UV,CAD和MS同时测量药物活性成分和反离子

1、UV，CAD和MS同时测量药物活性成分和反离子摘要：药物活性成分（API）是药物中的有效成分，用药时起重要作用。鉴别和测定API是药厂研发和生产过程中的关键步骤，本文利用新型通用检测器电喷雾式检测器（Corona CAD）与紫外、质谱检测器相连，进行了多种复杂API的分析，方法可靠，数据准确，且提高了检测效率，扩展了应用范围，值得在药厂中大力推广。 关键词：API，Corona CAD，UV，MS，ICS-5000 1前言 API：活性医药物成分（Active pharmaceutical ingredient）指的是药物活性成分，也就是我们通常所说的原料药。目前，同时定量分析和成分鉴别药物活

2、性成分（API）和它的无机反离子比较成熟的方法是使用几种不同的分析技术，但却是一个耗时又费力的过程。本应用注解描述了以一个离子色谱ICS-5000为平台同时使连用三个检测器正交分析的检测方法从而提高了检测效率增强了数据的可靠性。电喷雾式检测器（CAD）与紫外/可见检测器和质谱的联用，不仅可以同时分析API和反离子，还可以测定有机物中无机杂质的含量。 图1该仪器为进行分析时的安装示意图。一个可调流量分配器（1）可准确分配80L/min流量到质谱和0.42 mL/min流量到Corona CAD，当运行方法的总流量为0.5 mL/min时。 2材料与方法 样品制备 下列标准品均溶解在去离子水中。然

3、后，稀释成50L加950L乙腈/水（80:20）的注射浓度，具体如下： 盐酸维拉帕米：120g/mL 溴新斯的明：11g/mL 5,7-二羟基睾酮肌酐硫酸盐：200g/mL 方法参数 仪器：离子色谱ICS-5000 色谱柱：Sequant ZIC. - pHILIC; 4.6 x 150毫米，5m的 柱温：30 进样体积：10微升 流速：0.5毫升/分钟 流动相A：100 mM的醋酸铵（pH值4.6），甲醇，异丙醇，乙腈（15:5:20:60，v/v/v/v） 流动相B：30 mM醋酸铵（pH值4.6），甲醇，异丙醇，乙腈（50:5:20:25，v/v/v/v） 梯度：见表1 Corona：1

4、00pA范围，无过滤器 紫外检测器： 254nm LC - MS：接口：ESI 采集模式：扫描 极性：正 运行时间：1.00秒 工作电压：1.5kV 开始m / z = 100;结束m / z = 500 扫描速度：500 样本瓶：聚丙烯或认证的硼硅酸盐材质 表1梯度参数表 3结果与讨论 选择3种不同反离子盐原料药，以同样的色谱方法分析。梯度分析，考虑到保留API和其反离子的特异性，流动相B从20到70。图2-4被分为四个部分，每一部分都是从A到D，数据是在每个样本单独运行时采集的。紫外线信号下的保留时间比Corona CAD提前.10秒左右，质谱信号比Corona CAD滞后.12秒左右，由

5、于涉及到离子化和管路延迟。该系统设置能够定量和质量鉴别API中的每个组成成份。 使用Corona CAD还有很多优势，与其说类似于紫外/可见这类通用检测器，倒不如说是液相色谱/质谱的有力补充。Corona CAD可以检测质量相同的多种化合物。不同于紫外/可见光谱，Corona CAD并不需要调整波长，也不关依赖于生色基团。Corona CAD对不同结构的化合物有着相似的响应因子。因此，与此相关的优势是Corona CAD可根据峰面积百分含量对不同分析物的质量百分含量半定量，而紫外检测器无法实现。MS也没有这种能力，因为分析依赖于被测物的电离程度。 紫外/可见波长设置为254nm，因为每个感兴趣

6、的化合物都含有一个共轭的环状结构。确切的说每个分析物的紫外最大吸收值尚未确定。比较图A到图B显示了API中的每个化合物在紫外和CAD中的图谱。反离子在紫外图谱中看不到，但清晰显现在每个CAD图谱中。在5,7-二羟基睾酮肌酐硫酸盐图谱中，见图4，同时包含了API中的有机盐和无机盐。应用ZIC-pHILIC色谱柱可同时分析三种成分且都可被Corona CAD检测。 Corona CAD可以作为一个独立检测器来测定大量的有机化合物和盐离子。它也可以与其他检测器一起运行，提供正交技术可获得更多在单独使用一个检测器时可能丢失的信息。从这些实验收集的数据表明Corona CAD可与ICS-5000 / MS系统并用，提供重要信息，并协助进行方法开发。 Corona CAD与MS联用提供了一个机会，来获得可能在紫外/可见中丢失的个别化合物的质量鉴定。一旦待测物的组份被确定，进一步的量化工作可以通过独特的Corona CAD来完成，而ICS-5000/CAD-MS系统则被释放出来用于另外的项目。 g质谱维拉帕米（MW = 455.6）保留时间（3.6分钟）。扫描从100到500amu阳离子模式。 g。质谱新斯的明（MW= 2.233）保留时间5.7分钟。 图4A：5,7-二羟基睾酮（DHT）肌酐硫酸盐（上柱.2g