乌司他丁对心肺复苏后大鼠血清神经元特异性 烯醇化酶的影响及作

1、乌司他丁对心肺复苏后大鼠血清神经元特异性 烯醇化酶的影响及作用         11-04-03 11:08:00     编辑：studa20           作者：黄唯佳，陈寿权，周世方，李章平，王万铁，章杰，晏平，李惠萍，程俊彦 【摘要】  目的：探讨心肺复苏后大鼠血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）的变化、大脑皮层病理改变及乌司他丁的干预作用。方法

2、：成年雄性SD大鼠120只，随机分为假手术对照组、复苏组、乌司他丁组（药物组），每组按气管切开后（对照组）或自主循环恢复（ROSC）后（复苏组、药物组）0.5、3、6、12 h和24 h分为5个亚组（n=8）。复苏组和药物组采用窒息致大鼠心脏骤停和心肺复苏模型，药物组于ROSC后2 min内经颈动脉推注乌司他丁（100 000 U/kg）。对照组仅行麻醉、气管切开和血管穿刺。各组分别于各时间点取血和组织标本，以ELISA法检测血清NSE浓度，光镜下观察大脑皮层的病理改变。结果：与对照组比较，复苏组和药物组ROSC后各亚组各时间点血清NSE含量明显升高（P <0.05或P <0.01

3、）；与复苏组比较，药物组ROSC后6、12、24 h血清NSE含量显著降低(P <0.05或P <0.01)。药物组病理损害轻于复苏组。结论：乌司他丁通过降低血清NSE浓度对心肺复苏后脑损伤具有一定的保护作用。 【关键词】  心肺复苏；神经元特异性烯醇化酶；乌司他丁；脑损伤    Abstract:  Objective: To investigate the serum concentration of neuron-specific enolase (NSE) and the histopathological changes

4、of cerebral cortex in asphyxia rats with bolus ulinastatin for injection after cardiopulmonary resuscitation (CPR). Methods ：One hundred and twenty male adult SD rats were randomly divided into 3 groups: sham-operation control group， CPR group and Ulinastatin group. Each group was divided into 5 sub

5、groups (n =8) by various intervals (at 0.5，3，6，12，24 h after tracheotomy in control group or after ROSC in CPR group and ulinastatin group). Asphyxiation cardiac arrest and CPR model was used in CPR group and Ulinastatin group，with bolus ulinastatin for Injection 100 000 U/kg via arteria carotis wit

6、hin 2 min after ROSC. Anaesthesia，tracheotomy and vascular centesis were performed in rats without asphyxiation in sham-operation group. Samples were taken at each intervals of subgroups. Serum levels of NSE were measured with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The pathological changes of co

7、rtex were observed under light microscope. Results ：The serum levels of NSE elevated significantly after ROSC in CPR group and ulinastatin group than those in control group (P <0.05 or P <0.01). Serum NSE level decreased at 6，12 and 24 h after ROSC in ulinastatin group compared with CPR group

8、(P <0.05 or P <0.01). There were milder pathological changes in ulinastatin group than those in CPR group. Conclusion：Ulinastatin can alleviate cerebral injury after cardiopulmonary resuscitation by decreasing the level of serum neuron-specific enolase.    Key words:  cardi

9、opulmonary resuscitation；neuron-specific enolase；ulinastatin；cerebral injury    神经元特异性烯醇酶(neuron specific enolase，NSE)是神经元损伤的敏感性指标，具有高度特异性。有研究表明血清NSE水平与心脏骤停后脑损伤程度密切相关，可作为评价脑损伤程度及预后的早期敏感指标1-3。乌司他丁（ulinastatin，UTI）能减轻炎症反应，清除氧自由基，对脑损伤具有保护作用4。本实验采用窒息型大鼠心肺复苏（CPR）模型，观察了大鼠CPR后血清NSE蛋白及脑组织病理改变

10、及乌司他丁的干预作用，以进一步明确乌司他丁对CPR后脑损伤的保护作用及其机制。    1  材料和方法    1.1  实验动物及分组  成年雄性SD大鼠120只（由温州医学院实验动物中心提供），体重300400 g，平均（355.3±23.1）g，随机分为假手术对照组、复苏组、药物组，再分别按气管切开后（对照组）或自主循环恢复（ROSC）后（复苏组、药物组）0.5、3、6、12、24 h分为5个亚组，每个亚组8只。术前禁食12 h，自由饮水。    1.2

11、0; 大鼠心肺复苏模型制作及处理  采用窒息法并加以改进建立大鼠心肺复苏模型5。以5%水合氯醛0.35 g/kg腹腔注射诱导麻醉继以0.1 g·kg-1·h-1补充麻醉。实验参数设计和记录均参照复苏实验研究的Utstein模式6。复苏组和药物组于呼气末夹闭气管插管，待大鼠心跳停止（心电图呈室颤、停搏或电机械分离，颈动脉平均动脉压<30 mmHg）5 min后开放气道，进行CPR，并快速经颈动脉推注肾上腺素20g/kg，出现自主心律、脉搏波且颈动脉平均动脉压>60 mmHg并持续10 min以上判断为ROSC。药物组在ROSC后2 min 内经颈动脉推注

12、乌司他丁（广东天普生化医药股份有限公司，国药准字H19990134）100 000 U/kg，复苏组推注等量生理盐水。对照组动物仅行麻醉和气管插管、血管穿刺，不进行夹管窒息及CPR。空调控制室温2326 。各组大鼠体重、水合氯醛麻醉用量、基线血压、肾上腺素用量等参数比较，差异均无显著性(均P >0.05)。    1.3  血清NSE蛋白含量测定  按各分组时间点取大鼠颈动脉血2 mL，静置后离心（4 000 r/min，10 min），取上清液于EP管，置于70 冰箱保存，待测。采用ELISA法测定血清NSE蛋白浓度，试剂盒购自美国US

13、CNLIFE公司，测定步骤严格按试剂盒操作说明进行。    1.4  大脑枕叶皮层组织病理观察  各时间点取血后大鼠活去脑，取左侧枕叶皮层约5 mm×5 mm大小组织块，置于10%福尔马林中固定24 h后，脱水、包埋，常规石蜡切片，片厚4m，HE染色，脱水，封片后光镜观察并照相。    1.5  统计学处理方法  采用单因素方差分析，方差齐性用Levene检验。    2  结果    2.1  各组血清N

14、SE蛋白含量变化  与对照组比较，复苏组和药物组ROSC后0.5 h起血清NSE蛋白含量即开始升高，至24 h各时间点一直呈持续上升趋势，差异均有显著性（P<0.05或P<0.01）；与复苏组相比，药物组ROSC后6、12、24 h显著降低(P<0.05或P<0.01)（见表1）。    2.2  大脑枕叶皮层组织病理改变  光镜下，对照组神经元及胶质细胞大小正常，形态结构清晰，锥体细胞突起明显，细胞内结构清晰（见图1a）；复苏组ROSC后12 h神经元固缩、深染，细胞内结构不清，细胞周围空隙明显增大，胶质细胞周围间隙扩大，空泡样改变，血管周围间隙扩大（见图1b）；药物组ROSC后12 h脑组织病理改变要轻于复苏组，神经元大小基本正常，形态及细胞内结构模糊，胶质细胞轻度水肿，细胞和血管周围空隙有增大（见图1c）。    3 讨论    近年来，随着心肺复苏技术的进步和药物的不断更新，心肺复苏的成功率有所提高，但最终的出院生存率仍然为2