、川楝子对照药材由中国药品生物制品检定所提供；阴性样品(按处

6、方药味去除被测成分,其余药味按制剂的制备工艺制得)。含量测定所用的甲醇为色谱纯,其它所用试剂均为分析纯。 2  定性分析 2.1  黄芪的薄层色谱鉴别    取本品20片,研细,取9 g,加甲醇50 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次30 mL,合并正丁醇液；加氨试液3倍量,摇匀,放置分层,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法2005年版中华人民共和

7、国药典(一部)附录B试验1,吸取供试品溶液5 g、对照品溶液2 g,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(1372)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。 2.2  延胡索的薄层色谱鉴别    取本品15片,研细,取6 g,加浓氨试液3 mL及三氯甲烷40 mL,摇匀,放置1 h,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品,加甲醇溶解,制成每1 mL含1 mg的溶

8、液,作为对照品溶液。照薄层色谱法2005年版中华人民共和国药典(一部)附录B试验1,吸取上述两种溶液各23 L,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7.541)为展开剂,置预饱和的展开缸内,展开,取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑点清晰,取出,在空气中挥尽板上吸附的碘后,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。 2.3  川楝子的薄层色谱鉴别     取本品20片,研细,取10 g,加乙醇30 mL超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加

9、乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取川楝子对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法2005年版中华人民共和国药典(一部)附录B试验1,吸取上述2种溶液各4 L,分别点于同一以0.3%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-丙酮(91)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑点清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。 3  定量分析 3.1  对照品溶液的制备      取丹参素钠对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成每1 mL含0.3 mg的溶液(相当于每1 m

10、L含丹参素0.27 mg),即得。 3.2  供试品溶液的制备     取本品20片,研细,精密称取约10 g,精密加入1%盐酸-甲醇溶液(5050)50 mL,称定重量,超声处理(功率200 W,频率40 kHz)30 min,放冷,称定重量,用上述盐酸-甲醇溶液补足减失的重量,过0.45 m滤膜,即得。 3.3  阴性液的制备     取除去丹参以外的其它药材,按供试品溶液制备方法制成阴性液。 3.4  色谱条件与系统适用性试验  

11、  色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 m),柱温为室温。流动相：甲醇-水-二甲基甲酰胺-冰醋酸(29521),流速1.0 mL/min。检测波长：281 nm。理论塔板数按丹参素峰计算不低于6 000。在选定的色谱条件下,供试溶液中丹参素与相邻组分分离度良好,阴性液无干扰(见图1)。 3.5  线性关系    精密称取丹参素钠(以丹参素计)对照品30 mg,置10 mL量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度,摇匀,再分别精密量取上述溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL,置10 mL量瓶中,加

12、流动相稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液各20 L,分别注入液相色谱仪,测定峰面积。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标进行回归,得回归方程Y289.29X648.26,r0.999 8。结果表明,丹参素进样量在3.68.4 g范围内线性关系良好。 3.6  最低检测限     取线性关系试验项下的3号溶液1 mL,置50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,再精密量取20 L注入液相色谱仪中,记录色谱图,按3倍信噪比S/N计,最低检测限为100 ng。 3.7  定量限     取线性关系试验项

13、下的3号溶液3 mL,置50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取20 L,注入液相色谱仪, 记录色谱图。色谱图中,信噪比约为101,计算定量限约为300 ng。 3.8  稳定性试验     精密吸取供试品溶液20 L,每隔2 h进样测定1次,共测定8 h,结果表明,RSD2.1%,表明供试品溶液在8 h内基本稳定。 3.9  精密度试验     精密吸取对照品溶液20 L,连续进样5次,结果其峰面积的RSD1.28%,表明仪器有很好的精密度。 3.10 

14、0;重现性试验      照“3.2”项下制备6份供试品溶液,分别精密吸取20 L,按前述色谱条件进样分析,测定色谱峰面积,结果RSD1.12%,表明本法重现性良好。 3.11  回收率试验    采用加样回收法。精密称取已知丹参素含量的供试品药粉,按“3.2”项下方法制备供试品溶液,再添加一定量的丹参素钠对照品溶液,按上述色谱条件测定。结果平均回收率为99.66%, RSD1.60%。见表1。表1  加样回收试验测定结果（略） 3.12  样品测定 &#

15、160;  为制定含量限度,制备供试品3批(20060310、20060311、20060312)。按上述测定方法,测定其中丹参素的含量,结果见表2。表2  丹参素含量测定结果（略）    根据上述测定结果,并参照止痛化癥胶囊2005年版中华人民共和国药典(一部)1,本品每片含丹参以丹参素(C15H24N2O)计,不得少于0.2 mg。 4  讨论     本试验采用TLC法对方中当归的鉴别方法加以筛选研究,但阴性对照有干扰,无法确立重复性、专属性良好的分析方法,其鉴别方法有待于进一步

16、研究。在选定色谱条件下,本试验以HPLC法测定臣药当归中阿魏酸的含量,供试溶液中阿魏酸与相邻组分分离度良好,阴性液无干扰。但在方法学考察中,回收率低于新药申报的要求,约在85%90%之间,还有待于进一步研究。    2005年版中华人民共和国药典规定了丹参中丹参酮A的含量测定方法与限度,经查阅有关文献,丹参中所含水溶性成分如丹参素、原儿茶醛相对丹参酮A稳定,近几年文献报道均为测定复方制剂中(丹参)丹参素含量,且丹参中水溶性成分丹参素为活血的有效成分之一,故本试验拟用HPLC法测定君药丹参中丹参素的含量。在选定的色谱条件下,供试溶液中丹参素与相邻组分分离度良好,阴性液无干扰。经方法学考察,方法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。因此,确立本制剂定量指标为丹参素,定量方法为HPLC法。试验中对提取溶剂、超声处理条件进行了考察,结果表明,选用1%盐酸-甲醇(5050)为提取溶剂,