干扰素-γ对重症肌无力患者自身抗体的调节作用及相关性分析

1、    干扰素-对重症肌无力患者自身抗体的调节作用及相关性分析        摘要: 目的了解重症肌无力患者自身抗体的产生与细胞因子的关系。方法采用免疫酶点方法检测22例重症肌无力患者外周血AChRAb分泌细胞和IFN-分泌细胞。结果重症肌无力患者外周血AChRAb分泌细胞和IFN-分泌细胞均高于正常对照组，AChRAb 和IFN-之间呈高度正相关性，不同亚型之间两种分泌细胞差异均无显著性。结论重症肌无力患者体内有IFN-分泌细胞增高,IFN-与AChRAb的相关性提示IFN

2、-可能对重症肌无力患者自身抗体的产生有促进作用。关键词： 重症肌无力； AChRAb分泌细胞； IFN-分泌细胞中分类号： R746文献标识码： A文章编号： 1006-2963 (2000)04-234-04A Stady on the Regulatory Effect of IFN- on AChRAb Auto-antibodyWANG Wei,LING Zhen-fen(Department of Neurology,Shanghai First People Hospital,Shanghai 200080)NAN Zhen-hong(Department of Neurosurg

3、ery,Shanghai First People Hospital,Shanghai 200080)GUAN Hong-bing(Central Laboratory,Shanghai First People Hospital,Shanghai 200080)LU Chuan-zhen(Institute of Neurology,Shanghai Medical University, Shanghai 200040,China)ABSTRACT: ObjectiveTo investigate and verify the regulatory effect of secreting

4、IFN- on autoimmune antibody of myasthenia gravis( MG). MethodsIFN- secreting cells and AChRAb secreting cells were detected in 22 cases of MG patients by ELISPOT assay. ResultsBoth IFN-secreting cells and AChRAb secreting cells in MG were higher than that in control.There were good relations between

5、 IFN- secreting cells and AChRAb secreting cells.There was no significant diffenrences between subtypes of MG. ConclusionIFN- may play an important role in MG.Key words: myasthenia gravis; IFN- secreting cells; AChRAb secreting cells重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种T淋巴细胞依赖性的，抗体介导的自身免疫性疾病，其特征是骨骼肌极易疲劳，目前

6、已知MG是由于AChRAb的产生，并与突触后膜上AChR结合所致1；细胞因子在MG自身抗体的产生中起着重要作用2，干扰素-(IFN-)是一种重要的细胞因子，有学者发现MG患者体内有高水平的循环IFN-3，而有的学者则检测不到IFN-的存在4；在实验性的MG(EAMG)中，也有不相一致的结论5，6。我们曾检测了AChRAb 阳性和阴性MG患者外周血中IFN-分泌细胞，初步了解到二者之间的相互关系7。本实验进一步检测了MG患者外周血AChRAb分泌细胞和IFN-分泌细胞，并进行了相关分析，以期进一步了解IFN-在MG自身抗体产生中的作用。1材料和方法1.1研究对象实验组MG患者共22例，其中男性7

7、例，发病年龄在3270岁，平均51.4岁；女性15例，发病年龄为767岁，平均36.3岁。根据Osserman标准诊断和分型8，其中型9例，a型5例，b型4例，型4例。取样本期间，未服用任何药物者5例，仅服用抗胆碱酯酶药物者9例，服用强的松者6例，服用免疫抑制剂者2例。对照组取自年龄、性别基本相匹配的健康体检者22例，年龄1860岁，平均45.5岁。1.2材料与试剂40孔硝酸纤维膜板HA-801，华东师范大学化学系产品；RPMI 1640，Gibco公司；Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液(比重1.007+0.001)，上海试剂二厂；小鼠抗人IFN-单抗(MAHIFN-)、兔抗人IFN

8、-多抗(RAH IFN-)，MEDGENIX公司；生物素标记羊抗兔IgG(b-SARG)、生物素标记的羊抗人IgG(b-GAHG)、AEC，Sigma公司；ABC，Vector公司；人骨骼肌AChR提取液，参照Lu报道方法完成9。1.3方法采用单细胞水平检测抗体分泌细胞及细胞因子分泌细胞的免疫酶点方法(ELISPOT)10，分别以2 mg/L的MAHIFN-和5 mg/L的AChR包被40孔硝酸纤维膜板，用Ficoll-Hypaque液分离单核细胞，用RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度到1×106个/mL，各加200 L到已包被的硝酸纤维膜板每孔中，置37、5% CO2 (体积

9、分数)孵箱中培养48 h，前者依次加RAHIFN-、b-SARG，后者加b-GAHG，随后二者分别依次加入ABC、AEC，终止反应后显微镜下计数膜板上的酶点数。培养过程中每孔均加0.1 kg/L人骨骼肌AChR提取液10 L，均设复孔取平均值。2结果1.实验组和对照组外周血AChRAb 分泌细胞和IFN-分泌细胞的酶点数经两样本均数比较的t检验结果示，差异有显著性，即MG患者AChRAb 和IFN-分泌细胞均高于健康对照组(附表)。附表实验组和对照组AChRAb分泌细胞和IFN- t检验结果Tablet analysis of AChRAb secreting cells and IFN- s

10、ecreting cells in experiment and control(±s)AChRAbIFN-Experiment6.227±3.4114.818±2.843Control3.614±2.1823.181±1.816t3.0272.277P0.005P0.0250.025P0.012.实验组AChRAb 分泌细胞和IFN-分泌细胞的酶点数进行相关性分析结果示，r值为0.802，P0.0005，表明二者呈显著直线相关关系，也即IFN-与AChRAb 的产生有着密切关系。3.为了解药物是否对AChRAb 分泌细胞和IFN-分泌细胞产生

11、影响，我们按照不同药物的情况将MG患者分成4组，并进行方差分析，结果表明4组患者AChRAb 分泌细胞和IFN-分泌细胞均没有差别，P值均大于0.05。4.本组患者根据发病类型分成4组，对AChRAb 分泌细胞和IFN-分泌细胞进行方差分析，以了解与临床分型的关系，结果发现各类型MG患者之间AChRAb 分泌细胞 和IFN-分泌细胞没有差异,P值均大于0.05。 3讨论虽然约85%90%MG患者体内可以检测到AChRAb,但其滴度与疾病的严重程度无关，表明MG不仅只有体液免疫反应异常，而有关细胞因子对MG自身抗体的作用研究显得很重要。IFN-是一种重要的细胞因子，主要由T淋巴细胞受到抗原刺激后

12、产生，在免疫系统发挥重要作用，包括促进B细胞增殖分泌自身抗体。目前研究表明，IFN-无论在MG 或EAMG的发病过程中均具重要作用。本实验中，我们观察到MG患者外周血中AChRAb分泌细胞和IFN-分泌细胞较正常对照均增高，并且二者之间有很好的相关性，证明IFN-对MG自身抗体的产生起重要促进作用。但IFN-分泌细胞在多发性硬化等疾病中也增高，因此它不能作为MG的特异性标志。本实验结果显示，不同药物治疗的患者其分泌细胞差异无显著性，表明药物的治疗并不影响IFN-和AChRAb分泌细胞的产生，不管该药物治疗是否有效。各类型的MG患者，其外周血中IFN-和AChRAb分泌细胞均增高，表明IFN-的

13、作用与临床类型无关。作者简介：王炜(1966-)，女，湖北省人，硕士，主治医师。通讯地址：上海市第一人民医院神经内科，上海 200080。王炜(上海市第一人民医院 神经内科, 上海 200080)南振鸿(上海市第一人民医院 神经外科, 上海 200080)凌振芬(上海市第一人民医院 神经内科, 上海 200080)管红兵(上海市第一人民医院 中心实验室, 上海 200080)吕传真(上海医科大学神经病学研究所, 上海 200040)参考文献：1 Newsom-Davis J. Autoimmunity in neuromuscular diseaseJ. Ann NY Acad Sci， 19

14、88，540：25-38.2 Rouveix B,Blin O. Pharmacological basis of immunotherapy in autoimmune diseasesJ. Clin Neuropharmacol， 1993，16(2)：104-112.3 Kott E,Hahn T,Huberman M,et al. Interferon system and natural killer cell activatity in myasthenia gravisJ. QJM， 1990，76(281)：951-960.4 Confalonieri P,Antozzi C,

15、Cornelio F,et al. Immune activation in myasthenia gravis:soluble interleukin-2 receptor,interferon gamma and tumor necrosis factor- levels in patients? serumJ. J Neuroimmunol, 1993,48(1)：33-36.5 Asthana D,Fujii Y,Huston GE,et al. Regulation of antibody production by helper T cell clones in experimen

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