常用蛋白质分子量标准参照物

1、十、常用蛋白质分子量标准参照物高分子量标准参照中分子量标准参物低分子量标准参照蛋白质Mr蛋白质Mr蛋白质Mr肌球蛋白212 000磷酸化酶B97 400碳酸酎酶31 0006 一半乳糖甘酶116 000牛血清清蛋白66 200大豆胰蛋白酶制剂21 500磷酸化酶B97 400谷氨酸脱氢酶55 000马心肌球蛋白16 900牛血清清蛋白66 200卵清蛋白42 700溶菌酶14 400过氧化氢酶57 000醛缩酶40 000肌球蛋白（F1）8 100醛缩酶40 000碳酸酎酶31 000肌球蛋白（F2）6 200大豆胰蛋白酶抑制剂21 500肌球蛋白（F3）2 500溶菌酶14 400十一、层析

2、法常用数据表及性质（一） 离子交换纤维素目前常用的离子交换纤维素列于下表DEAE 纤维素形状长度（微米）交换当量（毫克当量/克）蛋白吸附容量（毫克/克）床体积（毫升/克）胰岛素(pH8.5)牛血清清蛋白（pH8.5）pH6.0pH7.5DE-22改良纤维性*124001.0+0.17504507.77.7DE-23同上（除细粒）184001.0+0.17504508.39.1DE-32微粒性（干粉）24631.0+0.18506606.06.3DE-52同上（溶胀）24631.0+0.18506606.06.3CM-纤维素溶菌酶7S T球蛋白pH5.0pH7.5(pH5.0)(pH5.0)CM

3、-22改良纤维性124000.6+0.066001507.77.7CM-23同上（除细粒）184000.6+0.066001509.19.1CM-32微粒性（干粉）24631.0+0.11,2604006.86.7CM-52同上（溶胀）24631.0+0.11,2604006.86.7*:英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如 DE-1 ,为长纤维性，长度1000微米。还有DE-11 ,纤维性，50250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克。（四）凝胶过滤层析介质的技术数据型号排阻的下限（Mr）分级分离的范围（Mr）膨胀后的床体积 （mL/g干凝胶）膨胀所需最少时间（室温，小时

4、）Bio-gel-P-21 6002002 0003.824Bio-gel-P-43 6005004 0005.824Bio-gel-P-64 6001 0005 0008.824Bio-gel-P-1010 0005 00017 00012.424Bio-gel-P-3030 00020 00050 00014.91012Bio-gel-P-6060 00030 00070 00019.01012Bio-gel-P-100100 00040 000100 00019.024Bio-gel-P-150150 00050 000150 00024.024Bio-gel-P-200200 0008

5、0 000300 00034.048Bio-gel-P-300300 000100 000400 00040.048注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.（三）琼脂糖凝胶的技术数据（琼脂糖是琼脂内非离子型的组分，它在0 4C, pH 49范围内是稳定的。）名称、型号凝胶内琼脂糖白分含量（W/W ）排阻的下限（Mr）分级分离的范围（Mr）生产J商Sagavac 10102.5 1051 M042.5 105Seravac Laboratories,Sa

6、gavac 887X1052.5 1047X105Maidenhead, EnglandSagavac662X1065 M042X106Sagavac4415M062M0515M06Sagavac22150 M065M0515M07Bio-GelA-0.5M100.5 105<1 X1042.5 M06Bio-Rad Laboratories,Bio-GelA-1.5M81.5 106<1 X1041.5 M06California,U.S.A.Bio-GelA-5M65X1061 M045M06Bio-GelA-15M415M054M0415M06Bio-GelA-50M250

7、M061 M0550M06Bio-GelA-150M1150 M061 M06150 M06凝胶过滤介质名称分离范围颗粒大小（m m）特性/应用pH稳定性工作耐 压(Mpa)最快流速（cm/h）Superdex 30<100002444肽类、寡糖、小蛋白等3120.3100Superdex 753000700002444重组蛋白、细胞色素3120.3100Superdex200 0100006000002444单抗、大蛋白3120.3100Superose 650005X1062040蛋白、肽类、多糖、核酸3120.430Superose 1210003000002040蛋白、肽类、寡糖

8、、多糖3120.730SephacrylS-100 HR1000 1000002575肽类、小蛋白3110.22039SephacrylS-200 HR50002500002575蛋白，如清蛋白3110.22039SephacrylS-300 HR100001.5 1062575蛋白、抗体3110.22039Sephacryl200008 X1062575多糖、具延伸结构的大分3110.22039S-400 HR子如蛋白多糖、脂质体Sepharose 6 Fast Flow100004 X106平均90巨大分子2120.1300Sepharose 4 Fast Flow6000020 X106

9、平均90巨大分子如重组乙型肝 炎表面抗原2120.1250Sepharose 2B7000040 X10660200蛋白、大分子复合物、病 毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖）490.00410Sepharose 4B6000020 X10645165蛋白、多糖490.00811.5Sepharose 6B100004X10645165蛋白、多糖0.0214Sepharose7000040 X0660200蛋白、大分子复合物、病490.00515CL-2B毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖）Sepharose CL-4B56000020 X0545165蛋白、多糖3130.01226S

10、epharose CL-6B10000-4X0645165蛋白、多糖3130.0230凝胶过滤介质名称分离范围颗粒大小(m m)特性/应用pH稳定性工作干凝胶溶胀体积(mL/g)溶胀最少平衡时间(h)最快流速(cm/h)室温沸水SephadexG-10<700干粉40120213233125SephadexG-15<1500干粉401202132.53.53125SephadexG-25Coarse10005000干粉100300脱盐及交换缓冲液 用213466225SephadexG-25 Medium10005 000干粉50150脱盐及交换缓冲液 用213466225Seph

11、adexG-25 Fine10005000干粉2080脱盐及交换缓冲液 用213466225SephadexG-25Superfine10005000干粉1040脱盐及交换缓冲液 用213466225SephadexG-50Coarse150030000干粉100300小分子蛋白质分离2109116225SephadexG-50Medium150030000干粉50150小分子蛋白质分离2109116225SephadexG-50 Fine150030000干粉2080小分子蛋白质分离2109116225SephadexG-50Superfine150030000干粉1040小分子蛋白质分离2

12、109116225SephadexG-75300080000干粉40120中等蛋白质分离210121524372SephadexG-75Superfine300070000干粉1040中等蛋白质分离210121524316SephadexG-10040001.5 X05干粉40120中等蛋白质分离210152048547SephadexG-100Superfine40001 X105干粉1040中等蛋白质分离210152048511SephadexG-15050003X105干粉40120稍大蛋白质分离210203072521SephadexG-150Superfine50001.5 X05干

13、粉1040稍大蛋白质分离21018227255.6SephadexG-20050006X105干粉40120较大蛋白质分离210304072511SephadexG-200Superfine50002.5 X05干粉1040较大蛋白质分离21020257252.8SephadexLH20100干粉特别为使用有机溶剂而设计。适合分离脂类、胆固醇、脂肪酸、激素、(嗜脂性)4 00025106维生素及其他小生物分子。此分离范围指以酒精为溶剂的分离（五）离子交换层析介质的技术数据离子交换介质名称最高载量颗粒大小（m m）特，性/应用pH稳定性 工作耐压(MPa最快 流速 （cm/h）SOURCE 15

14、Q25mg蛋白1521241800SOURCE 15S25mg蛋白1521241800Q Sepharose H.P.70mg BSA24 442120.3150SP Sepharose H.P.55mg 核糖核酸酶24 443120.3150Q Sepharose F.F.120mg HSA45 1652120.2400SP Sepharose F.F.75mg BSA45 1654130.2400DEAE Sepharose F.F.110mg HSA45 165290.2300CM Sepharose F.F.50mg 核糖核酸酶1003006130.2300Q Sepharose Bi

15、g Beads1003002120.31200 1800SP SepharoseBig Beads60mg BSA干粉40 1204120.31200 1800离子交换 介质名称最高 载量颗粒 大小 (m mm特性/应用pH稳定性 工作耐压 (MPa)最快 流速 (cm/h)QAE SephadexA-251.2mg甲状腺球蛋白80mgHSA干粉40 120纯化低分子量蛋 白、多肽、核昔以 及巨大分子(Mr>200000),在工业传统应用上具 有重要作用2100.11475QAE Sephadex A-501.2mg甲状腺球蛋白80mgHSA干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等

16、大小 的生物分子(30200000)2110.0145SP Sephadex C-251.1mg IgG 70mg牛段合血 红蛋白230mg 核糖核酸酶干粉40 120纯化低分子量蛋 白、多肽、核昔以 及巨大分子(Mr>200000),在 工业传统应用上具 有重要作用2100.13475SP Sephadex C-508mg IgG110mg牛段合 血红蛋白干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子(30200000)2100.0145DEAESephadex A-251mg甲状腺球蛋白30mg HAS140mg a-乳清蛋白干粉40 120纯化低分子量蛋 白、多肽、

17、核昔以 及巨大分子(Mr>200 000 ), 在工业传统应用上 具有重要作用290.11475DEAESephadex A-502mg甲状腺球蛋白110mg HSA干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子(Mr>200 000),在工作传统应用上具 有重要作用290.1145CM Sephadex C-251.6mg IgG 70mg牛段合血 红蛋白190mg 核糖核酸酶干粉40 120纯化低分子量蛋 白、多肽、核昔以 及巨大分子(Mr>200 000),在 工业传统应用上具 有重要作用6130.13475CM Sephadex C-507mg IgG

18、 140mg牛段合 血红蛋白120mg 核糖核酸酶干粉40 120批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子(30200000)6100.0145十二、常用缓冲溶液的配制方法1 .甘氨酸-盐酸缓冲液(0.05mol/L )X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI ,再加水稀释至 200毫升PHXYPHXY2.05044.03.05011.42.45032.43.2508.22.65024.23.4506.42.85016.83.6505.0甘氨酸分子量=75.07, 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。2 .邻苯二甲酸-盐酸缓冲液(0.05 mol/L

19、)X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾+ 0.2 mol/L HCl ,再加水稀释到 20毫升pH(20 C)XYpH(20 C)XY2.254.0703.251.4702.453.9603.450.9902.653.2953.650.5972.852.6423.850.2633.052.022邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23, 0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含 40.85克/升3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液PH0.2mol/LNa2HPO4 (<#)0.1 mol/L柠檬酸(<#)PH0.2mol/LNa2HPO4(<#)0.1mol/L柠檬酸(<#)2.20.

20、4010.605.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.066.213.226.783.45.7014.306.413.856.153.66.4413.566.614.555.453.87.1012.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618

21、.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55Na2HPO4分子量=14.98, 0.2 mol/L 溶液为 28.40 克/升。Na2HPO4-2H2O 分子量 =178.05, 0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。C4H2O7 H2O 分子量=210.14, 0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。4 .柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液PH钠离子浓度（mol/L ）柠檬酸（克）C6H8。7 - H2O氢氧化钠（克）NaOH 97%盐酸（毫升）HCl （浓）最终体积 （升）2.20.2021084160103.1

22、0.2021083116103.30.2021083106104.30.202108345105.30.3524514468105.80.4528518610510 106.50.38266156126使用时可以每升中加入 1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量 50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ）PH0.1 mol/L柠檬酸(<#)0.1 mol/L柠檬酸钠(<#)PH0.1 mol/L柠檬酸(<#)0.1 mol/L柠檬酸钠(<#)3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.7

23、3.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.64.810.39.29.710.86.61.418.6柠檬酸C6H8。7-H2O：分子量210.14, 0.1 mol/L溶液为21.01克/升。柠檬酸钠Na3 C6H5。7-2H2O：分子量294.12, 0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。6.乙酸-乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L )pH(18 C)0.2 mol/LNaAc(<#)

24、0.3 mol/LHAc(<#)pH(18 C)0.2 mol/LNaAc(<#)0.3 mol/LHAc(<#)2.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60Na2Ac 3H2O 分子量 =136.09, 0.2 mol/L 溶液为 27.22 克/升。7 .磷酸盐缓冲液(1)磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液(0.2)PH0.2 mol/LNa2HPO4(<

25、#)0.3 mol/LNaH2PO4(<#)PH0.2 mol/LNa2HPO4(<#)0.3 mol/LNaH2PO4(<#)5.88.092.07.061.039.05.910.090.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.481.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57.789.510.56.637.562.57.891.58.56.743.556.57.993.0 94.77.06.849

26、.551.08.05.36.955.045.0Na2HPO4 2H2。分子量=178.05,0.2 mol/L溶液为85.61 克/升。Na2HPO4 2H2O分子量=358.22,0.2 mol/L溶液为71.64 克/升。Na2HPO4 2H2。分子量=156.03,0.2 mol/L溶液为31.21 克/升。(2)磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液(1/15 mol/L )HPmol/L/15Na 2HPO4(<#)mol/L/15KH 2P。4(<#)HPmol/L/15Na 2HPO4(<#)mol/L/15KH 2P。4(<#)40.109.9077.003.00

27、.920.509.50.178.002.0051.009.0079.001.00.292.008.00.389.500.5053.007.0079.750.25.914.006.00.739.900.1065.005.00810.000.246.004.00.0468.47.3468.64.6768.81.186.98Na2HPO4 2H2。分子量 =178.05, 1/15M 溶液为 11.876 克/升。KH2P。4分子量 =136.09, 1/15M 溶液为 9.078 克/升。8 .磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(0.05M)X毫升0.2M K 2P。4 + Y毫升0.2N NaOH加水稀

28、释至29毫升pH(20 C )X (<#)Y (<#)pH(20 C)X (<#)Y (<#)5.850.3727.052.9636.050.5707.253.5006.250.8607.453.9506.451.2607.654.2806.651.7807.854.5206.852.3658.054.6809.巴比妥钠-盐酸缓冲液（18C）PH0.04M巴比妥钠溶液0.2V盐酸PH0.04M妥钠溶液升）巴比（毫0.2N盐酸（毫升）6.810018.48.41005.217.010017.88.61003.827.210016.78.81002.527.410015.3

29、9.01001.657.610013.49.21001.137.810011.479.41000.708.01009.399.61000.358.21007.21100巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升10. Tris -盐酸缓冲液（0.05M , 25C）HOCH2NH250毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至 100毫 升。PHX(<#)PHX(<#)7.1045.78.1026.27.2044.78.2022.97.3043.48.3019.97.4042.08.4017.27.5040.38.5014

30、.77.6038.58.6012.47.7036.68.7010.37.8034.58.808.57.9032.0 29.28.907.08.00三羟甲基氨基甲烷（Tris） HOCH2 CH2OH分子量=121.14;0.1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。11 .硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）PH0.05M硼砂 (<#)0.2M 硼砂 (<#)PH0.05M硼砂 (<#)0.2M 硼酸 (<#)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.0

31、7.09.08.02.0硼砂Na2B4O7 H2O,分子量=381.43;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。硼酸H2BO3,分子量=61.84,0.2M溶液为12.37克/升。硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。11 .硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）PH0.05M硼砂 (<#)0.2M 硼酸 (<#)PH0.05M硼砂 (<#)0.2M 硼酸7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.0 2.08.03.07.09.08.0硼砂 Na2B407 10H2O,分子量=381.43;0.05

32、M 溶液（=0.2M 硼酸根）含 19.07 克/升。硼酸H2BO3,分子量=61.84, 0.2M溶液为12.37克/升。硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。12 .甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（0.05M）X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升0.2NnaOH加水稀释至200毫升pHXYpHXY8.6504.09.65022.48.8506.09.85027.29.0508.810.05032.09.25012.010.45038.69.45016.810.65045.5甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升。13 .硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）X毫升0.05M硼砂+Y毫

33、升0.2NNaOH加水稀释至200毫升PHXYPHXY9.3506.09.85034.09.45011.010.05043.09.65023.010.15046.0硼砂 Na2B4O7 10H2O,分子量=381.43;0.05M 溶液为 19.07 克/升。14 .碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Ca2+、Mg2+存在时不得使用PH0.1MNa2CO3（#）0.1MN2HCO3（毫升）20 c37 c9.168.77199.409.12289.519.40379.789.50469.909.725510.149.906410.2810.087310.5310.288210.8310.579

34、1Na2CO2 10H2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为 28.62 克/升。N2HCO3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。15. “PBS缓冲液PH7.67.47.27.0H2O100010001000100mlNaCl8.58.58.58.5gNa2HPO42.22.22.22.2gNaH2PO40.10.20.30.4g十三、实验室中常用酸碱的比重和浓度名称分子式分子量比重面分浓度% （W/W）当量浓度（粗略）N配1升1N 溶液所需毫升数盐酸HCl36.471.1937.212.0841.1835.411.81.1020.06.0硫酸H2SO498.091.849

35、5.636.0281.1824.86.0硝酸HNO263.021.4270.9816.0631.4065.314.51.2032.366.1冰乙酸CH 3COOH60.051.0599.517.459乙酸CH 3COOH98.06366.0磷酸H2PO435.051.7185.015,30,45（依反应而定）67（以 15N计）氨水NH4OH0.9015670.90427.014.3700.9125.013.40.9610.05.6氢氧化钠溶液NaOH40.01.550.01953十四、硫酸钱饱和度的常用表1.调整硫酸钱溶液饱和度计算表（25C）硫整硫酸俊终浓度，饱和度102025303335

36、40455055606570758090100每1升溶液加固体硫酸钱的克数硫 酸 俊 初 浓 度056114144176196209243277313351390430472516561662767105786118137150183216251288326365406449494592694,2029597891123155190225262300340382424520619,253049619312515819323026730734839048558330193062941271621982352733143564495463312437410714217721425229233342

37、6522%饱 和 度353163941291642002381783194115064031639713216820524528537546945326599134171210250339431503366101137176214302392553367103141179264353603469105143227314653470107190275703572153237753611519880771579079在25c下，硫酸钱溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸钱的克数。2.调整硫酸钱溶液饱和度计算表（0C）在0 c硫酸俊终浓度，饱和度2025303540455055606570

38、7580859095100每100毫升溶液加固体硫酸钱的克数硫010.613.416.419.422.625.829.132.636.139.843.647.651.655.960.365.069.7酸57.910.813.716.619.722.926.229.633.136.840.544.448.452.657.061.566.2俊105.38.110.913.916.920.023.326.630.133.737.441.245.249.353.658.162.7初152.65.48.211.114.117.220.423.727.130.634.338.142.045.050.354

39、.759.2浓2002.75.58.311.314.317.520.724.127.631.234.938.742.746.951.255.7度2502.75.68.411.514.617.921.124.528.031.735.539.543.647.852.23002.85.68.611.714.818.121.424.928.532.336.240.244.548.8%3502.85.78.711.815.118.421.825.429.132.936.941.045.3饱4002.95.88.912.015.318.722.225.829.633.537.641.8和4502.95.9

40、9.012.315.519.022.626.330.234.238.3度5003.06.09.212.515.919.423.026.830.834.85503.16.29.512.916.419.723.527.331.36003.16.39.713.216.820.123.127.96503.16.39.713216.820.524.47003.26.59.913.417.120.97503.26.610.113.717.48003.36.710.313.98503.46.810.59003.47.09503.51000在0c下，硫酸钱溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸

41、钱的克数。卜五、常见蛋白质分子量参考值（单位：dalton ）蛋白质分子量肌球蛋白myosin甲状腺球蛋白thyroglobulin3 -半乳糖 口酶3 -galactosidase副肌球蛋白paramyosin磷酸化酶 aphosphorylase a血清白蛋白serum albuminL-氨基酸氧化酶L-amino acid oxidase地氧化氢酶catalase内酮酸激活酶pyruvate kinase谷氨酸脱氢酶glutamate dehydrogenase亮氨酸氨肽酶glutamae dehydrogenase丫 -球蛋白，H 链丫 -globulin, H chain延胡索酸酶（反丁烯二酸酶）fumarase卵白蛋白ovalbumin醇脱氢酶（肝）alcohol dehydrogenase （liver）烯醇酶enolase醛缩酶aldolase肌酸激酶creatine kinase胃蛋白酶原pepsinogenD-氨基酸氧化酶D-amino acid oxidase醇脱氢酶（酵母）alcohol dehydrogenase （yeast）220,000165,000130,000100,00094,00068,00063,00060,00057,00053,00053,00050,00049,00043,00041,00041,00040,00040,00040,